下图表示某科学家利用胚胎干细胞对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗的相关过程，据图回答下列问题：

（1）步骤①②利用的技术名称分别是                 、                     。图中造血干细胞中的遗传物质至少有         个来源。

（2）若利用PCR技术扩增目的基因并完成图示小鼠的基因治疗，涉及的酶有限制性核酸内切酶、DNA连接酶、耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）和                  等。

（3）下图所示的一个质粒分子经EcoRⅠ切割前后，分别含有      、          个游离的磷酸基团。由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，故利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从下图A、B、C、D四种单链DNA片段中选取       作为引物。一个目的基因通过PCR技术扩增第n次时，需要        个引物。

（4）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发       色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否转录，可以采用                        的技术。

Ⅰ.下图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图。复制原点是质粒能正常复制的必需组成。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因。EcoRⅠ、PvuⅠ为相应的限制酶切割位点，括号内的数据是该切点与复制原点  的距离，单位为kb（1kb = 1000个碱基对长度）。请回答下列问题：

（2）该基因来自__________________（填“基因组文库”或“cDNA文库”）。

（3）翻译时与密码子发生碱基互补配对的是__________上的反密码子。

(1) 制作固定化酵母细胞时，使用了图甲中方法〔  〕________（填出标号及名称），在该实验中，完全溶化的海藻酸钠溶液必须________ 后再与酵母细胞混合。充分混合均匀的酵母菌—海藻酸钠胶液可在饱和________溶液中形成凝胶珠。

 (2) 图乙表示________的实验过程, 通过B所示步骤得到滤液后，再向滤液中加入2moL/L的NaCl溶液的目的是________,C所示步骤加入蒸馏水的目的是________。

（1）果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌的代谢类型是_________________；多种微生物参与了豆腐的发酵，其中其主要作用的是________________，泡菜的制作离不开_____________；（2）醋酸菌发酵过程当缺少糖源时，醋酸菌将_______变成_______，再将其变成_______。

（3）在实验室培养微生物时，获得纯净培养物的关键是_________________；

（4）在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的_____________将尿素分解成了___________，

从而使培养基碱性增强。

(5)分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是至少由3种组分组成的符合酶，葡萄糖苷酶则将___________分解成_____________。在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时，CR可与纤维素等多糖形成_______色复合物，用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基中会出现以该菌落为中心的__________________，这种培养基属于_____________(填“选择”或“鉴别”)培养基

（1）用基因工程方法制备HIV的某蛋白（目的蛋白）时，可先提取HIV中的       ，以其作为模板，在             的作用下合成           。获取该目的蛋白的基因，构建重组表达载体，随后导入受体细胞。

（2）从受体细胞中分离纯化出目的蛋白，该蛋白作为抗原注入机体后，刺激机体产生的可与此蛋白结合的相应分泌蛋白是        。该分泌蛋白可用于检测受试者血清中的HIV，检测的原理是           。

（3）已知某种菌导致的肺炎在健康人群中罕见，但是在艾滋病患者中却多发。引起这种现象的根本原因是HIV主要感染和破坏了患者的部分        细胞，降低了患者免疫系统的防卫功能。

（4）人的免疫系统有        癌细胞的功能，艾滋病患者由于免疫功能缺陷，易发生恶性肿瘤。

某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Amp^r或Tet^r中会导致相应的基因失活（Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因）．有人将此质粒载体用BamHI酶切后，与用BamHI酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化．被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌．回答下列问题：

生物技术实践与人们生产和生活密切相关，请回答下列有关问题：

（1）无菌技术主要通过消毒和灭菌来避免杂菌污染，常用的灭菌方法有________灭菌、干热灭菌和________灭菌。

（2）在制作果醋过程中，榨取的果汁非常浑浊，解决方法是__________________________。

（3）进行菊花组织培养的基本实验操作步骤是:制备MS固体培养基、________、接种、培养、移栽、栽培,花药离体培养时,选择合适发育时期的花粉能提高诱导成功率,确定花粉发育时期最常用的染色方法是______,花药经脱分化产生胚状体还是愈伤组织主要取决于培养基中___________；

（4）橘皮精油的提取之所以不采取水蒸气蒸馏法，是因为该方法会导致原料________和有效成分________等问题。