为探究SHH基因与角化囊肿发生的相关性，科研人员利用SHH基因的非模板链转录合成的RNA作为探针，进行分子杂交实验，以检测SHH基因在角化囊肿中的表达情况。其基本流程如下图（Amp表示氨苄青霉素抗性基因；LacZ基因被SHH基因插入后不表达）。

请回答：

（1）获得大量目的基因常用________技术，其原理是_________。

（2）步骤②中，用Ca^2＋处理大肠杆菌，使之成为________细胞，然后导入重组载体。实验中，用添加氨苄青霉素的培养基培养大肠杆菌，未导入质粒的细菌将会死亡，原因是这些细菌不含有________基因。

（3）能表达LacZ基因的大肠杆菌在含有IPTG和X-gal的培养基上会形成蓝色菌落，易于识别。根据上述原理可以初步判断_______（填“蓝色”或“白色”）菌落中的大肠杆菌为重组菌。

（4）将制备的探针加入角化囊肿切片中，探针将与________形成杂交带，进而判断SHH基因的转录情况。

（5）除了基因工程外，细胞工程和胚胎工程也在人类生活中发挥了巨大作用。例如“试管婴儿”自诞生就引起了世界科学界的轰动，甚至被称为人类生殖技术的一大创举。也为治疗不孕不育症开辟了新途径。“试管婴儿”的诞生实际上结合了________、早期胚胎培养、胚胎移植等多种技术手段。再如，通过动物细胞杂交技术制备的单克隆抗体具有__________和灵敏度高等特性，因而广泛应用于疾病的检测、肿瘤的定位等方面。

下面是获取某种二倍体抗虫植株的技术流程图：

请完成下列问题：

（1）上图中二倍体植物愈伤组织是外植体在适宜的_________________及温度、PH等条件下培养形成的，这一过程被称为___________。

（2）在获取抗虫植物的技术流程中，______________ 、__________________和工具酶等物质均来自微生物。

（3）下图中A、B、C、D四段DNA单链是根据毒蛋白基因对应片段合成的。假定在该DNA复制中，其中以a链为模板的复制，其子链是由左向右延伸的。

则在流程图的过程①中应选择___________（填字母）作为引物。如果选取的引物，使过程①的效率很低，则所选的引物中可能存在___________和_______________。

（4）如果要获取检测毒蛋白的单克隆抗体，通常要在动物细胞工程中_________和__________ 等技术的支持。

下图为细胞融合的简略过程示意图，请据图完成问题：

（1）若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已用酶处理去掉了细胞壁，所用的酶可能是____________，由此生成的A和B称为____________；A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法有离心、振动、电激。融合完成的标志是____________。

（2）若A、B是动物细胞，一般取自幼龄动物的器官、组织，然后用使其分散开来；A、B到C的过程中，常用的不用于植物细胞工程的方法是用____________诱导细胞融合。对融合得到的D进行大规模培养时需要提供的气体环境为____________，其中CO₂的作用是____________。此外，培养液还应进行无菌处理，通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防____________。

（3）若A为骨髓瘤细胞，B为经免疫的B淋巴细胞，那么D称为____________，这种细胞既能大量繁殖，又能产生____________。

（4）若该过程用于单克隆抗体的制备，应筛选出符合要求的D，为了大规模的生产单克隆抗体，还需对D进行第二次筛选，第二次筛选的目的是______________________。 

[生物选修3：现代生物科技专题]

下图表示利用小鼠胚胎干细胞（ES细胞）做的研究，请分析回答下列问题：

（1）a过程表示基因工程，则其核心步骤是______________________________________。

（2）ES细胞在饲养层细胞上，能够维持__________状态，为检测致癌基因是否已捕入ES细胞的DNA，可采用__________________技术。

（3）c过程的胚胎培养液成分除一些无机盐和有机盐类外，还需添加____________________________以及血清等物质。

（4）d过程移入的胚胎能够存活，是因为受体子宫并不会对其发生____________，同时能够与受体子宫建立正常的____________________________联系。对移植前的胚胎进行性别鉴定时，宜取囊胚期的__________________细胞进行鉴定。

（5）用肝癌细胞作抗原刺激B淋巴细胞，再将此淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后经筛选、细胞培养，获得抗癌细胞的单克隆抗体。该产物与____________________相结合制成“生物导弹”，从而定向杀死小鼠体内的肝癌细胞。

