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            • 1．

              酵母菌是中学生物实验的常用材料，也是很多发酵食品制作必需的菌种。请回答下列问题：

              （1）酵母菌便于用来研究细胞呼吸的不同方式，原因是            。

              （2）如果需要从含有酵母菌、醋酸菌、青霉菌、毛霉等的土壤中分离到较纯的酵母菌，步骤如下：在采集到的土壤中加入           ，搅拌、过滤得到土壤浸出液，取少许土壤浸出液涂布到培养基表面，置于            条件下进行选择培养。

              （3）实验室中制作固定化酵母细胞，配制海藻酸钠溶液时，为了防止海藻酸钠焦糊，最好采用            加热。如果海藻酸钠溶液浓度过低，则制得的凝胶珠颜色偏           ，固定的酵母菌数目偏            。

              （4）实验室中用血细胞计数板对培养液中酵母菌进行计数时，为了减少实验误差，采取的措施有            （答两点）。

              难度：中等
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            • 2． 在农业生产研究上，常常需要进行微生物的培养和计数．
              （1）如图是利用 法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步 分散到培养基的表面．
              （2）分析下面培养基的配方：NaNO3、KH2PO4、NaH2PO4、MgSO4•7H2O、KCl、H2O．若此培养基用于培养分解尿素的细菌，则应除去上述 成分，并加入 ，以补充 源．
              （3）三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量．在对应稀释倍数为106培养基中，得到以下统计结果：甲同学涂布了两个平板，统计的菌落数是236和260，平均值248；乙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是210、240和250，取平均值233丙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163；在三位同学统计中，只有一位同学的统计是正确的，指出另两位同学的统计为什么不正确 ．
              （4）若在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为233，那么每毫升样中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.2mL） 
              难度：中等
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            • 3． 酵母菌是日常生产和生活中应用极其广泛的一种微生物．下图是有关酵母菌的实验操作．请据图回答：

