(2)为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以________为碳源的固体培养基进行培养。

(3)若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用____________直接计数；若要测定其活菌数量，可选用________法进行计数。

(4)为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35 ℃、40 ℃、45 ℃温度下降解10 g油脂所需酶量依次为4 mg、1 mg、6 mg，则上述三个温度中，________℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕________℃设计后续实验。

下图表示细胞融合技术的一些过程。阅读下列材料，并简要回答下列问题。

(注“十”代表有抗性，“-”代表无抗性）

材料一:近年来，细胞工程已进人高速发展阶段，已经成为生物学领域中一颗耀眼的明星。该工程可在细胞水平或细胞器水平上，按照人们的意愿获得新型生物或特种细胞产品。

材料二：微生物采油的关键技术是获得性能优异的菌种，应用原生质体融合技术将两种微生物进行融合，构建耐中高温采油微生物引起了科学家的广泛关注。宋绍富等人选用细菌I和细菌JD先后进行了各自抗生素抗性以及融合实验的相关研究。研究发现，I菌与JD菌对不同抗生素的抗性是不同的，测量结果见上表。

（1）上图中，若A细胞和B细胞均为植物细胞，细胞融合完成的标志是____________ ；形成的D细胞还要应用植物组织培养技术将其培养成植株。

（2）上图中，若A细胞和B细胞均为动物细胞，与植物细胞融合相比，从A细胞和B细胞到C细胞的过程中，______________是诱导动物细胞融合特有的诱导因素，该过程说明了细胞膜具有_______________。

（3）利用I菌和JD菌进行细胞融合时，首先应使用 _______________法去除菌体的细胞壁，将获取的______________保存在等渗溶液中待用。

（4）在对I菌和JD菌融合后的融合子进行筛选时，比较理想的是在培养基中添加3μg/ml红霉素（或3μg/ml利福平）与_______________两种抗生素,此种培养基称为_____________。             

葡萄种植基地为解决葡萄滞销易腐烂问题，引进果酒、果醋生产线进行葡萄的深加工，获得了较好效益，其菌种筛选和生产流程如图所示。其中在纯化菌种A时，共接种了甲、乙、丙、丁、戊五个平板，每个平板接种量均为O.lmL。纯化菌种B釆用的是划线接种。请回答下列问题：

（1）候选菌种A和B在细胞结构上的最大差别是菌种A有           。图中筛选菌种所用的培养基在灭菌时温度为           。

（2）纯化菌种A时，乙平板的菌落分布如上图所示，则纯化菌种A的接种方法为           ，接种乙平板时的操作失误是           。

（3）纯化菌种A的过程中，除乙平板外，其余的甲、丙、丁、戊平板的菌落数分别是180、 200、420、190，则样品中菌种A的密度为       个/mL，此方法计数的结果常常低于实际值，原因是                。

（4）果醋发酵与果酒发酵相比，提供的不同条件有                      。

如下图为微生物的实验培养和纯化醋酸菌的部分操作步骤。请回答下列问题：

（1）微生物生长繁殖所需的主要营养物质有无机盐、水、________四类。①是制备培养基时________中的主要操作，该操作需使锥形瓶的瓶口通过火焰，目的是通过灼烧灭菌防止瓶口的微生物污染培养基，实验操作中的灭菌方法还有_________。

（2）该纯化醋酸菌的接种方法是______________；完成步骤④的操作，接种共需要________次灼烧处理。如果需要统计醋酸菌液中活菌的数目可以采用______________法进行接种；培养过程中，常选择菌落数在__________的平板统计计数。

（3）食草动物能够消化食物的关键是体内存在能合成__________酶的微生物能够降解纤维素，该酶是一种复合酶，它至少包括__________________。为检测纤维素分解菌的存在与否，还应加入__________染料，形成________色复合物，若产生__________，则证明有纤维素分解菌存在。

③统计原生质体数量，结果如下。

分析回答：

（1）步骤②中，加酶液的目的是_______________________，洗涤时选用渗透压稳定剂的理由是______________________________________。

（2）结果表明，制备红豆杉内生真菌原生质体的适宜条件是__________、________、_______。

（3）检验原生质体再生能力，需要配制再生固体培养基，培养基灭菌常采用___________ 法，灭菌后需要冷却到_______℃左右才能用来倒平板。

（4）实验中将收集到的原生质体浓度为30×10⁶个/mL培养液先稀释10⁴倍，再各取0.1mL稀释液分别均匀涂布在3个再生固体培养基上培养。一段时间后，统计得到的菌落数分别为：27、21、24。则原生质体再生率（能再生的原生质体数占全体部原生质体的比例）约为________________。

