【生物——选修3：现代生物科技专题】

下图表示通过核移植等技术获得某种克隆哺乳动物（二倍体）的流程。

回答下列问题：

（1）图中A表示正常细胞核，染色体数为2n，则其性染色体的组成可为____________。过程①表示去除细胞核，该过程一般要在卵母细胞培养至适当时期再进行，去核时常采用_______的方法。②代表的过程是__________。

（2）经过多次传代后，供体细胞中______的稳定性会降低，因此，选材时必须关注传代次数。

（3）若获得的克隆动物与供体动物性状不完全相同，从遗传物质的角度分析其原因是______。

（4）与克隆羊“多莉（利）”培养成功一样，其他克隆动物的成功获得也证明了__________。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

下图表示通过核移植等技术获得某种克隆哺乳动物（二倍体）的流程。

回答下列问题：

（1）图中A表示正常细胞核，染色体数为2n，则其性染色体的组成可为____________。过程①表示去除细胞核，该过程一般要在卵母细胞培养至适当时期再进行，去核时常采用_______的方法。②代表的过程是__________。

（2）经过多次传代后，供体细胞中______的稳定性会降低，因此，选材时必须关注传代次数。

（3）若获得的克隆动物与供体动物性状不完全相同，从遗传物质的角度分析其原因是______。

（4）与克隆羊“多莉（利）”培育成功一样，其他克隆动物的成功获得也证明了__________。

【生物】下图一表示二倍体动物苏格兰羊体内的一个体细胞A经过两次细胞分裂的简单过程图，BCDEF表示该动物处于不同分裂状态的细胞图像；图二为不同分裂时期每条染色体的DNA含量。据图请回答：

(1)细胞A→细胞C的细胞分裂方式属于        分裂，细胞B中有    对同源染色体。

(2)细胞D中染色体的行为是生物变异的来源之一，这种变异称为           。

(3)与细胞D核DNA含量相同的是细胞   （填标号），处于图二cd时期的是细胞     （填标号）。

 (4)若将A细胞中两对同源染色体的双链DNA用³²P作标记，放在³¹P的培养液中进行如图所示的两次分裂，则E细胞中有³²P标记的染色体有       条。

(5)克隆羊多利的产生过程大概如下：

①先将图一中      细胞（填标号）的细胞核去除，再将多塞特母羊的乳腺细胞的细胞核注入形成一个融合细胞。

②将融合细胞置于5%CO₂和95%空气的混合气体的培养箱中培养。5%CO₂的作用是         。

③将早期胚胎移植到受体母羊的子宫。从免疫学的角度分析，该胚胎能在受体子宫中存活的原因是                                            。

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   下图一是培养小鼠胚胎成纤维细胞（MEF细胞）的示意图，图二是在用MEF细胞制成的饲养层上培养胚胎于细胞（ES细胞）的示意图。

（1）图一所示，制备细胞悬液时，常用________酶来消化剪碎的组织块。配制培养液时，通常需要在合成培养基的基础上添加________等一些天然成分。当MEF细胞分裂生长到细胞表面相互接触时就停止分裂，这种现象称为细胞的________。

（2）ES细胞是由________中分离出来的一类细胞，ES细胞在功能上具有发育的________。

（3）MEF细胞能够分泌某些蛋白质，其合成到分泌至细胞外的过程是：核糖体→囊泡→________囊泡，再通过________方式分泌到细胞外。在培养液中单独培养ES细胞时，ES细胞容易发生分化，结合图二可推知MEF细胞的作用是________。

（4）在治疗性克隆过程中，细胞核取自患者细胞，这是为了避免向患者移入组织细胞后体内发生________反应。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

目前我国的第三代试管婴儿技术已获得突破，不但能解决部分不孕不育问题，还能在胚胎移植前对部分遗传性疾病进行筛查，从而实现优生优育。请回答下列问题：

（1）第三代试管婴儿利用了下列________（填字母）手段。

A．体外受精技术

B．胚胎移植技术

C．植入前胚胎遗传学诊断技术

D．克隆技术

（2）胚胎发育的卵裂期在________（填“透明带”或“放射冠”）内进行。受精卵经72小时体外培养发育成有32个细胞左右的________胚，可用于胚胎移植。要得到“同卵双胞胎”，理论上需要采用________技术。

（3）为了避免某些遗传病的发生，需对胚胎的性别进行鉴定。目前最准确的方法是从被测的囊胚中取出几个________（填“滋养层”或“内细胞团”）细胞，提取DNA；然后用位于Y染色体上的性别决定基因（即SRY基因）的一段碱基作________，以________为模板进行PCR扩增；最后与SRY特异性探针出现阳性反应者，胚胎为________性。

[生物——选修3现代生物科技专题]

