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            • 1. 自生固氮菌是一类能独立固定氮气的细菌,其中有些好氧的种类能产生PHB(一种可以被生物降解的塑料).现欲获得高产PHB的自生固氮菌菌种,操作流程如下:采集土样→富集培养→分离、纯化培养→初步筛选PHB固氮菌→筛选高产PHB固氮菌→保存备用.回答下列问题:
              (1)富集培养时,为达到筛选自生固氮菌的目的,在配制培养液时不应添加 ______ .培养时要将装有培养液的锥形瓶放置在摇床上,其目的是 ______
              (2)进行分离、纯化培养时,要先将培养基倒入培养皿中,制成平板.此时所使用的培养基与富集培养时有所不同,其中添加了一定量的 ______ .倒平板时,要待高压灭菌后的培养基 ______ ,再在 ______ 附近操作.平板冷凝后,需置于恒温箱中1-2天后再用于接种,目的是 ______
              (3)分离纯化培养后,得到8种形态特征有所不同的单菌落.经染色鉴定,其中3种能产生PHB.那么如何进一步筛选出高产PHB的菌种呢?请说出你的实验思路. ______
            • 2.
              细菌在自然界中数量多少是环境污染程度的重要指标之一.某校生物兴趣小组为了调查当地一条河流中细菌的污染情况而进行了实验.请回答与此实验相关的问题:
              (1)牛肉膏蛋白胨培养基是常用的细菌基础培养基,该小组同学打算配制固态培养,在配制时需添加 ______ 作凝固剂.培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了 ______ 和 ______ .除此之外,培养基还必须含有的基本成分是 ______ 和 ______ .
              (2)下列材料或用具中,需要灭菌的是 ______ ;需要消毒的是 ______ .(填序号)
              ①培养皿      ②玻璃棒、试管、锥形瓶       ③实验者的双手
              (3)实验室最常用的灭菌方法是利用高温处理达到灭菌效果.高温灭菌可分为 ______ 和 ______ 两大类,其中 ______ 灭菌效果好.
              (4)若要统计每毫升河水样品中活菌数目,可以根据河水样品的稀释倍数和接种稀释液的体积,统计平板上的 ______ 就能大约推测出样品中活菌数.
            • 3.
              生活饮用水巳经过沉淀、过滤、加氯消毒等处理,含微生物很少,但当其水源水不洁或处理达不到要求时,仍然会含相当量的微生物甚至含有致病性微生物.供水管道破损及二次供水等环节也可能导致生活饮用水的污染.因此生活饮用水的微生物安全性日常检测是很重要的.我国生活饮用水水质标准(GB5749-85)中规定生活饮用水中细菌总数不得大于100个/mL,总大肠菌群不得大于3个/L.
              (1)检验大肠杆菌的含量时,通常将水样进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,记录菌落数量,这种方法称为 ______ .
              (2)用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组?为什么? ______
              (3)如分别取0.1mL已稀释103倍的水样分别涂布到四个琼脂固体培养基的表面进行培养,培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为161、155、158、170,则每升原水样中大肠杆菌数为 ______ .
              (4)纯化大肠杆菌时使用的培养基一般用 ______ 法灭菌, ______ (可/不可)用加入抗生素的方法防止杂菌感染.
              (5)如果要测定水中的病毒种类,可以用 ______ 技术使其遗传物质扩增,然后用 ______ 技术进行鉴定.
            • 4. 分离分解纤维素的微生物的实验流程:土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品接种到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选符合要求的菌落.请回答下列问题.
              (1)“土壤取样”一般选择 ______ 的环境.进行选择培养的目的是 ______
              (2)分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶,该酶是由3种组分组成的复合酶,其中的葡萄糖苷酶可将 ______ 分解成 ______
              (3)在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时,CR可与纤维素形成 ______ 色复合物,但不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应.用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时,培养基上会出现以该菌的菌落为中心的 ______ .据此可以筛选纤维素分解菌.
              (4)为从土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落,某同学设计了甲、乙两种培养基(成分见下表):
              酵母膏 无机盐 淀粉 纤维素粉 琼脂 CR溶液
              培养基甲 + + + + - + +
              培养基乙 + + + - + + +
              注:“+”表示有,“-”表示无.
              据表判断,培养基甲 ______ (填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌,原因是 ______ ;培养基乙 ______ (填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌,原因是 ______
              (5)将样品用 ______ (填“划线法”或“涂布法”)接种到鉴别纤维素分解菌的培养基上,具体操作都要在 ______ 附近进行.
            • 5. (14分)

              Ⅰ.转基因克隆猪已在我国培育成功。研究组首先从猪胚胎皮肤细胞中分离出纤维细胞,进行体外培养。通过电穿孔的方法将构建好的基因表达载体转入纤维细胞,经筛选后将转基因纤维细胞进行体细胞克隆,再将重组胚胎移入代孕母猪子宫内,最终获得转基因克隆猪。请回答:

              (1) 在对猪纤维细胞进行培养时,需要在细胞培养液中添加一定量的           ,以防止培养过程的污染。此外,应定期更换培养液,防止              对细胞自身造成危害。

              (2) 筛选转基因细胞时,需要用到基因表达载体中的               

              (3) 在进行体细胞克隆前,先要从屠宰场收集猪卵巢,采集             ,并在体外培养成熟。然后将转基因纤维细胞核注入           中,再经过一系列过程获得含有目的基因的重组胚胎。

