[生物——选修3现代生物科技专题]

自然条件下，哺乳动物不发生孤雌生殖。2014年3月，云南农大科研团队把猪卵母细胞进行人为的孤雌激活处理，使其发育成胚胎，移植到代孕母猪体内，获得世界上第一批成活的孤雌生殖克隆猪。这种克隆猪不同于核移植获得的克隆猪，现将两种技术进行比较。

（1）      图中过程①②③④是获得孤雌克隆猪的技术流程，那么获得核移植克隆猪的技术流程是过程     （填序号）。

（2）孤雌生殖克隆猪仍然是二倍体生物，但由于缺少          方亲本基因，导致其生长发育中出现多种问题，但给研究者提供了很好的材料。

（3）孤雌激活处理其实质是要激活卵母细胞        ，使其发育成早期胚胎，得到克隆猪。

（4）体细胞核移植技术中也会用到卵母细胞，需要选择            时期的卵母细胞，并用微型吸管吸出                    。

（5）早期胚胎移植时，必需移植到同种              的其他雌性动物子宫中，才可能移植成功。

（6）可以从良种不同的克隆猪中提取mRNA进行研究，也可通过        方法得到多种cDNA，并通过              技术扩增产物。

科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图1。图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示质粒，据图回答：

（1）重组细胞的细胞核来自______________细胞。

（2）将基因导入ES细胞而不是导入上皮细胞是因为ES细胞具有______________。

（3）步骤③，需要构建含有干扰素基因______________。

（4）从基因组数据库中查询干扰素基因的核苷酸序列，以便根据真训练设计合成引物用于PCR扩增，PCR扩增过程至少第____________轮循环后才能获得纯目的基因片段（仅含引物之间的序列）。

（5）对于干扰素基因片段和质粒进行双酶切时，可选用限制酶的组合为____________或____________。

（6）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发___________色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可以采用___________的方法。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗。请回答有关问题：

（1）取Rag₂基因缺失小鼠上皮细胞的细胞核移入去核的卵母细胞，在采集卵母细胞前，需要用________处理供体。

（2）重组细胞培养到囊胚期，可从其________中分离出ES细胞，该细胞在形态上表现为________。

（3）将Rag₂基因导入ES细胞前，需先构建________，使其能在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使其能够________。

（4）筛选含有基因表达载体的受体细胞的依据是________。ES细胞在功能上具有发育的全能性，可通过________使其分化为造血干细胞，然后移植到Rag₂基因缺失的小鼠体内。

[选修3—现代生物科技专题]

下图是利用现代生物工程技术治疗遗传性糖尿病(基因缺陷导致胰岛B细胞不能正常合成胰岛素)的过程设计图解。请据图回答：

(1)图中①、②所示的结构分别是           、              。

(2)图中③、④所示的生物工程技术分别是        、         。

(3)过程③通常用去核卵细胞作受体细胞的原因除了它体积大、易操作，含有营养物质丰富外，还因为                                      。

(4)过程④通常采用的方法是                                    。

(5)过程④的完成需要用到的基因操作工具有                      。

(6)图示方法与一般的异体移植相比最大的优点是                  。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

人的血清白蛋白在临床上需求量很大，通常从人血液中提取。由于艾滋病病毒（HIV）等人类感染性病原体造成的威胁与日俱增，使人们对血液制品顾虑重重。现应用一定的生物工程技术，将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，利用牛的乳腺细胞生产血清白蛋白成为可能。大致过程如下：

请回答：

（1）①过程为显微注射技术，①之前实现基因重组使用的工具酶是________。获得大量白蛋白基因的方法叫做多聚酶链式反应，简称________，其中需要使用________酶。

（2）②过程中需要使用的技术有胚胎移植和胚胎体外培养及胚胎分割等。实验过程需将含有重组基因的细胞核，注入去核的受精卵细胞中，重组细胞必需在体外培养至________时期，才能进行早期胚胎移植。

（3）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母牛注射________，使其超数排卵。采集的精子需要经过________处理，才具备受精能力。

（4）为了获得母奶牛，早期胚胎移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定，检测细胞选择囊胚的滋养层细胞是避免________。

（5）“膀胱生物反应器”与“乳腺细胞生物反应器”相比，优点是________。

(1)步骤①核移植前为获得更多的卵母细胞，采用________处理使其超数排卵，从输卵管中冲出的卵子处于________时期，去除卵母细胞的________(结构)。

(2)培养细胞过程中，要置于CO₂培养箱中，其中CO₂的主要作用是________。

(3)图中ES细胞来自________时期的________细胞。步骤③中需要先利用PCR技术扩增正常基因片段，可以根据正常基因的________设计引物，PCR技术中使用的酶为________。为检测目的基因是否表达，采用的方法为________。

（1）短时间内大量扩增抗凝血酶Ⅲ蛋白基因经常采用                 技术。过程①是将抗凝血酶Ⅲ蛋白基因导入受精卵，该过程常用的方法是                 。            

（2）过程②包括             技术和               技术；为获得多只与该转基因奶牛遗传物质相同的牛犊，在过程②还可使用          技术。

（3）若要检测牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白，可采用              技术。

（4）如果检测发现抗凝血酶Ⅲ蛋白基因被成功导入了受精卵，但却没有检测到抗凝血酶Ⅲ蛋白的存在，那应该考虑分别位于目的基因首端的          和末端的          没有设计好，应从这方面进一步改善。

请回答：

（1）图中重组细胞的细胞核来自            细胞，早期胚胎移入受体子宫后继续发育，经桑椹胚、囊胚和             胚最终发育为克隆猪。

（2）在PCR过程中可检测出cDNA中Bcl-2 cDNA的分子数，进而计算总mRNA中Bcl-2 mRNA的分子数，从而反映出Bcl-2基因的转录水平。

①图中X表示                 过程。

②从基因组数据库中查询Bcl-2 mRNA的核苷酸序列，以便根据这一序列设计合成                用于PCR扩增，PCR扩增过程第一轮循环的模板是                    。