科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊，以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子IX医用蛋白，其技术路线如图。

（1）由过程①获得的A为_____          ____。

（2）在核移植之前，必须先去掉受体卵母细胞的核，目的是______________________。受体应选用________期卵母细胞。

（3）进行胚胎移植时，代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生______________，这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。

（4）采用胎儿成纤维细胞进行转基因体细胞克隆，理论上可获得无限个转基因绵羊，这是因为__________________________________________。

以下是生物学技术制备抗体的两个途径模式简图。

（1）上图中过程①的完成采用的方法有：________，依据的生物学原理________。

（2）过程④要用到的酶有________，过程⑥采用的方法叫________。上图中的质粒本身含有氨苄青霉素抗性基因和M、N两种限制酶（两种酶切割序列完全不同）切割位点。若用限制酶M和N切割，通过凝胶电泳分离，分析得到下表。

（3）该质粒长度为________kb，在该质粒中，M酶与N酶的切割点分别有________、________个。

（4）氨苄青霉素抗性基因的作用是________________________。

小鼠基因敲除技术获得2007年诺贝尔奖，该技术采用基因工程、细胞工程、杂交等手段使小鼠体内的某一基因失去功能，以研究基因在生物个体发育和病理过程中的作用。例如现有基因型为BB的小鼠，要敲除基因B，可先用体外合成的突变基因b取代正常基因B，使BB细胞改变为Bb细胞，最终培育成为基因敲除小鼠。

(1)基因敲除过程中外源基因是否导入受体细胞，可利用重组质粒上的________检测。如果被敲除的是小鼠抑癌基因，则可能导致细胞内的                          被激活，使小鼠细胞发生癌变。

(2)通过基因敲除，得到一只AABb小鼠。假设棕毛基因A、白毛基因a、褐齿基因B和黄齿基因b均位于常染色体上，现要得到白色黄齿新类型小鼠，用来与AABb小鼠杂交的纯合亲本的基因型是________，杂交子代的基因型是________。

(3)在上述F₁代中只考虑齿色这对性状，假设这对性状的遗传属X染色体伴性遗传，则表现黄齿个体的性别是________，这一代中具有这种性别的个体基因型是                                                      。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

阅读如下材料：

资料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵中，得到了体型巨大的“超级小鼠”；科学家采用农杆菌转化法培育出转基因烟草。

资料乙：T₄溶菌酶在翁度较高时易失去活性，科学家对编码T₄溶菌酶的基因进行了改造，使其表达的T₄溶菌酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提高了T₄溶菌酶的耐热性。

资料丙：兔甲和兔乙是同一物种的两个雌性个体，科学家兔甲受精卵发育成的胚胎移植到兔乙的体内，成功产出兔甲的后代，证实了同一物种的胚胎可在不同个体的体内发育。

回答下列问题：

（1）资料甲属于基因工程的范畴。将基因表达载体导入小鼠的受精卵中常用      法。构建基因表达载体常用的工具酶是           。在培育有些转基因植物时，常用农杆菌转化法，农杆菌的作用是                                。

（2）资料乙中的技术属于   工程范畴．该工程是指以分子生物学相关理论为基础，通过基因修饰或基因合成，对     进行改造，或制造一种    的技术。在该实例中，引起T4溶菌酶空间结构改变的原因是组成该酶肽链的     序列发生了改变。

（3）资料丙属于胚胎工程的范畴。胚胎移植是指将获得的早期胚胎移植到 种的、生理状态相同的另一个雌性动物体内，使之继续发育成新个体的技术。在资料丙的实例中，兔甲称为                       体，兔乙称为                       体。

hNaDC3（人钠/二羧酸协同转运蛋白-3）主要分布于肾脏等重要器官，它具有促进人肾小管上皮细胞能量代谢和转运等功能。科研人员利用基因工程技术构建绿色荧光蛋白与hNaDC3融合基因，并在肾小管上皮细胞中表达，以动态观察hNaDC3在肾小管上皮细胞中的定位情况，为进一步研究hNaDC3的生理功能奠定基础。研究主要过程如图（实验中使用的限制酶SacⅠ的识别序列是GAGCT↓C，限制酶SacⅡ识别序列是CCGC↓GG）。请分析回答：

（1）与PCR相比，过程①需要的特有的酶是    _，应从人体     _（器官）的组织细胞中获得模板RNA。

（2）DNA分子被SacⅠ切割后，形成的黏性末端是      _ 。过程②选用SacⅠ、SacⅡ分别切割hNaDC3基因和质粒载体，可实现目的基因定向插入并正常表达的原因是       _   。

