据报道，尽管存在巨大争议，世界上首例“三亲婴儿”仍然于2016年4月在墨西哥诞生。三亲婴儿的培育技术路线如下。

回答下列问题：

（3）三亲婴儿与体细胞克隆动物多利羊在遗传物质来源上的主要区别：______________________________________________________________________________。

为治疗糖尿病，研究人员提出了如下图的方法。

（2）核移植的受体细胞一般选用MⅡ期卵母细胞。进行相关显微操作时，一般用微型吸管一并吸出               。  

（3）细胞在体外培养时，除培养液提供必需的营养条件外，还需要有        。上图所获的胚胎干细胞可由       中分离出来，在功能上具有         。

（4）利用PCR技术扩增正常胰岛素基因的前提条件是        。将正常胰岛素基因导入胚胎干细胞并维持稳定和表达的过程，称为        

（5）“定向诱导”的目的是使重组细胞B发生      ，从而形成功能专一的胰岛类似细胞。

（6）该治疗糖尿病的方法与相比异体移植，突出的优点是         。

猪的肌肉生长抑制素(MSTN)基因可抑制肌细胞的增殖和分化。CRISPR/Cas9是一种最新出现的基因编辑技术，其主要过程是向导RNA(gRNA，含与目的基因部分序列配对的单链区)与Cas9核酸酶结合，引导Cas9核酸酶对DNA局部解旋并进行定点切割。科研人员利用该技术定向敲除猪胎儿成纤维细胞中MSTN基因，以期获得生长速度快、瘦肉率高的新品种。过程如下图，其中BsmBⅠ、KpnⅠ、EcoRⅠ表示相应限制酶的识别位点。分析回答：

(1)图中①过程用到的工具酶有________，图中gRNA基因序列设计的主要依据是_  _。

(2)科研人员可利用____                ____(方法)将重组质粒导入猪成纤维细胞，经_______           _过程合成Cas9核酸酶。

(3)过程③与DNA复制相比，特有的碱基配对方式有___________      ___。

(4)分析发现某基因敲除细胞株中MSTN基因的表达水平为正常细胞的50%，说明__________________。

(5)欲利用MSTN基因缺失成纤维细胞培育成MSTN基因缺失猪，请简要写出基本的流程。________________                                               ___。

【生物选修3】

治疗性克隆是指把患者体细胞的细胞核移植到去核卵母细胞中，构建形成重组胚胎，体外培养到一定时期分离出Es细胞，获得的ES细胞定向分化为所需的特定类型细胞(如神

经细胞、肌肉细胞和血细胞)，用于治疗。请回答下列问题:

(1)治疗性克隆采用的技术有                   和干细胞培养。ES细胞可从重组胚胎培养到囊胚时期的                  中分离。

(2)科学家将患者的体细胞核植入去核的卵细胞中，而不是直接用体细胞进行细胞培养的原因是                      。

(3)在培养液中加入            可诱导ES细胞定向分化成所需的各种特定类型细胞，体现了该细胞在功能上,具有      的特性。

(4)某次科学家将体外培养的ES细胞进行诱导使其定向分化为胰岛B细胞，并进行了胰岛素释放实验：控制培养液中 的浓度，检测细胞分泌的胰岛素的量，下图为实验结果,据此分析确认ES细胞诱导成功。得到此结论的依据是              。

利用下列细胞工程技术培养出的新个体中，只具有一个亲本遗传性状的是

①植物组织培养②植物体细胞杂交

③动物胚胎移植④动物核移植技术．

目前我国的第三代试管婴儿技术已获得突破，不但能解决部分不孕不育问题，还能在胚胎移植前对部分遗传性疾病进行筛查，从而实现优生优育。请回答下列问题：

（1）第三代试管婴儿利用了下列________（填字母）手段。

A．体外受精技术

B．胚胎移植技术

C．植入前胚胎遗传学诊断技术

D．克隆技术

（2）胚胎发育的卵裂期在________（填“透明带”或“放射冠”）内进行。受精卵经72小时体外培养发育成有32个细胞左右的________胚，可用于胚胎移植。要得到“同卵双胞胎”，理论上需要采用________技术。

（3）为了避免某些遗传病的发生，需对胚胎的性别进行鉴定。目前最准确的方法是从被测的囊胚中取出几个________（填“滋养层”或“内细胞团”）细胞，提取DNA；然后用位于Y染色体上的性别决定基因（即SRY基因）的一段碱基作________，以________为模板进行PCR扩增；最后与SRY特异性探针出现阳性反应者，胚胎为________性。

（1）应用1中获得的小牛，其遗传物质来源于________，细胞B的名称是________。

（2）应用2中牛完成体内受精的场所是________，刚种植在子宫内的胚胎其发育程度一般为________，胚胎种植后可以通过________从母体获得正常发育所需要的物质。这种试管牛的产生，采用的胚胎工程技术有______________________(至少答出两种)等。

（3）应用3中细胞C、D分别取自________    、________     。

（4）应用4中通过________ 技术获得二分胚①和②，同时，可以通过取样________进行分子水平的早期胚胎性别鉴定；也可以在细胞水平上通过对________的分析进行性别鉴定。

科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图：

（1）步骤①的技术名称是                         。

（2）将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有                 。

（3）步骤③中，需要构建含有干扰素基因的                       。由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，故构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从下图A、B、C、D四种单链DNA片段中选取                   作为引物。对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，能否使用SmaI,并说明原因是                                        。

为进行牛胚胎移植，可通过下列途径获得优良胚胎，请回答相关问题：

(1)在途径①中，为一次性获得数目较多的胚胎，可对优良母牛注射________。体内受精一段时间后，可通过________操作收集早期胚胎用于移植；若进行体外受精，应使用培养到____  ____的卵母细胞。

(2)在途径②中，以成熟体细胞为供体进行核移植成功率很低，而以胚胎细胞为供体成功率会显著提高，原因是________。在途径③中，将目的基因导入受精卵常用的方法是________；若用DNA分子杂交技术检测导入是否成功，需以____    ____为模板制作探针。

(3)优良胚胎移植前需培养到____  ____时期，且受体母牛需处于_______  _状态。