下图是利用现代生物技术获取满足人类需求的细胞及细胞产品的基本操作过程图，据图回答：

（1）基因工程中体外大量扩增①的技术是      技术，该过程需要用到的酶是     。

（2）在基因工程构建的②中与目的基因表达相关的必须结构是            。

（3）③过程中，在细胞融合环节中用到的不同于植物细胞杂交技术的诱导条件是           ，此过程最终筛选得到的细胞Y具有的特点是                        。

（4）④过程得到的细胞悬液需要在5% CO₂条件中培养，原因是             。供体细胞Z一般选择培养的10代以内细胞，原因是                      。

（5）核移植技术中供体细胞Z导入细胞Y中需用                方法促进细胞融合。

下图可表示细胞融合技术的一些过程，请据图回答：

（1）若A、B细胞为动物细胞，从A、B细胞到C细胞的过程中，常用灭活的病毒作为诱导剂来诱导细胞融合。A、B融合为C的过程说明了细胞膜具有                   特性。A、B的融合常用的化学试剂是          

（2）若A、B细胞为植物细胞，那么这样的细胞已经用酶解法脱掉了            。这种酶可能是          酶，由此生成的A和B细胞称为              。新细胞形成的标志是              。

（3）若A细胞为骨髓瘤细胞，B细胞为效应B淋巴细胞，那么D细胞称为              细胞。

(1)在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因(kan)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程。请据图回答：

①A过程需要的酶有_______________________________________________。

②要把重组质粒导入土壤农杆菌，首先必须用________处理土壤农杆菌，使土壤农杆菌转变为________态；然后将____________________在缓冲液中混合培养完成转化过程。

③含有重组质粒的土壤农杆菌侵染离体棉花叶片组织后，将离体棉花叶片组织培养成再生植株要经过[D]________和[E]________。如要确保再生植株中含有抗虫基因，可在D过程的培养基中加入________。

④如想利用分子杂交技术检测再生植株中的抗虫基因是否转录，应该用____________作为探针与mRNA杂交。

(2)Ⅰ.下图为某生物工程操作流程模式图，请据图回答下列问题：

①若该图表示植物体细胞杂交，则C的名称是            ，②过程所用培养基中除一定营养物质外，还需要添加               。

②若此图表示单克隆抗体的制备，①过程常用的试剂是              ，单克隆抗体的化学本质是                   。

Ⅱ.人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，其疫苗生产和抗体制备的流程如图：

请回答下列问题：

①过程①表示的是________；过程②表示的是基因工程操作步骤中________。基因工程的核心步骤是_______________________。

②若只考虑两个细胞的融合，则浆细胞与骨髓瘤细胞融合后的细胞类型有_____种。

③将X进行第一次筛选的培养基名称是____________，最后，可以将杂交瘤细胞在体外条件下做大规模培养，或_____________________。

①要使人血清白蛋白基因在转基因奶牛的乳腺细胞中表达，应将其与                      基因的启动子等调控组件重组。

②为使供体母牛一次排出多枚卵母细胞，常对其注射               。采集的精子需要经过               ，才具备受精能力。

③过程①将重组表达载体导入受精卵常用的方法是              。过程②包括 技术和胚胎移植技术；在进行胚胎移植时，需对受体母牛进行       处理。

④为了获得母奶牛，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行            。若要检测牛奶中是否含有人血清白蛋白，可采用              技术。

⑤为使人血清白蛋白基因在后代中长期保持，可将转基因奶牛体细胞的细胞核转入中构成重组细胞，使其发育成与供体具有相同性状的个体，该技术称为                                          。

已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖。将这两种细胞在培养皿中混合，加促融剂促进细胞融合，获得杂种细胞，并生产单克隆抗体。请回答：

⑴生产单克隆抗体时，一般不直接利用一个B淋巴细胞，主要原因是________________________________________________________________________。

⑵①过程中，常用的与植物细胞融合相同的诱导剂是________________________。

⑶②过程为________培养，培养液中还需通入气体，其中通入CO₂的目的主要是________。

⑷④表示杂交瘤细胞的扩大培养，其既可在体外培养，也可注射到小鼠________内培养。体内培养与体外培养相比，其优点是_____________________________________________。

⑸为了从培养液中分离出杂种细胞，需在③过程向培养液中加入________，理由是杂交瘤细胞可利用__________________途径合成DNA，从而才能在该培养液中增殖。