兰花育性差但市场需求巨大，某生物公司欲利用现代生物技术培养兰花。回答下列相关问题：

(1)欲培养无病毒的高品质兰花宜选择____________作为外植体。培养一段时间后，会经过___________形成愈伤组织，愈伤组织的特点是_________________________。

(2)若在培养过程中先用生长素，再用细胞分裂素，则愈伤组织的生长状况是__________。愈伤组织在一定的培养条件下，又可再分化出___________，最终长成兰花小植株。

(3)若研究人员对两个品种的兰花进行体细胞杂交，首先用_________法获得原生质体，然后用___________（试剂）诱导原生质体融合。原生质体融合的原理是_______________。融合后的原生质体再生细胞壁过程与细胞内_____________（细胞器）有密切关系。

(4)在植物组织培养的过程中，由于培养细胞一直处于___________状态，因此容易受到培养条件和外界压力（如射线、化学药物等）的影响产生突变，科研人员可从这些突变体中筛选出新品种兰花。

某基因工程中如图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列．现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．请回答：

（1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由______________________连接．

（2）若用限制酶SmaI完全切割图1的DNA片段，产生的末端是___末端，其产物长度为___________________．

（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T﹣A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d．从杂合子中分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有___种不同长度的DNA片段．

（4）若将图2中质粒和基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是______．在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加_____的培养基进行培养．经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是____________________________________________．

鸡干扰素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草，以获得抗病毒烟草。下图为科研人员制备能合成鸡干扰素的烟草愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，两种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：

（1）步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是______。科研人员还在两种引物的一端分别加上了_________和__________序列，以便于后续的剪切和连接,一个DNA分子三轮复制以后，含有两种引物的DNA分子有________个． 为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用两种限制酶，选择的原则是________。

A．Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点

B．目的基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点

C．酶切后，目的基因形成的两个黏性末端序列不相同

D．酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同

（2）步骤②所构建的基因表达载体中未标注出的必需元件还有__________，步骤③中需先用_____处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。

（3）步骤④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过_______获得DNA，再进行PCR扩增，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是__________。

2016年9月15日天宫二号在酒泉卫星发射中心发射成功，高等植物拟南芥就幸运地当选为“植物航天员”。多年来围绕拟南芥的相关研究很多，尤其是对于拟南芥转基因研究非常热门，当前拟南芥转基因所使用的方法主要是农杆菌介导的转化，在拟南芥搭载升空前植物学家预先用转基因技术给拟南芥体细胞用绿色荧光蛋白（GFP）基因标记。

（1）该绿色荧光蛋白（GFP）基因取自某种生物的cDNA文库。若想短时间内得到大量的绿色荧光蛋白（GFP）基因，所用技术的中文名称是_____________，其条件除了原料、能量、模板外还需要加入_________、____________。

（2）农杆菌转化法中Ti质粒的T-DNA（可转移的DNA）可整合到植物细胞中___________上，所以构建基因表达载体时，需将目的基因插入到T-DNA序列中，该过程用到的工具酶有________________。

（3）通常采用____________技术检测绿色荧光蛋白（GFP）基因是否插入到拟南芥基因组中。若将含有绿色荧光蛋白（GFP）基因的拟南芥细胞培育出完整植株，需要运用的主要生物技术是____________，该技术的理论基础是___________________。

丹参酮是从中药丹参中提取的具有抗肿瘤活性的脂溶性菲醌化合物，其作用机制之一是诱导细胞凋亡。以下是相关的实验研究过程及结果：

实验材料：人肝癌细胞(HepG2)，培养液，0.02%二甲亚砜溶液，用0.02%二甲亚砜溶解的0.5ug/mL、1ug/mL、1.5ug/mL的丹参酮溶液，培养瓶等。

①将等量的人肝癌细胞(HepG2)悬液，分别接种于若干含有等量培养液的培养瓶中；将培养瓶放于37℃、5%CO₂培养箱中培养24 h，静置、去掉上清液；

②________________________________________________________________________，

再加入等量的培养液，于37℃、5%CO₂培养箱中继续培养；

③培养72h，每24h用细胞计数仪检测癌细胞数。

(1)请完善上述实验步骤中相关内容。

(2)本实验的自变量是________________。实验验中，每组细胞培养瓶不止一个，统计后代求平均值，目的是________________。

(3)设对照组癌细胞增殖率为100%，用下面公式计算各用药组癌细胞增殖率：增殖率(%)＝[(用药组各时段癌细胞数－用药组开始癌细胞数)/(对照组各时段癌细胞数－对照组开始癌细胞数)]×100，得到以下数据：

表1 丹参酮对HepG2细胞增殖率的影响/%

通过数据分析可以得出丹参酮对HepG2细胞的作用效果的特点是：___________________________________________________________________。