　：

(1)本研究构建重组质粒时可选用四种限制酶，其识别序列如图所示。为防止酶切片段的自身连接，可选用的限制酶组合是________或________。

A．①②　　B．①③　　C．②④　　D．③④

(2)设置菌株Ⅰ为对照，是为了验证__________________不携带纤维素酶基因。

(3)纤维素酶基因的表达包括________和________过程。与菌株Ⅱ相比，在菌株Ⅲ、Ⅳ中参与纤维素酶合成和分泌的细胞器还有________________。

(4)在以纤维素为唯一碳源的培养基上分别培养菌株Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，菌株________不能存活，原因是____________________________________________________。

(5)在利用纤维素生产酒精时，菌株Ⅳ更具优势，因为导入的重组质粒含有__________，使分泌的纤维素酶固定于细胞壁，减少因培养液更新而造成的酶的流失，提高酶的利用率。

果蝇肠道中有包括醋酸杆菌在内的多种微生物，对其进行了分离、研究。

（1）分离醋酸杆菌：培养基中加入一定浓度甘露醇既可为醋酸杆菌提供________，又能抑制其它肠道微生物的生长，因此可作为___________培养基用于分离醋酸杆菌。实验中剥取果蝇肠道并用__________（蒸馏水/无菌水/生理盐水）冲洗，将所得液体涂布于已制备的培养基中，分离得到醋酸杆菌。

（2）为研究醋酸杆菌对果蝇生长发育的影响，研究者分别使用含肠道微生物（A组）、无菌（B组）、醋酸杆菌（C组）的培养基喂养无菌果蝇，测定蛹形成的平均时间，结果如图。

据图可知，醋酸杆菌对果蝇蛹形成具有_________作用，酵母粉含量为_________时作用最显著。若研究者利用此实验证实醋酸杆菌在肠道微生物中起主要作用，则需补充D组的实验处理为_____________。

（3）从细胞结构来看，醋酸杆菌属于_________生物，可在细胞的_________中将醇类、糖类分解为乙酸。醋酸杆菌可降解纤维素，有助于果蝇消化吸收营养物质，果蝇采食时携带醋酸杆菌，利于其传播，二者形成了__________关系。

（4）研究表明果蝇大脑分泌的一种蛋白类激素——促胸腺激素（PTTH）在果蝇生长发育过程中可促进蛹形成，预测醋酸杆菌可___________（提前/延迟/不影响）果蝇PTTH峰值出现的时间。

（5）综上所述，醋酸杆菌影响果蝇生长发育的原因是：___________________________________

实验人员从环境中分离获得白腐菌，以白腐菌的菌丝或孢子制得固定化白腐菌凝胶颗粒，各取25个两种凝胶颗粒分别处理50 mL染料废水，实验结果如下图1。进一步研究不同数量的凝胶颗粒处理50 mL染料废水结果如图2。据图分析回答：

                    图1                                        图2

(1)从野外采集白腐菌前，先向待采集土壤喷洒适量的染料废水的目的是________。某同学在进行白腐菌分离纯化实验时，划线某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成第一条划线无菌落可能的操作失误是________。将收集到的菌丝或者孢子加入到适量的海藻酸钠溶液中混匀，抽取5 mL混合液，滴加到CaCl₂溶液中，该过程中CaCl₂溶液的作用是______。

(2)现要处理100 L皮革生产过程中产生的染料废水。从实验结果分析，应选用________凝胶颗粒，添加________个凝胶颗粒后，保持________天以上，以达到最好的净化效果。

(3)与向染料废水中直接接种白腐菌相比，在工业生产中使用固定化白腐菌凝胶颗粒的优点主要是_____________________________________________。

回答下题：

（一）酵母膏胨葡萄糖（YPD）培养基是一种常用的酵母菌培养基，其基本配方是：1%酵母膏，2%蛋白胨，2%葡萄糖。某兴趣小组欲用超市购买的干酵母进行系列生物技术实践尝试，请回答下列问题：

（1）干酵母处于休眠状态，为迅速活化酵母菌，应将干酵母放在小烧杯中，加入少量温水和极少量  ______  ，混匀。

（2）为防止YPD培养基中的葡萄糖分解碳化，要选用以下选项中的 ______ 灭菌条件。

A．121℃、lkg/cm²压力、15min         B．121℃、500g/cm²压力、15min

C．90℃、500g/cm²压力、30min         D．90℃、500g/cm²压力、15min

有些培养基成分中含不能加热灭菌的化合物，如尿素等，应该用  ______  除菌。

（3）若要对酵母菌进行划线分离培养，则应在培养基中添加  ______  ，并用  ______  蘸取菌液，进行划线。

（二）下图为转基因奶牛的克隆过程，据图回答问题。

（4）动物细胞培养基的营养成分中，应该添加  ______ 等一些天然成分。不管是原代培养还是传代培养过程中一般都需要用  ______酶处理使细胞分散。

（5）③操作过程称为  ______  技术，图中早期胚胎的外表一层扁平细胞B称为  ______  。

（6）在④操作前应对受体母牛进行 _______  处理。