回答有关基因工程和胚胎工程的问题：

I .抗冻蛋白是一类抑制冰晶生长的蛋白质，能降低水溶液的冰点，从而导致水溶液的熔点和冰点出现差值，这个温度差称为热滞值。昆虫抗冻蛋白的热滞值最高，为3～ 6℃，鱼的热滞值为0.7～1.5℃。因此，昆虫抗冻蛋白在实际应用上具有更大的潜力。为了扩展一些植物的生存范围，科学家利用昆虫抗冻蛋白（AFPS）的异源表达，现已成功地提高了烟草的抗冻能力。请分析回答相关问题：

（1）基因工程的核心步骤是__________________，这一过程需要的工具酶是____________________。将AFPS基因导入烟草细胞中，常用____________法，这是因为烟草属于双子叶植物，此操作过程中使用的运载体是___________。

（2）若检测是否产生抗冻蛋白，一般采用_________方法进行分子水平的检测。

II .胚胎工程是一项综合性的动物繁育技术，可在畜牧业和制药业等领域发挥重要作用。下图是通过胚胎工程培育试管牛的过程。

（1）有时需要将早期胚胎分割，提高胚胎的利用率。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，应注意                 ，以免影响胚胎的恢复和进一步发育。

在对囊胚阶段的胚胎做DNA分析性别鉴定时，所取的样本是          细胞。

（2）试管牛能在受体子宫中存活的生理基础是                      。

（3）胚胎干细胞培养也是一项重要的胚胎工程技术。胚胎干细胞是由早期胚胎或原始性腺中分离出来的，在功能上具有           ，即可以分化为成年动物体内任何一种组织细胞。在体外培养条件下，为保持胚胎干细胞的未分化状态，通常在培养皿中铺上一层          细胞或培养在添加了抑制因子的培养液中。

下列关于胚胎干细胞的分析，不正确的是(　　)

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的     　　　   。

（2）步骤②中，重组胚胎培养到      　　 期时， 可从其内细胞团分离出ES细胞。

（3）步骤③中，需要构建含有Rag₂基因的表达载体。可以根据Rag₂基因的           设计引物，利用PCR技术扩增Rag₂基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有       　　　　　　　　　  酶的酶切位点。

（4）为检测Rag₂基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的   　　    ，用抗Rag₂蛋白的抗体进行杂交实验。

日前，英国研究人员利用最新的3D打印技术，“打印”出了活体胚胎干细胞。实验证明，这些干细胞仍保持着人体胚胎干细胞的正常分化能力。科学家使用活体卵子及皮肤成纤维细胞，在实验室已成功克隆出了数个人体胚胎，进而可以开发出有研究价值的胚胎干细胞。请回答：

（1）自然状况下的胚胎干细胞是由哺乳动物的早期胚胎或                中分离出来的一类细胞。

（2）上述过程中要应用到的动物细胞工程技术有                          、                        。胚胎干细胞在形态上表现为体积小，细胞核大，          明显，在功能上具有                   。

（3）将胚胎干细胞用于检测有毒物质是否引起了基因突变，在分子水平上需要采用         技术。

（4）若选用囊胚进行胚胎分割，要注意对其               做到均等分割。

（5）胚胎移植是否成功，与供体和受体的生理状况有关。在胚胎移植操作中，应对供体和受体母畜进行

              处理才能使胚胎在移植前后所处的生理环境保持一致。