(4)顺铂(DDP)是一种DNA损伤药物，也是目前临床上多种癌症化疗的首选药物。若要探究丹参酮联合顺铂对HepG2细胞生长的影响，应还需设置____________________________用药组才能得出结论。

如图甲、乙分别是两类高等生物细胞的亚显微结构模式图，请据图回答问题。

(1)在图甲、图乙所示细胞中都存在，且含有核酸的细胞器有________________(填编号)，其中不符合孟德尔遗传规律的遗传物质存在于________(填编号)中。

(2)图甲中具有双层膜结构的细胞器是______________(填编号)；图乙中能够产生ATP的场所是 ________(填编号)。

(3)图甲、图乙所示的两细胞中，含遗传物质的结构有________________(填编号)，能产生水的细胞器有________(填编号)。

(4)在光照充足处，给图甲所示细胞提供含¹⁴C的CO₂，在结构⑨中¹⁴C的转移途径是_______ →________ → _________(用物质名称表示)。

(5)如果用某种药物处理图乙所示细胞，发现其对Ca^2＋的吸收速率大大降低，而对其他物质的吸收速率没有影响，说明这种药物的作用是破坏了Ca^2＋的___________。

(1)在甲、乙两细胞中都存在,且含有核酸的细胞器有 (填编号),图甲若为洋葱根尖分生区细胞,则不应有     (填编号)结构。 

(2)图甲中具有双层膜结构的细胞结构是     (填编号)。 

(3)甲、乙两细胞均经过有丝分裂过程形成,则主要是细胞周期中的     期和     期有区别。 

(4)若乙细胞为消化腺细胞,将³H标记的亮氨酸注入该细胞,在该细胞的膜性结构中³H出现的顺序依次是     (用箭头和标号表示)。 

(5)在光照充足处,给甲细胞提供含¹⁴C的二氧化碳,那么在结构⑨中¹⁴C的转移途径是     (用箭头和物质名称表示)。 

器官移植在当今的疾病治疗中普遍被应用，但在全世界的临床医学上普遍存在供体器官不足和器官移植后发生免疫排斥反应问题。为了解决上述问题，人们提出了很多设想。请根据所学知识回答下列问题：

（1）器官移植发生的免疫排斥反应属于__________（填“体液免疫”或“细胞免疫”）。__________的应用大大提高了器官移植的成功率，给需要进行器官移植的患者带来了福音。

（2）现代医学证明，可从新生儿剂带血中分离出细胞，若将来需进行器官移植，可通过培养该类细胞并加入__________因子以培育出人造组织器官，用于自身移植，这样可避免免疫排斥反应。

（3）借助核移植技术获得器官：哺乳动物核移植可以分为____________核移植（比较容易）和体细胞核移植（比较难）。对于需要进行器官移植的成年患者，可取出病人正常的体细胞，进行细胞培养，将其注入处于____________期的去核卵母细胞中，通过电刺激方法使两细胞融合，然后用物理或化学方法激活受体细胞，使____________发育成器官，由于核基因来自于病人自身，所以器官移植后也不会发生免疫排斥反应。

（4）为了扩大器官供体的来源，科学家试图利用基因工程手段抑制或祛除抗原决定基因，再利用克隆技术，培育出没有免疫排斥反应的猪器官，从而解决供体短缺问题。获得该转基因猪的核心步骤是__________，在该过程中，能驱动基因转录出mRNA的是_______________。

猪的肌肉生长抑制素(MSTN)基因可抑制肌细胞的增殖和分化。CRISPR/Cas9是一种最新出现的基因编辑技术，其主要过程是向导RNA(gRNA，含与目的基因部分序列配对的单链区)与Cas9核酸酶结合，引导Cas9核酸酶对DNA局部解旋并进行定点切割。科研人员利用该技术定向敲除猪胎儿成纤维细胞中MSTN基因，以期获得生长速度快、瘦肉率高的新品种。过程如下图，其中BsmBⅠ、KpnⅠ、EcoRⅠ表示相应限制酶的识别位点。分析回答：

(1)图中①过程用到的工具酶有________，图中gRNA基因序列设计的主要依据是_  _。

(2)科研人员可利用____                ____(方法)将重组质粒导入猪成纤维细胞，经_______           _过程合成Cas9核酸酶。

(3)过程③与DNA复制相比，特有的碱基配对方式有___________      ___。

(4)分析发现某基因敲除细胞株中MSTN基因的表达水平为正常细胞的50%，说明__________________。

(5)欲利用MSTN基因缺失成纤维细胞培育成MSTN基因缺失猪，请简要写出基本的流程。________________                                               ___。