在农业生产研究上，常常需要进行微生物的培养和计数。

(1) 下图是利用____________法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步分散到培养基的表面。

 (2) 分析下面培养基的配方：NaNO₃、KH₂PO₄、NaH₂PO₄、MgSO₄•7H₂O、KCl、H₂O。若此培养基用于培养分解尿素的细菌，则应除去上述_______成分，并加入______物质，以补充______源。若用于培养纤维素分解菌，应加入________物质，为检测纤维素分解菌的存在与否，还应加入_______染料，含纤维素分解菌将形成__________圈。

有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示.

（2）纯化菌株时，通常使用的划线工具是___________。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有________________________________________。

（3）为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是_________________________，该实验设计是否合理？为什么？_________________________________________________________________。

(1)图甲是利用__________法进行微生物接种，图乙是利用________法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是______和_________；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是________和酒精消毒。

(2)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？___________________。

(3)接种后，在固体培养基上培养细菌时为什么进行倒置培养？__________________。

I:回答与微生物有关的问题：

（1）泡菜在发酵过程中，起作用的微生物主要是_____和乳酸菌，其发酵产物中含有有机酸和_____等．

（2）腌制的食物中往往含有少量的亚硝酸盐，对亚硝酸盐的定量测定可以用_____法，因为亚硝酸盐与对氨基苯磺酸的反应产物能与_______偶联成_____色化合物．在实验过程中，测定的是_____值，以反映溶液中亚硝酸的含量．

（5）若存在杂菌污染，欲消除污染的杂菌，最简单的方法是________

（6）在培养大肠杆菌过程中，有关操作正确的是_____．

A．玻璃刮刀和接种环一样，只需灼烧灭菌

B．培养基分装到培养皿后进行灭菌

C．倒平板和取菌液都必须在酒精灯火焰旁进行

D．获得的菌种如果需要保存，可置于37℃恒温保存．

II：回答与基因工程有关的问题：如图表示运用基因工程技术生产胰岛素的三条途径．据图结合所学知识回答下列问题：

（1）①过程称为________，该过程中常用的酶有_________________，为了便于将含有目的基因的细胞筛选出来，所选择的质粒上应该具________．

（2）培育转基因羊的过程中，科研人员通过_______技术将重组质粒M转移到受体细胞A中，受体细胞A应该是_______（填“体细胞”“卵细胞”或“受精卵）．

（3）莴苣为双子叶植物，过程②常用的方法是___________，导人该细胞后，需对该细胞进行培养，经_________过程形成愈伤组织，再分化成幼苗长成转基因莴苣植株，此过程涉及的细胞工程技术是__________，该技术的原理是 ________________。

（4）过程⑥常用的方法是用________来处理大肠杆菌，使其易于吸纳重组质粒M．

结合以下图表分析，有关说法正确的是( )

A.青霉素和利福平能抑制DNA的复制 
B.环丙沙星和红霉素分别抑制细菌的①②和③ 

C.结核杆菌的④和⑤都发生在细胞质中  

D.①～⑤可发生在人体健康细胞中

（1）柚皮易焦糊，宜采用_________法提取柚皮精油，该过程得到的糊状液体可通过___________除去其中的固体杂质。

（2）筛选乳酸菌A时可选用平板划线法或____________法进行接种。对新配制的培养基灭菌时所用的方法是_______________。实验前需对超净工作台用____________进行消毒处理。

（3）培养基中的尿素可为乳酸菌A生长提供____________。在对该菌种进行培养时，与常规培养基相比，还需要额外在培养基中添加           。

（4）抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定透明圈的______________来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。

（1） 与乳酸菌相比，酵母菌在结构上的主要区别是。培养酵母菌R时，培养基中的蔗糖和硝酸盐可分别为酵母菌R的生长提供。

（2）采用平板划线法接种酵母菌R时，需先灼烧接种环，其目的是。培养基通常采用的灭菌方法是。 

（3）为了验证萃取物是否是胡萝卜素，该同学将叶绿素b、叶绿素a、叶黄素、萃取物和色素混合液(含叶绿素b、叶绿素a、叶黄素和胡萝卜素)依次点样在滤纸的1、2、3、4、5位置（如图甲所示），并进行层析，滤纸条上各色素带的位置为（填字母）时，即可说明该萃取物最可能是胡萝卜素。

（4）酵母菌R能分泌A、B两种酶，下图是某课题组关于这两种酶的实验结果：

①图中结果显示，在40℃至60℃范围内，热稳定性较好的酶是。高温条件下酶容易失活，其原因是。

②由图可知，若要从酵母菌R种群中筛选出能产生热稳定性高的酶的菌株，应在的条件下培养。

(1)泡菜制作时发挥主要作用的微生物是乳酸菌，常见的乳酸菌有________两类。泡菜具有独特的酸味，主要是因为________，该反应过程中，底物所含的稳定化学能的主要去向是________。

(2)实验室可采用________法进行乳酸菌菌种纯化，在对该菌种进行培养时，与常规微生物培养基相比还需要额外在培养基中添加________。实验室测定泡菜中亚硝酸盐的含量时，亚硝酸盐首先与________发生反应，随后再通过相关反应形成玫瑰红色染料，再与已知浓度的________进行比色。

(3)市场上购买的真空包装泡菜，在没有发生漏气的状态下发生了“胀袋”现象，甲同学怀疑是杂菌污染导致的，乙同学怀疑是乳酸菌大量繁殖导致的，说出你支持谁的观点并说明理由：________。

略

⑴主要步骤：

①制备两种培养基：一种是＿＿＿＿培养基，另一种＿＿＿＿＿的培养基。分别分成两份，依次标上A，A^／的B，B^／，备用。

②分别向A、B培养基中接种＿＿＿＿＿＿。

③接种后，放在恒温箱中培养3～4天。

④分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌种，接种到A^／、B^／培养基中。

⑤接种后，把A^／、B^／培养基放入恒温箱中培养3～4天。

⑵回答问题：

在步骤①中，为保证无杂菌污染，实验中应采用的主要措施有＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

第④⑤两个步骤的目的是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

（2）用基因工程技术从经过分离、提纯的圆褐固氮菌中获取固氮基因，然后进行PCR扩增。下列表1和表2分别表示用PCR扩增固氮基因的反应体系及反应条件。

①从上表中可得出，PCR技术与DNA复制相比较，主要区别之一是                                                         。

     此外，从反应条件看，所使用的DNA聚合酶应具有__________的特点。每次循环都需要2种引物的主要原因是_______________           ________________。

②下图为第1轮循环产生的产物。请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物。