如图为“DNA的粗提取与鉴定”实验的相关操作。

(1)图中实验材料A可以是________等，研磨前加入的B应该是________。

(2)通过上述所示步骤得到滤液C后，再向滤液中加入2 mol/L的NaCl溶液的目的是____________，再过滤得到滤液D，向滤液D中加入蒸馏水的目的是________。

(3)在“DNA的粗提取与鉴定”实验中，将含有一定杂质的DNA丝状物分别放入体积为2 mL的4种溶液中，经搅拌后过滤，获得如表所示的4种滤液，含DNA最少的是滤液________。

(4)DNA鉴定的原理是___________________

(5)下图1、2分别为“DNA的粗提取与鉴定”实验中部分操作步骤示意图，下列叙述正确的是________________

A．图1、2中加入蒸馏水稀释的目的相同

B．图1中完成过滤之后保留滤液

C．图2中完成过滤之后弃去滤液

D．在图1鸡血细胞液中加入少许嫩肉粉有助于去除杂质

含有限制酶的细胞中通常还具有相应的甲基化酶，这两种酶对DNA分子有相同的作用序列，但具有不同的催化功能。甲基化酶可以对DNA序列进行修饰，使限制酶不能对这一序列进行识别和切割。回答下列问题

（1）目前，基因工程中使用的限制酶主要是从                生物中分离纯化获得的。构建“基因组文库”和“cDNA文库”的过程中需要使用DNA连接酶的是                （填“基因组文库”,“cDNA文库”或“基因组文库”和“cDNA文库”）

（2）含有某种限制酶的细胞，可以利用限制酶切割外源DNA，但不破坏细胞自身的DNA,其原因可能有①                ；②                。

（3）利用PCR扩增目的的基因的过程由高温变性（90~95°C）,低温复性（55~60°C），适温延伸（70~75°C）三个步骤构成一个循环，为使得DNA聚合酶能够重复利用，选用的酶应在                °C处理后仍然具备催化活性。

（4）在PCR扩增目的基因时，为实现序列中的腺嘌呤被放射性同位素标记，反应体系中添加的原料应包括碱基已被标记的                （填“腺嘌呤核糖核苷酸”，“dATP”或“ATP”）.

图1

(1) 过程②中常用____技术将目的基因导入受精卵,受精过程中精子头部接触卵细胞膜时产生____反应,以防止多精入卵。 

(2) 过程⑤在精核与卵核融合之前,用微型吸管吸除雄核,再用细胞松弛素B处理(作用类似于用秋水仙素处理植物细胞),处理后的受精卵可发育成猕猴。这种方法在动物新品种选育中的显著优点是_________________。 

(3) ⑦过程通过____技术实现,在个体水平上检测GFP基因是否表达的方法是______________。 

(4) 胚胎工程中通常需要鉴定胚胎性别,如利用SRY—PCR技术鉴定,鉴定时需以Y染色体上的SRY基因(性别决定基因)的一段序列设计引物,用被测胚胎DNA作模板进行PCR扩增。根据SRY基因序列设计的引物长度一般为20~24个核苷酸,其不宜过短的原因主要是_。 

图2　　　　　　　　　　　　

生物兴趣小组以苹果为材料开展细胞中DNA含量测定研究，主要实验流程如下图，其中SDS（十二烷基硫酸钠）具有破坏细胞膜和核膜、使蛋白质变性等作用，苯酚和氯仿不溶或微溶于水，它们的密度均大水。请分析回答：

（1）步骤①中苹果组织研磨前先经液氮冷冻处理的主要优点是      .在常温条件下,也可向切碎的组织材料中加入一定量的     ,再进行充分搅拌和研磨。

（2）根据实验流程可推知，步骤③、④所依据的原理是      。

（3）步骤⑤加入2～3倍体积的95%乙醇的目的是       。

（4）下面是某同学设计的DNA鉴定实验的主要步骤：

①取1支20mL试管，向其中先后加入2mol·L^-1的NaCl溶液5mL和少量絮状DNA沉淀，用玻棒搅拌使其溶解。

②向试管中加入4mL二苯胺试剂，混匀后将试管置于50～60℃水浴中加热5min，待试管冷却后，观察溶液是否变蓝。

请指出上面实验步骤中的两个错误：       、         。

（5）兴趣小组成员还以同种苹果的不同组织器官为材料,测定不同组织细胞中DNA的含量，结果如下表（表中数值为每克生物材料干重中DNA含量）：

试从细胞分裂的角度，解释不同生物材料中DNA含量差异明显的原因           。

某生物兴趣小组在学习了DNA的粗提取和鉴定实验后，尝试开展RNA的粗提取和鉴定实验。通过查阅资料，制订了以下的实验方案：

【实验课题】酵母RNA的提取和鉴定

【实验目的】1．从酵母中提取RNA；2．鉴定RNA。

【实验原理】微生物是工业上大量生产RNA的原料，其中以酵母尤为理想，因为酵母核酸中主要是RNA，DNA很少，菌体易收集，RNA易分离。RNA不溶于乙醇和无水乙醚。利用稀碱法（稀碱能使细胞壁溶解）或高盐法（高浓度的盐改变细胞膜的通透性）来释放RNA。RNA水解液（加硫酸、加热）+苔黑酚-FeCl₃试剂加热直到沸腾1分钟，会呈现墨绿色。