（3）过程③可获得多种重组DNA，可依据不同DNA分子的大小，运用       _（技术）分离、筛选重组表达载体。

（4）显微观察导入“绿色荧光蛋白-hNaDC3融合基因”的猪肾小管上皮细胞后发现：转染后第1天绿色荧光混合分布于细胞质和细胞膜，核中未见绿色荧光；到第5天绿色荧光清晰聚集于细胞膜，细胞质和细胞核中未见绿色荧光。根据这一观察结果还不能得出“hNaDC3是在细胞质中生成后，在细胞膜上发挥作用”的结论，需要设置对照实验以排除绿色荧光蛋白本身的定位，对照实验的设计思路是      _  。

（5）研究人员以较高浓度的葡萄糖溶液培养导入融合基因的猪肾小管上皮细胞，一段时间后发现，转染细胞的细胞膜上绿色荧光明显增强。这一实验结果可以说明        _。

（8分）抗草胺磷(一种除草剂)转基因大豆的培育过程如图所示。

(1)用________________处理，获得上图中所示的“来自矮牵牛的抗草胺磷基因”、含有抗四环素基因的“质粒”。其中质粒上“抗四环素基因”的作用是________________________________________________________________________。

(2)图中①应为_______________________________。

(3)部分农杆菌不能在培养基(含四环素)上生长的原因是___________________________。

(4)在A→D过程中，A→B过程在恒温箱中________(填“避光”或“光照”)培养，注意观察、记录________________的生长情况。

(5)从某种蛋白质的氨基酸序列出发，利用________方法获得目的基因，通过基因工程可以生产自然界中不存在的蛋白质。下列有关基因工程中运载体的描述，正确的是________。(多选)

A．能够在宿主细胞中复制并稳定保存是运载体的必备条件之一   

B．一种运载体只能运载一种目的基因

C．使用的运载体有质粒、λ噬菌体衍生物和动植物病毒等

D．基因表达载体的构建是一样的，不因受体细胞种类、目的基因导入方法的不同而有所差异

下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。

据图回答：

(1)图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含________的培养基上进行。

(2)过程①可采用的操作方法是________。

(3）重组质粒中除含目的基因和标记基因外，还需有         、         等调控序列，标记基因的作用是                               。

（4）为了检测人乳铁蛋白基因是否转录出了mRNA，可用标记的人乳铁蛋白基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为____________。为了检测人乳铁蛋白基因转录的mRNA是否翻译成蛋白质，常用             技术。

（5)如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的________中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的________上。

为了使番茄的耐寒能力大大提高，科学家将鱼的抗冻蛋白基因转入番茄。回答下列相关问题：

（1）在该过程中，研究人员首先获取目的基因，并采用PCR技术対目的基因进行扩增，该技术需要的条件是：          、模板、原料和引物。引物必须能和模板DNA的______（填“3’末端”或“5’末端”）结合。

（2）若要使目的基因在受体细胞中表达,需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是__________________________(答出两点即可).为了确保在番茄中获得抗冻蛋白，必须在抗冻蛋白基因的首端添加特定的          。基因工程核心步骤是                     。

（3）研究人员通常采用          法将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄细胞内，通常采用          技术，在分子水平检测目的基因是否翻译成了相应的蛋白质。若培养的转基因番茄抗冻能力没有明显的提高，则理论上应该调整基因结构的______部分的碱基序列。

随着生活水平的提高，糖尿病的患病率增加，胰岛素是治疗糖尿病的常用药，可通过基因工程创造出“胰岛素羊”(该羊的乳汁中含有胰岛素)，为糖尿病患者带来福音。利用该技术生产胰岛素的过程如图所示。

重组DNA受体细胞转基因羊提取胰岛素

回答下列问题：

(1)为保证实验成功，产生胰岛素的基因可从cDNA文库中获取，然后与________相连构建成为重组DNA；图中过程②是通过________等方法，将重组DNA导入羊的________获得受体细胞。

(2)图中过程③是先通过动物细胞培养形成早期胚胎，然后将胚胎移植到经过________处理的受体母羊子宫内。目前对动物细胞所需的营养条件还没有完全研究清楚，在早期胚胎的培养中往往还需要添加________。若利用一个早期胚胎一次产生两头转基因“胰岛素羊”，可将该胚胎进行________处理。

(3)若该“胰岛素羊”(已知重组DNA已进入细胞)乳汁中检测到胰岛素，其乳腺细胞分泌的胰岛素与转基因“胰岛素细菌”产生的胰岛素相比所具有的优点_____________，原因是__________________________。