回答下列（一）、（二）小题：

(一)转基因抗病香蕉的培育过程如下图所示。图中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等为限制酶，质粒和抗病基因上的箭头表示限制酶的切割位点。下表表示四种限制酶的识别序列及酶切位点。

（1）若要获得抗病基因，不能用限制酶SmaⅠ对图中对应的位点进行切割，因为若在SmaⅠ位点进行切割会________________________。要获得含抗病基因的重组质粒可用___________和_____限制酶切割质粒。它们能使特定部位的两个脱氧核苷酸之间的____________________ 断开。

（2）卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长。欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，重组质粒中应同时含有_________________基因，作为标记基因。

（3）将重组DNA分子导入香蕉受体细胞的常用方法是_______________法。

（4）图中导入抗病基因的香蕉组织块一般需要通过________________的方法，可培育成能表现新性状的植株，该方法依据的原理是：_______________________________。

(二)图甲是抗寨卡病毒（一种RNA病毒）单克隆抗体制备的过程图，图乙是克隆羊培育过程示意图，请据图回答下列问题：

（1）图甲和图乙所示的过程中，应该都会用到的动物细胞工程技术是____________。

（2）图甲中②过程常需要借助动物细胞融合技术，其过程中动物细胞融合所特有的方法是使用____________诱导细胞融合。

（3）利用基因工程生产寨卡病毒的疫苗时，需要将重组DNA导入细菌细胞中，这一步骤常用的方法是____________。

（4）核移植时受体应选用_____________期的卵母细胞。

（5）在制备单克隆抗体的过程中，进行了两次筛选，第一次筛选是利用HAT______（填“选择”或“鉴别”）培养基，由于骨髓瘤细胞无法在HAT培养基上生存，故只有____________细胞能长期存活；第二次筛选获得____________。

（6）通过上述方法得到的抗体与常规的血清抗体相比最大的优点是______________。

为治疗糖尿病，研究人员提出了如下图的方法。

（2）核移植的受体细胞一般选用MⅡ期卵母细胞。进行相关显微操作时，一般用微型吸管一并吸出               。  

（3）细胞在体外培养时，除培养液提供必需的营养条件外，还需要有        。上图所获的胚胎干细胞可由       中分离出来，在功能上具有         。

（4）利用PCR技术扩增正常胰岛素基因的前提条件是        。将正常胰岛素基因导入胚胎干细胞并维持稳定和表达的过程，称为        

（5）“定向诱导”的目的是使重组细胞B发生      ，从而形成功能专一的胰岛类似细胞。

（6）该治疗糖尿病的方法与相比异体移植，突出的优点是         。

【生物选修3】

治疗性克隆是指把患者体细胞的细胞核移植到去核卵母细胞中，构建形成重组胚胎，体外培养到一定时期分离出Es细胞，获得的ES细胞定向分化为所需的特定类型细胞(如神

经细胞、肌肉细胞和血细胞)，用于治疗。请回答下列问题:

(1)治疗性克隆采用的技术有                   和干细胞培养。ES细胞可从重组胚胎培养到囊胚时期的                  中分离。

(2)科学家将患者的体细胞核植入去核的卵细胞中，而不是直接用体细胞进行细胞培养的原因是                      。

(3)在培养液中加入            可诱导ES细胞定向分化成所需的各种特定类型细胞，体现了该细胞在功能上,具有      的特性。

(4)某次科学家将体外培养的ES细胞进行诱导使其定向分化为胰岛B细胞，并进行了胰岛素释放实验：控制培养液中 的浓度，检测细胞分泌的胰岛素的量，下图为实验结果,据此分析确认ES细胞诱导成功。得到此结论的依据是              。

[生物—选修3：现代生物科技专题]

回答下列问题：

（1）图中A表示正常细胞核，染色体数为2n，则其性染色体的组成可为____________。过程①表示去除细胞核，该过程一般要在卵母细胞培养至适当时期再进行，去核时常采用_______的方法。②代表的过程是__________。

（2）经过多次传代后，供体细胞中______的稳定性会降低，因此，选材时必须关注传代次数。

（3）若获得的克隆动物与供体动物性状不完全相同，从遗传物质的角度分析其原因是______。

（4）与克隆羊“多莉（利）”培养成功一样，其他克隆动物的成功获得也证明了__________。

科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图：

（1）步骤①的技术名称是                         。

（2）将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有                 。

（3）步骤③中，需要构建含有干扰素基因的                       。由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，故构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从下图A、B、C、D四种单链DNA片段中选取                   作为引物。对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，能否使用SmaI,并说明原因是                                        。

［生物——选修3现代生物科技专题］

下图是利用现代生物工程技术治疗遗传性糖尿病（基因缺陷导致胰岛B细胞不能正常合成胰岛素）的过程图解，请据图回答：

（1）图中①、②所示的结构分别是     、     。

（2）图中③所示的生物工程技术分别是                。

（3）过程④通常用②做受体细胞的原因是              。

（4）过程④的完成需要用到的基因操作工具有   、     、    。

（5）图示方法与一般的异体移植相比最大的优点是           。

为进行牛胚胎移植，可通过下列途径获得优良胚胎，请回答相关问题：

(1)在途径①中，为一次性获得数目较多的胚胎，可对优良母牛注射________。体内受精一段时间后，可通过________操作收集早期胚胎用于移植；若进行体外受精，应使用培养到____  ____的卵母细胞。

(2)在途径②中，以成熟体细胞为供体进行核移植成功率很低，而以胚胎细胞为供体成功率会显著提高，原因是________。在途径③中，将目的基因导入受精卵常用的方法是________；若用DNA分子杂交技术检测导入是否成功，需以____    ____为模板制作探针。

(3)优良胚胎移植前需培养到____  ____时期，且受体母牛需处于_______  _状态。

下面是绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图同答:

（1）分析可知，科学家获取绿色荧光蛋白基因所运用的限制酶是图中所示的________，最终获得的绿色荧光蛋白基因的末端类型属于_________________。

(2)图示工程中，将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞的过程③称为_________，常用的方法是_______________。

(3)图示中，作为受体细胞的去核卵母细胞一般处在_______________期，常通过______(物理方法)进行激活，使其完成减数分裂和发育进程。

(4)培养图示重组细胞时，将细胞所需的营养物质按其种类、数量严格配制而成的培养基称为____________培养基。通常在培养基中还需要加入适量的___________等天然成分通入氧气主要作用是____________________________。

(1)图中①、②所示的结构分别是___________、________________，④过程常用的方法是___________。

(2)图中③、⑤所示的生物工程技术分别是             、            ，利用___________技术快速扩增健康胰岛B细胞基因的过程中，目的基因受热形成单链并与引物结合，在          酶的作用下延伸形成DNA，该技术的原理是__________________。

(3)过程④通常用②做受体细胞的原因是____________________________________。

(4)图示治病的方法叫做______________，与一般的异体移植相比最大的优点是 ______________________。