              （1）实验中试管用滤膜封口，其目的是  ， A．C过程所采用的接种方法分别是、 ．
              （2）E过程利用血球计数板制片时，操作步骤是  ， 多余的培养液用滤纸吸去．
              （3）G过程利用酵母菌进行果酒制作，为适当提高果酒的生产速率，进气口应 ，制作好的果酒，还可继续生产果醋，用果酒制作果醋的原理是 （写化学反应式）．
              （4）H过程进行酵母细胞固定化的方法是 ，在用注射器将海藻酸钠和酵母细胞的混合液滴加到X溶液中时，应注意控制好
              难度：中等
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            • 4． 自养需氧型的硝化细菌能够降低水体中的铵盐，对水体有一定的净化作用．请回答：
              （1）培养硝化细菌时，将含有固体培养基的培养皿倒置的目的是 ．培养基中加入铵盐为硝化细菌的生长提供 ，培养基中没有加入有机碳，从功能上看这种培养基属于培养基．
              （2）硝化细菌纯化并计数时，对照组应该涂布等量的 ．若实验组每个平板中的菌落数都超过了300，应对样本菌液进行 处理．
              （3）实验：探究弱酸弱碱条件下硝化细菌对铵盐转化能力的大小．取含铵盐的液体培养基均分成 等分，其PH值可依次调节为 ，培养相同的时间后，可通过测定培养基中的 来判断硝化细菌分解能力的大小．
              难度：中等
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            • 5． 纤维素酶的成本能否下降，是能否实现乙醇工业化生产的关键因素．纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取．某同学设计了如下分离土壤中纤维素分解菌的实验流程：土壤取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养．
              ①培养纤维素酶分解菌的土样最好选择在 环境采集．
              ②以下是一种培养基配方：纤维素5g、NaNO31g、Na2HPO4•7H2O1.2g、KH2PO40.9g、MgSO4•7H2O0.5g、KCl 0.5g、酵母膏0.5g、水解酪素0.5g（蒸馏水定容到1000mL）．
              该培养基能够增加样品中纤维素分解菌的浓度，其原理是培养基中 是主要碳源，有利于纤维素分解菌生长，同时抑制其他微生物生长．
              ③为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基上加入刚果红染液，将筛选获得的菌液稀释后用 方法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生透明圈的菌落作为菌种进行扩大培养．
              难度：中等
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            • 6． 茶饮料主打“健康牌”，极少添加人工合成的色素、香精等添加剂，更多利用从植物中提取的天然成分．请回答：
              （1）红茶菌液是一种传统的活菌饮料，由酵母菌、醋酸菌和乳酸菌共同发酵产生．纯化菌种时，在固体培养基上常用 法接种菌种．在接种活菌前，将红茶糖液煮沸后冷却，煮沸的目的是 
              （2）茶饮料所用的胡萝卜素，通常采用 法从胡萝卜中提取；提取后常用 法对提取物中的胡萝卜素进行鉴定．
              （3）茶饮料所用的植物芳香油的提取流程如下：茉莉花+水→过程A→油水混合物→油层分离与粗提取→加无水硫酸钠→过滤→茉莉油过程A表示 ，向粗提精油中加入无水硫酸钠的目的是 
              （4）从茶叶中分离提取某种氧化酶，常采用 法，其原理是蛋白质分子的大小、形状和所带 的不同，会产生不同的迁移速度．
              难度：中等
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            • 7． 某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下．将各种物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL，再经高温灭菌，制成固体培养基备用．
              KH2PO4Na2HPO4MgSO4•7H2O蛋白胨葡萄糖尿素琼脂
              1.4 g2.1g0.2g1.0g10.0g1.0g15.0g
              （1）根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌？ （填“能”或“不能”），原因是 ．
              （2）培养基用 方法灭菌，培养皿用 方法灭菌，待培养基冷却到 ℃（填“20”、“30”、“40”或“50”）左右时，在 附近倒平板，等平板冷却凝固后，将平板倒过来放置，可以防止 ，以免造成污染．
              （3）要统计每克土壤样品中活菌数目，宜采用 法接种，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的 就能大约推测出样品中活菌数．
              （4）培养分解尿素的细菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染．对于固体培养基应采用的检测方法是 
              （5）实验中使用过的培养基及其培养物必须经过 处理后才能丢弃，以防止微生物的扩散．
              难度：中等
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            • 8． 井冈霉素是我国目前防治水稻纹枯病的主导农药，由于多年的单一使用，部分地区纹枯病菌对其产生了不同程度的抗药性，迫切需要研发有类似效果的新型替代生物农药．从细菌M18中提取的申嗪霉素能有效抑制水稻纹枯菌，与其它农药相比对人体和动物安全性高．为了开发更稳定、高产的新型菌株，科研人员进行了以下研究．请回答下列问题：
              （1）筛选菌株选择 （健康/患纹枯病）的水稻植株的根切成小段放入液体培养基中培养24h后，取适量培养液涂布于琼脂平板上，培养5天后，挑选形态不同的  ， 对其进行编号．然后挑取少许菌株分别接种于长满水稻纹枯菌的琼脂平板上，培养3天后，观察纹枯菌的生长，根据 选出编号为P12的理想菌株．
              （2）鉴定菌株P12所属的细菌类型提取P12基因组DNA，扩增其16S rDNA（能体现不同菌属之间的差异），扩增过程需要的酶有 ，还需要特定的  ． 对其测序后确定该菌株所属细菌类型．
              （3）检测P12的细胞毒性
              用人肺癌细胞系A549作为指示株系，在37℃恒温培养箱中培养．通入的空气应含 ，培养液中含少量胎牛血清，目的是 ．2h后分别将相同浓度的P12、M18和DH5α（人体肠道内共生的大肠杆菌）菌液5μL加入A549细胞培养液中，4h后测定吸光值，以表示乳酸脱氢酶（LDH）的释放量．LDH是活细胞内含有的酶，当细胞受到细菌攻击时，细胞膜的 改变，LDH释放至细胞外．测定结果显示，P12对A549细胞的毒性 
              （4）部分地区的纹枯菌对井冈霉素产生抗药性的原因，是由于 对细菌进行长期的选择，使细菌的 发生了改变的结果．
              难度：中等
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            • 9． MRSA菌是一种引起皮肤感染的“超级细菌”，对青霉素等多种抗生素有抗性．为研究人母乳中新发现的蛋白质H与青霉素组合使用对MRSA菌生长的影响，某兴趣小组的实验设计及结果如表．
              组别培养基中的添加物MRSA菌
              1100µg/mL蛋白质H生长正常
              22µg/mL青霉素生长正常
              32 µ g/mL青霉素+100lµ g/mL蛋白质H死亡
              请回答下列问题：
              （1）青霉素的用量是该实验的 变量．应保持 ，目的是 
              （2）第2组和第3组对比表明MRSA菌对有抗性， 能杀死MRSA菌．
              （3）蛋自质H不是新型抗生素，理由是 ．
              （4）测定培养液中MRSA菌的活菌数量，不宜在显微镜下用直接计数，适合选用 法进行计数，原因是直接计数获得的结果包含活的MRSA菌和死的RSA菌的总数，而用涂布法进行计数，计数的是菌落数，一个菌落一般来源于稀释液中的一个活菌．
              难度：中等
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            • 10． 一研究小组测定了某河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作来调查其水质状况．回答下列问题：
              （1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量．在涂布接种前，随机取若干 后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目是
              （2）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌．操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线．这样做的目的是 
              （3）示意图A和B中， 表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果．

              （4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养．结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快．分析其原因是：振荡培养能提高培养液的 的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高 的利用率．
              难度：中等
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