【实验材料】干酵母粉、离心机、烧杯、试管、玻璃棒等；0.2%氢氧化钠、95%乙醇、无水乙醚、乙酸、10%硫酸溶液、苔黑酚-FeCl₃试剂等。

【实验步骤】

①称6克干酵母

②加0.2%氢氧化钠45mL，沸水加热20分钟，搅拌，后加乙酸7滴

③离心10分钟后取上清液

④边搅拌边缓慢加95%乙醇并静置10分钟

⑤离心后先用95%乙醇洗两次，再用无水乙醚洗两次

⑥获得RNA粗制品

⑦RNA鉴定

请根据实验方案，思考并回答下列问题：

（1）酵母菌细胞中含有RNA的结构有细胞核、     、       和       。酵母菌也是便于用来研究细胞呼吸不同方式的好材料，理由是             。

（2）实验步骤⑤中，离心后取     用乙醇、无水乙醚进行洗涤。

（3）RNA提取过程要注意温度的控制，在20～70℃的温度范围内停留的时间不能太长，其原因是     ，

（4）稀碱法提取RNA须在沸水浴中进行的目的，一是     ，二是     ，以便获得更多更纯净的RNA。

（5）若用花椰菜来提取DNA，可用       瓦解细胞膜，然后充分研磨，实验中研磨速度要     。

【生物——选修3：现代生物科技专题】

神经营养因子（NTF）能促进神经元的存活和再生。已知NTF基因能得到克隆。回答下列问题：

（1）在体外，可通过PCR技术扩增NTF基因，该技术依据的原理是______________。为何保证PCR反应的进行，反应体系需要加入______________酶、模板DNA、dCTP、dATP、dGTP、dTTP、______________等。在打开DNA双链时需要_______________________。

（2）将外源NTF基因导入受体细胞常用的方法是_____________，检测其是否已表达，可采用______________方法。

（3）与转基因工程菌相比，利用真核细胞作为受体得到的NTF才有生物活性，其原因可能是______________。

科学家运用基因工程技术将结核杆菌MPT64基因（能控制合成MPT64蛋白）成功导入胡萝卜细胞，最终表达出肺结核疫苗。请回答下列问题：

（1）为获取MPT64基因，可从结核杆菌的细胞中提取对应mRNA，在               的作用下合成双链cDNA片段，获得的cDNA片段与结核杆菌中该基因碱基序列             (填“相同”或“不同”)。

（2）通常采用           扩增MPT64基因，前提是要有一段已知MPT64基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成               ，在操作步骤中需要加热至90-95℃的目的是                   。

（3）根据农杆菌的特点，如果将MPT64基因插入到              上，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入胡萝卜细胞。要确认MPT64基因是否在胡萝卜植株中表达，应检测胡萝卜植株中是否含有                。

（4）研究发现，如果将MPT64蛋白20位和24位的氨基酸改变为半胱氨酸，其保存时间将大大延长，科学家可以生产上述耐储存的MPT64蛋白的现代生物工程技术是                   。

如图为“DNA的粗提取与鉴定”实验的相关操作。

(1)图中实验材料A可以是洋葱(菜花等) 等，研磨前加入的B应该是________和       。作用分别是            和            。

(2)通过上述所示步骤得到滤液C后，再向滤液中加入2 mol/L的NaCl溶液的目的是________________，再过滤得到滤液D，向滤液D中加入蒸馏水的目的是____________________。

(3)在“DNA的粗提取与鉴定”实验中，将含有一定杂质的DNA丝状物分别放入体积为2 mL的4种溶液中，经搅拌后过滤，获得如表所示的4种滤液，含DNA最少的是滤液________。

(4)下面是某同学设计的DNA鉴定实验的主要步骤：

①取1支20mL试管，向其中先后加入2mol·L－1的NaCl溶液5mL和少量絮状DNA沉淀，用玻棒搅拌使其溶解。

②向试管中加入4mL二苯胺试剂，混匀后将试管置于50～60 ℃水浴中加热5 min，待试管冷却后，观察溶液是否变蓝。

请指出上面实验步骤中的两个错误：________________、________________。

生物兴趣小组以苹果为材料开展细胞中DNA含量测定研究，主要实验流程如下图，其中SDS（十二烷基硫酸钠）具有破坏细胞膜和核膜、使蛋白质变性等作用，苯酚和氯仿不溶或微溶于水，它们的密度均大水。请分析回答：

（1）步骤①中苹果组织研磨前先经液氮冷冻处理的主要优点是      .在常温条件下,也可向切碎的组织材料中加入一定量的     ,再进行充分搅拌和研磨。

（2）根据实验流程可推知，步骤③、④所依据的原理是      。

（3）步骤⑤加入2～3倍体积的95%乙醇的目的是       。

（4）下面是某同学设计的DNA鉴定实验的主要步骤：

①取1支20mL试管，向其中先后加入2mol·L^-1的NaCl溶液5mL和少量絮状DNA沉淀，用玻棒搅拌使其溶解。

②向试管中加入4mL二苯胺试剂，混匀后将试管置于50～60℃水浴中加热5min，待试管冷却后，观察溶液是否变蓝。

请指出上面实验步骤中的两个错误：       、         。

（5）兴趣小组成员还以同种苹果的不同组织器官为材料,测定不同组织细胞中DNA的含量，结果如下表（表中数值为每克生物材料干重中DNA含量）：

试从细胞分裂的角度，解释不同生物材料中DNA含量差异明显的原因           。

（1）在实验中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用分别是 （    )

A．稀释血液、冲洗样品

B．使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出

C．使血细胞破裂、增大DNA溶解量

D．使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA。

（2）生活在牧区的人们，采集牛、羊和马血比较方便，若它们按实验要求完成实验步骤后，结果是很难提取到DNA，原因是______________________________。

（3）不同的NaCl溶液中，DNA的溶解度不同，在NaCl溶液浓度是_______________时，DNA的溶解度最小。

（4）DNA的析出和鉴定时，析出DNA时应将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等的、冷却的______________（写出体积分数），静置后溶液中将析出DNA。鉴定时所用的试剂为______________。