回答下列几个实验问题

（1）在“用高倍镜观察线粒体”的实验中，______________染液是将活细胞中的线粒体染色的专一性染料，可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色。

（2）在“观察根尖分生组织细胞的有丝分裂”实验中，将剪取的洋葱根尖放入盛有盐酸和酒精混合液的玻璃皿中的主要目的是___________________________________________________。

（3）在“探究酵母菌细胞呼吸方式”的实验中，用________________________在酸性条件下与酒精发生化学反应呈现灰绿色，来证明酒精的存在。

（4）在“绿叶中色素的提取和分离”的实验中，加入CaCO₃的目的是________________，通过指层析法，最后在滤纸条上出现的四条色素带中，最宽的色素带的颜色是__________________。

（5）用于鉴定还原糖存在的斐林试剂是用等体积的0.1g/ml的NaOH和0.05g/ml的________________配置而成的。

（6）在“探究温度对酶活性的影响”的实验中，自变量是 ________________          。

（7）1864年萨克斯做了一个实验，把绿色植物放置在__________________环境中几个小时后，再曝光处理，并用碘蒸气处理叶片，从而证明光合作用的产物有淀粉。

回答下列问题：

（1）博耶( H. Boyer)和科恩(S. Coben)将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌细胞中进行了表达，该研究除证明了质粒可以作为载体外，还证明了_____(答出两点即可)。

（2）体外重组的质粒可通过Ca²⁺参与的_______方法导入大肠杆菌细胞：而体外重组的噬菌体DNA通常需与_______组装成完整噬菌体后，才能通过侵染的方法将重组的噬菌体DNA导入宿主细胞，在细菌、心肌细胞、叶肉细胞中,可作为重组噬菌体宿主细胞的是__________。

（3）真核生物基因(目的基因)在大肠杆菌细胞内表达时,表达出的蛋白质可能会被降解。为防止蛋白质被降解，在实验中应选用________的大肠杆菌作为受体细胞,在蛋白质纯化的过程中应添加______的抑制剂。

（2）体外重组的质粒可通过Ca²⁺参与的_______方法导入大肠杆菌细胞：而体外重组的噬菌体DNA通常需与_______组装成完整噬菌体后，才能通过侵染的方法将重组的噬菌体DNA导入宿主细胞，在细菌、心肌细胞、叶肉细胞中，可作为重组噬菌体宿主细胞的是__________。

（3）某农业生态工程基地按照生态和经济规律，对种植业和养殖业进行了优化设计．通过套种、间种和轮种等技术的应用，增加农作物的种类，使种植的农作物为该生态系统组成成分中的消费者提供更多种类的食物。应用的生态学原理是___________________。

某基因工程中如图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列．现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．请回答：

（1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由______________________连接．

（2）若用限制酶SmaI完全切割图1的DNA片段，产生的末端是___末端，其产物长度为___________________．

（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T﹣A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d．从杂合子中分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有___种不同长度的DNA片段．

（4）若将图2中质粒和基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是______．在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加_____的培养基进行培养．经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是____________________________________________．

鸡干扰素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草，以获得抗病毒烟草。下图为科研人员制备能合成鸡干扰素的烟草愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，两种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：

（1）步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是______。科研人员还在两种引物的一端分别加上了_________和__________序列，以便于后续的剪切和连接,一个DNA分子三轮复制以后，含有两种引物的DNA分子有________个． 为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用两种限制酶，选择的原则是________。

A．Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点

B．目的基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点

C．酶切后，目的基因形成的两个黏性末端序列不相同

D．酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同

（2）步骤②所构建的基因表达载体中未标注出的必需元件还有__________，步骤③中需先用_____处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。

（3）步骤④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过_______获得DNA，再进行PCR扩增，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是__________。

腐乳和泡菜是我国民间传统食品，具有独特的风味。请你结合所学知识回答下列问题。

（1）腐乳制作主要是利用了毛霉等微生物产生的______________分别将脂肪分解为甘油和脂肪酸，将蛋白质分解为小分子肽和氨基酸。

（2）腐乳制作过程中要加入酒和多种香辛料配制的卤汤，其中酒的含量一般控制在______左右。

（3）泡菜制作时，需要向泡菜坛中加入“陈泡菜汁”的作用是_____________。

（4）在发酵初期，会有气泡从泡菜坛的坛沿水槽内的水中间歇性溢出，这些气泡来源于______、______。

（5）坛泡菜打开后，若不及时密封，一段时间后会在其表面出现一层白膜，这是__________（填微生物名称）繁殖引起的。

2016年9月15日天宫二号在酒泉卫星发射中心发射成功，高等植物拟南芥就幸运地当选为“植物航天员”。多年来围绕拟南芥的相关研究很多，尤其是对于拟南芥转基因研究非常热门，当前拟南芥转基因所使用的方法主要是农杆菌介导的转化，在拟南芥搭载升空前植物学家预先用转基因技术给拟南芥体细胞用绿色荧光蛋白（GFP）基因标记。

（1）该绿色荧光蛋白（GFP）基因取自某种生物的cDNA文库。若想短时间内得到大量的绿色荧光蛋白（GFP）基因，所用技术的中文名称是_____________，其条件除了原料、能量、模板外还需要加入_________、____________。

（2）农杆菌转化法中Ti质粒的T-DNA（可转移的DNA）可整合到植物细胞中___________上，所以构建基因表达载体时，需将目的基因插入到T-DNA序列中，该过程用到的工具酶有________________。

（3）通常采用____________技术检测绿色荧光蛋白（GFP）基因是否插入到拟南芥基因组中。若将含有绿色荧光蛋白（GFP）基因的拟南芥细胞培育出完整植株，需要运用的主要生物技术是____________，该技术的理论基础是___________________。