自然条件下，哺乳动物不发生孤雌生殖。2014年3月，云南农大科研团队把猪卵母细胞进行人为的孤雌激活处理，使其发育成胚胎，移植到代孕母猪体内，获得世界上第一批成活的孤雌生殖克隆猪。这种克隆猪不同于核移植获得的克隆猪，现将两种技术进行比较。

（1）      图中过程①②③④是获得孤雌克隆猪的技术流程，那么获得核移植克隆猪的技术流程是过程     （填序号）。

（2）孤雌生殖克隆猪仍然是二倍体生物，但由于缺少          方亲本基因，导致其生长发育中出现多种问题，但给研究者提供了很好的材料。

（3）孤雌激活处理其实质是要激活卵母细胞        ，使其发育成早期胚胎，得到克隆猪。

（4）体细胞核移植技术中也会用到卵母细胞，需要选择            时期的卵母细胞，并用微型吸管吸出                    。

（5）早期胚胎移植时，必需移植到同种              的其他雌性动物子宫中，才可能移植成功。

（6）可以从良种不同的克隆猪中提取mRNA进行研究，也可通过        方法得到多种cDNA，并通过              技术扩增产物。

科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图1。图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示质粒，据图回答：

（1）重组细胞的细胞核来自______________细胞。

（2）将基因导入ES细胞而不是导入上皮细胞是因为ES细胞具有______________。

（3）步骤③，需要构建含有干扰素基因______________。

（4）从基因组数据库中查询干扰素基因的核苷酸序列，以便根据真训练设计合成引物用于PCR扩增，PCR扩增过程至少第____________轮循环后才能获得纯目的基因片段（仅含引物之间的序列）。

（5）对于干扰素基因片段和质粒进行双酶切时，可选用限制酶的组合为____________或____________。

（6）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发___________色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可以采用___________的方法。

【生物——选修3：现代生物科技专题】

Leigh氏综合症是一种攻击神经系统的严重神经障碍，其致病基因位于线粒体DNA中，一位母亲约有1／4的线粒体携带有这种致病基因。她的前两个孩子因为患有Leigh氏综合症而夭亡，她的第三个孩子因为接受另一名女性捐赠的健康基因而成为全球首个拥有“三个父母”的男婴。其具体过程如图：

（1）该母亲的前两个孩子患病的原因是细胞分裂过程中细胞质的遗传物质的分配是________（填“均分”或“随机”）的，可能产生含较多缺陷线粒体的卵细胞，而受精卵的线粒体几乎全部来自于________，导致后代患病。

（2）图示过程中代表该母亲卵母细胞的是________（填“A”或“B”）。取卵之前，该母亲需要注射________激素。激活的卵母细胞与________的精子在体外完成受精后移入________液中继续培养至8～16个细胞阶段，经检查合格后，才能移植入母亲的子宫继续发育。

（3）由于这名婴儿携带“三个父母”的基因，引发了有关伦理道德问题的大讨论，为了降低伦理道德上的争议，医疗团队特意选择了男性胚胎移入子宫发育，原因是________。

回答下列（一）、（二）小题：

(一）请回答与“固定化酶”实验有关的问题：

（1）—淀粉酶可以通过培养枯草杆菌来生产，         是筛选高表达量菌株的最简便方法之一。筛选出的菌株在发酵生产之前还需利用          培养基进行扩大培养。

(2)利用物理或化学的方法将—淀粉酶固定后，成为     且又有酶活性的制剂。若用吸附法固定时，在装柱后需要用     缓慢冲洗，直至流出液不使淀粉-碘混合液发生      为止。

(3)将淀粉溶液以一定流速从反应柱上端滴入，再在下端接取少量流出液进行KI-I₂颜色测试，结果不呈现红色。对此现象的解释错误的是        

  A.反应柱中没有—淀粉酶被固定      B.流速过快淀粉未被水解    

  C.接取的流出液是蒸馏水              D.流速过慢淀粉被水解成葡萄糖

(二）欲利用基因工程技术将人胰岛素基因转入到小鼠基因组中，以期利用小鼠生产出人胰岛素，请回答：

(1)若用逆转录的方法获得人胰岛素基因，则需要从人体相应的       细胞中提取mRNA，获得的人胰岛素基因经过相应处理后，再利用显微注射技术将其注入到受体细胞中，下列最不适合作为受体细胞的是        

 A.受精卵     B.胚胎干细胞     C.第一次卵裂形成的细胞    D.第三次卵裂形成的细胞

(2)为获得更多的受体细胞，可先对成年雌鼠注射激素进行         处理,将获得的卵母细胞培养成熟，与经        处理的精子结合形成受精卵后再进行后期操作。

(3)导入胰岛素基因的受体细胞还需借助        、        等技术才能成为转基因小鼠。