              (4) 为了提高重组胚胎的利用率,可对处于           阶段的胚胎进行均等分割,再将重组胚胎移入代孕母猪子宫中继续发育成转基因克隆猪。一般地,代孕母猪需要用激素处理,促使其           以利于受孕。

              Ⅱ.土壤中有些细菌含有脲酶,可通过降解尿素作为其生长的氮源。现对土壤中的这类细菌进行分离实验,请回答:

              (1) 分离培养细菌时必须进行无菌操作,包括培养基和各种器皿都必须是无菌的,常用的灭菌方法有              (至少答2种)。

              (2) 可用                法分离纯化得到能降解尿素的菌种。在接种活菌的过程中,要在          旁进行操作,接种后的培养皿            于37℃的            中培养。

              (3) 用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌,若培养基中存在分解尿素的细菌,其菌落周围会出现红色环带,这是由于尿素被分解产生的            使PH升高,使酚红指示剂产生颜色变化,从而证明这一菌株以尿素为氮源。变色区域越大,表明该菌株利用尿素的能力                

            • 6.

              生物乙醇是汽油的良好替代品,美国主要以玉米为原料生产燃料乙醇。我国则坚持“不与人争粮,不与粮争地”的原则,利用农作物废弃物——秸秆代替粮食作为原料,其主要技术流程为:秸秆→秸秆颗粒①反应罐水解②压滤出渣③酒精发酵④蒸馏。

              (1)过程①加入了微生物,其作用是把秸秆颗粒分解。从土壤中获取①所需微生物的过程称为微生物的_________,选择培养基应以__________为唯一碳源。纯化菌种时,将筛选获得的菌液用______________法或______________法接种到培养基上。

              (2)酒精发酵阶段接种的微生物是       ,生产酒精要控制的必要条件是           

              (3)在培养微生物的过程中,对培养基和接种环采用的灭菌方法分别是___________、________________。

            • 7. 35-40%的甲醛水溶液(福尔马林)可作为防腐剂,其防腐的原理是使蛋白质变性.自然界中有能分解甲醛的细菌和真菌.图为分离和纯化分解甲醛细菌的实验过程.请分析回答:

              (1)②过程的目的是 ______ ,③过程培养出的是 ______
              (2)上述实验中,不需要进行灭菌处理的是 ______ ,培养基灭菌的常用方法为 ______
              (3)由③→④的接种可选用 ______ 法,通过培养能获得 ______ .经过⑤过程后,取样测定甲醛浓度,选出 ______ ,再分离、培养菌株.此菌种异化作用的类型是 ______
              (4)为研究甲醛初始浓度对菌株降解甲醛能力的影响,进行了相应实验并得到如下结果.由图可知,当甲醛的初始浓度小于1200mg/L时,菌株 ______ ;当甲醛的初始浓度增高至1600mg/L时,48小时后菌株对甲醛的降解能力很弱,甚至失去降解能力,其原因可能是 ______
            • 8. 办公和学习产生大量废纸,其主要成分是木质纤维,人类正努力将其转化为一种新的能源乙醇.如图是工业上利用微生物分解纤维素生产乙醇的基本工作流程,请回答相关问题:

              (1)自然界中①环节需要的微生物大多分布在            的环境中.将从土壤中获得的微生物培养在以            为碳源,并加入            的培养基上,筛选周围有            的菌落.

              (2)分解废纸中纤维素的微生物能分泌纤维素酶,该酶是由3种组分组成的复合酶,其中的葡萄糖苷酶可将           分解成           

              (3)根据测定结果,①环节常选择毛霉,则②中获得的酶是           .该酶至少包括三个组分                       

              (4)纸张加工过程中,有时要加入一些由植物芳香油制成的香精,芳香油的提取方法有                          等(至少写出2种);也可以用植物色素使纸张着色,根据植物色素易溶于有机溶剂的特点,可以考虑使用           法提取植物色素.

            • 9. 请回答下列有关生物技术实践方面的问题:
              (1)传统发酵技术应用十分广泛,果酒和果醋就是常见例子.当发酵装置由果酒酿造转为果醋酿造时,首先要提高 ______ ,其次要注意通入 ______
              (2)微生物培养基通常在压力为lOOkPa,温度为 ______ ℃条件下,灭菌15至30min,然后待培养基冷却至 ______ ℃时,在酒精灯火焰附近倒平板.
              (3)菊花的组织培养,一般选择 ______ 的茎上部新萌生的侧枝;进行菊花组织培养时,一般将pH控制在 ______ 左右,温度控制在18℃至22℃并每天光照12h.
              (4)植物芳香油的提取方法有蒸馏、压榨和萃取等,柑橘芳香油的制备通常使用 ______ 法为提高出油率,需要将柑橘皮干燥去水,并用 ______ 浸泡.
            • 10. 野菊花气味芬芳,具有清热解毒的功效,可用来制备芳香油,制备原料可从通过植物组织培养技术所获得的大量菊花中选取。

              (1)菊花的组织培养需在________培养基上进行,选取________冲洗干净,用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分,放入体积分数为70%的酒精中摇动2—3次。

              (2)外植体经过________过程培育成植株幼苗,该过程的关键激素是________

              (3)接种操作需在酒精灯火焰旁进行,每次使用完器械后,需采用________灭菌。

              (4)菊花精油具有易挥发,难溶于水,化学性质稳定的特点,适合采用________法提取。当蒸馏瓶中的原料和水的量一定时,蒸馏过程中影响精油提取量的主要因素有蒸馏时间和________。

              (5)如果蒸馏过程中不进行冷却,则精油提取量会减少,原因是________

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