（1）方法Ⅰ和方法Ⅱ均用到的生物技术有______________和______________。

（2）用激素处理的目的是使B牛______________，从B牛体内获得的卵母细胞需要培养到____________________(时期)才能与精子结合。

（3）A牛的精子必须在B牛的生殖道中经过相应的生理变化后，才能与B牛的卵细胞结合，完成受精作用，这个过程叫______________。卵子受精的标志是在卵黄膜和透明带的间隙能够观察到______________。

（4）生产上常用______________期的胚胎进行胚胎移植。若希望同时获得多个性状相同的家畜个体，可以使用______________技术。

（2）若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是 _________ ．对分离的细菌数目统计时，统计的菌落数目往往比活菌的实际数目偏少，原因是_________________________ 。

（3）在实验室应采用___________法对培养基进行灭菌处理，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在_____________条件下进行．若发现在⑤中菌落过多，无法准确计数，可以将③中取出的菌液_____________________________ ．

Ｉ下图表示单克隆抗体制备过程示意图。据图回答：

（1）淋巴细胞是由动物体骨髓中的造血干细胞分化、发育而来得到，B淋巴细胞从小白鼠体内分离之前,应对小白鼠进行的处理是_________________ ,该处理的实质是在小白鼠体内发生_____________过程。骨髓瘤细胞与进行原代培养的细胞相比较,遗传物质发生的主要变化是___________,从而违背了“程序性细胞死亡”规则,打破了细胞产生与细胞死亡的动态平衡。

（2）____________________技术是单克隆抗体技术的基础，根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于__________培养基，试设想运用生物工程其它领域的技术制备单克隆抗体的另一条途径________________ 。

（3）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的_______________特点，又具备B淋巴胞的_______特点。单克隆抗体与常规的血清抗体相比 ，最大的优越性是_______________，_______________。                                            

II绿色荧光蛋白(GFP)能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，GFP基因可作为目的基因用于培育绿色荧光小鼠，下图表示培育绿色荧光小鼠的基本流程：

（1）①过程需要限制酶切断________________键，使DNA分子断裂，其结果形成_____________。图中过程②常用的方法是_____________ ；过程③利用的生物技术主要是___________________；在进行过程④前，利用______________技术可以获得数目更多且基因型相同的绿色荧光小鼠。

（2）GFP基因与目的基因一起构建到载体上不影响目的基因的表达，也不影响由目的基因控制合成的蛋白质的结构与功能,且对细胞无毒性作用，因此GFP基因可以作为基因表达载体上_____________。

（3）获取外源基因若需在短时间内获得大量的某种外源基因，通常采用 _________ 技术．在供体雌鼠发情周期的某一阶段，用______激素处理促使卵巢里大量卵泡成熟并排出，称为超数排卵．在让供体母鼠与健康公鼠交配的同时，让代孕母鼠与结扎公鼠进行交配，使代孕母鼠与供体母鼠的生理条件达到同步或者一致，称为 __________ 处理．将目的基因导入受体细胞后，还需对转基因生物进行_________________。

科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊，以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子IX医用蛋白，其技术路线如图。

⑴ ①过程构建的A是________________________。它必须将目的基因与_______________等调控组件重组在一起，才能通过分泌乳汁来生产人凝血因子IX医用蛋白。

⑵ 在核移植之前，必须先去掉受体卵母细胞的核，目的是________________________________________________________________。

⑶ 进行胚胎移植时，代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生__________________，这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。

⑷ 采用胎儿成纤维细胞进行转基因体细胞克隆，理论上可获得很多转基因绵羊，这是因为___________________________________________

______________________________________________________________________________________________________________。

⑸ 蛋白质工程也被称为第二代基因工程，其基本途径是从预期蛋白质功能出发，通过_________________________________和____________

__________________，进而确定相对应的脱氧核苷酸序列，据此获得基因，再经表达、纯化获得蛋白质，之后还需要对蛋白质的生物功能进行鉴定。

图1表示利用生物技术制备抗X的单克隆抗体的过程；图2表示体外受精培育优质奶牛的过程；图3表示番茄和马铃薯植物细胞融合和再生植株的过程。请据图回答下面的问题。

⑴ 在图1中注射到小鼠体内的物质是__________。融合后的细胞经过多次筛选才能获得理想的细胞，此类细胞的特点是____________________

_________________。

⑵ 图2中参与体外受精的精子需要经过成熟和获能的过程，才能与达到__________期的卵子受精。若要获得多头与此优质奶牛相同的小牛，可对图2中囊胚中的__________均等分割后进行胚胎移植。以上技术是在__________(填“体内”或“体外”)完成的。

⑶ 图3中过程①是植物细胞形成__________________的阶段，该阶段所用的酶是__________________________。在形成再生植株的过程中与组织培养有相似之处的步骤是__________（填图中序号）。

中国荷斯坦奶牛是由纯种荷兰牛与本地母牛经多代杂交,长期选育而成,具有体型大、产奶量高的特点。雌性奶牛一般在24月龄开始产犊,牛犊出生时体重为40～50 kg,母牛随即开始泌乳。和牛是世界公认的高档肉牛品种,体型较小,肉质鲜嫩,营养丰富,牛犊出生时体重为30 kg左右。我国科研人员利用胚胎移植技术,按如图所示流程操作,成功地培育了和牛这一优良品种。请回答下列问题:

(1)荷斯坦奶牛在初次产奶300天后就会停止分泌乳汁,进入干奶待产期。为缩短干奶期,可在奶牛哺乳期的合适时间为母牛进行__________,以提高受孕率,促使母牛开始新一轮的产奶。 

(2)过程①中产生的精子需进行______________处理后方有受精的能力,过程④中移植的早期胚胎处于______________期。图示过程中发生基因重组的是______________ (填序号)。 

(3)为了提高已有胚胎的利用率,还可采取_______________技术。 

(4)为保证和牛的品质,防止近亲繁殖,需要对和牛进行DNA检测。目前常用“拔牛毛”的方法获取带毛囊的牛毛进行检测,而不是直接剪取牛毛进行检测,原因是___________________。 DNA检测首先需制备DNA荧光探针,过程如下图所示,在DNA酶Ⅰ作用下产生切口,随后在DNA聚合酶Ⅰ作用下,以荧光标记的_______________为原料,合成荧光标记的DNA探针。 

(5)牛是反刍动物,消化道并不能分泌纤维素酶,但在其瘤胃中生活着大量的微生物,可以帮助牛消化纤维素,这些微生物与牛的关系是______________。 

【加试题】（一）蓝莓富含花青素，含有丰富的营养成分，是世界粮农组织推荐的五大健康水果之一，蓝莓的深加工产品也深受人们的喜爱，下图是某实验室利用蓝莓酒制作蓝莓醋的实验装置，回答以下问题：

（1）果醋发酵需要的菌种是__________，实验前需将该菌种在______上进行扩大培养。

（2）甲中是蓝莓酒和蒸馏水的混合物，其比例是_____

   A.1：2 B.1：4 C. 2：1 D.4：1

（3）乙中是经_________灭菌过的锯末，采用_________法将发酵菌株固定在锯末上制成固定化菌株，可大幅缩短生产周期，降低生产成本和提高生产效率，并增强果醋的风味。

（4）若该菌种在杂菌污染，欲消除污染的杂菌，最简单的方法是____________________。

（二）2014年7月，FDA批准了利用转基因兔生产的新药Rucones（重组人C1酯酶抑制剂），该药物可用于治疗成人及青少年遗传性血管性水肿患者的急性发作，其部分技术路线如图：

（1）由过程①得到的A为_____________ 。

（2）过程②常用的方法是______________。

________细胞作为饲养层细胞，用以___________________。

（4）兔的胚胎干细胞不能发育成完整个体，但可以通过___技术形成重组细胞，然后利用____技术，通过代孕母兔分娩出转基因兔，从转基因兔的乳汁中提取Rucones药物。

请据图回答下列问题:

（1）该培养过程涉及多种现代生物工程技术，属于分子水平的是     ，其原理是             。

（2）若要获得单个的成纤维细胞进行培养，需用               处理猪胚胎的部分组织。

（3）E过程中若要获得大量的卵母细胞需要对成年母猪采用                                 法以获得大量的卵细胞。 

（4）G过程的名称是      ，H过程所选择的胚胎一般处于          期较合适。

（5）I过程需要在个体水平上检测                                                以验证该培养过程是否成功。

（1）图中①表示________________的构建，所用的工具酶有____________、____________。

（2）图中②过程选择受精卵作为TPA基因受体细胞的主要原因是受精卵的发育全能性最高；若需体外形成羊的受精卵，需在____________(垂体激素)的作用下促其排卵，然后再进行体外受精。

（3）图中③过程是否成功，与供体和受体的____________状况有关；受体对移入子宫的____________基本上不发生____________反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能。

（4）图中④过程表示产生大量的克隆羊，则该过程可采用的技术有____________，这些克隆羊的基因型____________(填“相同”或“不同”)。

科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊,以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子Ⅸ医用蛋白,其技术路线如图。

(1)由过程①获得的A为 。

(2)在核移植之前,必须先去掉受体卵母细胞的核,目的是 。受体应选用 期卵母细胞。

(3)进行胚胎移植时,代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生 ,这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。

(4)采用胎儿成纤维细胞进行转基因体细胞克隆,理论上可获得无限个转基因绵羊,这是因为    。

为进行牛胚胎移植，可通过下列途径获得优良胚胎，请回答相关问题：

(1)在途径①中，为一次性获得数目较多的胚胎，可对优良母牛注射________。体内受精一段时间后，可通过________操作收集早期胚胎用于移植；若进行体外受精，应使用培养到____  ____的卵母细胞。

(2)在途径②中，以成熟体细胞为供体进行核移植成功率很低，而以胚胎细胞为供体成功率会显著提高，原因是________。在途径③中，将目的基因导入受精卵常用的方法是________；若用DNA分子杂交技术检测导入是否成功，需以____    ____为模板制作探针。

(3)优良胚胎移植前需培养到____  ____时期，且受体母牛需处于_______  _状态。