8.
图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ四种限制性核酸内切酶,它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题:
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(1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由_____连接。
(2)若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段,产生的末端是_____末端,所断开的化学键叫____键。
(3)若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换,那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图1及其对应的DNA片段,用限制酶SmaⅠ完全切割,产物中共有____种不同长度的DNA片段。
(4)为了提高试验成功率,需要通过___技术扩增目的基因,以获得目的基因的大量拷贝。
(5)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是_____。在导入重组质粒后,为了筛选出成功导入含目的基因D的重组质粒的大肠杆菌,需要用添加_____的培养基进行培养。
(6)目的基因D能“嫁接”到质粒上,其原因是_____(从DNA分子水平分析),在选出的大肠杆菌内基因D能成功表达的原因是_____。