I.[生物一选修1:生物技术实践]

酵母菌是生物科学研穷中一种重要的生物材料，请回答：

（1）酵母菌的新陈代谢类型是__________，其细胞内将葡萄糖分解为酒精的酶存在于__________。

（2）某同学尝试用新鲜葡萄制作葡萄酒、为验证发酵液中含有酒精，取2mL发酵液加入试管中，滴加O.5mL浓硫酸酸化的重铬酸钾溶液并轻轻震荡，观察到溶液变__________色，则证明发酵液中含酒精。

（3）研究者利用基因工程技术改造酵母菌，得到如下四种变异菌株：①菌株Ⅰ——不能合成纤维素酶，菌株Ⅱ——合成的纤维素酶不能分泌到细胞外，菌株Ⅲ——合成的纤维素酶能分泌到细胞外，菌株Ⅳ——合成的纤维素酶分泌并固定于细胞壁。

在以纤维素为唯一碳源的培莽基上能生长繁殖形成菌落的是菌株_______，若在培养基中加入_______，则菌落周围会出现透明圈。在利用纤维素生产酒精时，与菌株Ⅲ相比，菌株Ⅳ的纤维素酶的利用率高，因为______________________________________________________________。

（4）为研究发酵罐中酿酒酵母菌的生长情况，常要取样统计分析，并测定pH值。若某研究人员将样品的次序搞乱了，那么判断取样顺序的主要依据基__________（填“酵母菌的数量”或“发酵液的pH”）。

II.[生物一选修3:现代生物科技专题]

内皮抑素是一种效果良好的新型抗癌药物，由胶原XⅤⅢ（广泛存在于肝脏等组织中）降解产生。我国科学家研制成含转入内皮抑素基因双歧杆菌的口服液，口服后，双歧杆菌在肠道定植、繁殖，双歧杆菌死亡裂解后，其产生的内皮抑素活性片段被吞噬、转运到肿瘤组织发挥作用。回答下列问题：

（1）要利用逆转录的方法合成人内皮抑素基因，应从__________组织细胞中提取mRNA，与细胞中内皮抑素基因相比，这种方法合成的cDNA没有__________、启动子、终止子等。

（2）根据内皮抑素基因的脱氧核苷酸序列设计并合成引物，利用__________技术得到大量内皮抑素基因。

（3）临床上也有通过静脉注射内皮抑素基因重组腺病毒，使肿瘤生长受到抑制。在进入临床使用前需要进行目的基因的检测与鉴定：用胰蛋白酶将血管内皮组织___________，制成细胞悬液→转入

含_____________________等天然成分的培养液中培养得到大量血管内皮细胞→用重组腺病毒感染血管内皮细胞，若抗原—抗体杂交检测呈阳性并观察到细胞凋亡，则说明_________________。

（4）口服含转入内皮抑素基因双歧杆菌口服液、静脉注射内皮抑素基因重组腺病毒，两种方法都能使肿瘤生长受到抑制，其中属于体内基因治疗的是__________（填“第一种”或“第二种”）。

表格是某公司研发的一种培养大肠杆菌的培养基配方，请结合所学知识，回答下列相关问题。

（1）根据用途划分，该培养基属于________培养基，若要分离能分解尿素的细菌，需对培养基作出的最关键的调整是_______________，若还需鉴定分解尿素的细菌，需作出的调整是____________。

（2）从培养基的成分上看，大肠杆菌的同化类型为__________。该培养基中能作为大肠杆菌碳源物质的有________________。

（3）在实验室培养微生物时，获得纯净培养物的关键是_______________，紫外线可对空气进行灭菌的原因是_____________。

请回答下列问题：

（1）果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌的代谢类型是________；多种微生物参与了豆腐的发酵，其中起主要作用的是________，泡菜的制作离不开________；

（2）醋酸菌发酵过程，当缺少糖源时，醋酸菌将________变成________，再将其变为________；

（3）在实验室培养微生物时，获得纯净培养物的关键是________；

（4）在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的________将尿素分解成了________，从而使培养基碱性增强。

（5）分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将________分解成________。在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时，CR可与纤维素形成________色复合物，用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌对，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的________，这种培养基属于________（填“选择”或“鉴别”）培养基。

____________来筛选纤维素分解菌。当利用涂布器涂布平板之后需要对涂布器______(填“消毒”或“灭菌”)处理。

为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：

(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是__________________________；

(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过________灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是________________________________________________________________________。

(3)示意图A和B中，________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。

(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。原因是：振荡培养能提高培养液中________的含量，同时使菌体与培养液充分接触，提高________的利用率。

生物技术在食品加工中的应用十分广泛，如果酒、果醋、腐乳、泡菜就是生活中常见的例子。下图是某同学设计的果酒制果醋的发酵装置，其中a、b、c为控制开关，d为过滤膜。请分析回答：

（1）果酒制果醋的反应式为_____________________。

（2）该发酵装置的一个缺点是_________________。图中C装置的作用是_________________。

（3）若要从生产的果醋中分离纯化出所用的微生物，则具体方法应是：

第一步：配置培养基。该培养基必须含有微生物生长所需要的基本营养成分。

第二步：灭菌。对培养基用_____________方法进行灭菌。

第三步：接种。在固体培养基上，微生物常用的接种方法有_________和_________。

第四步：培养。在适宜温度下培养时是否需要提供氧气？_____________。一般用______的方法进行培养，这样可以防止___________。

第五步：挑选符合要求的菌落。

（4）如果将该装置改为果酒的发酵装置，在利用酵母菌制作葡萄酒的自然发酵过程中，酵母菌的来源是___________。在制作果酒过程中，B装置内的pH变化趋势为_________。

（5）在工厂化生产果酒时，为更好地抑制其他微生物的生长，通常采取的措施是_________。

研究人员为获得用于烟气脱硫的脱硫细菌,进行了如下操作。请回答下列问题:

(1)取样与选择培养:在某热电厂烟囱周围区域采集土样,取样用的小铁铲和盛装土样的信封在使用前都需要________。选择培养的目的是增加________的浓度。 

(2)驯化脱硫细菌:将目的菌转移到含少量无菌水的锥形瓶中,边搅拌边持续通入SO₂气体,驯化几分钟后接种到固体培养基上,待长出菌落后再重复上述步骤,并逐步延长通SO₂的时间,与此同时逐步降低培养基的pH。由此分离得到的脱硫细菌具有____________________和____________________的能力。 

(3)培养、观察与应用:为获得大量的目的菌以用于生产,在培养过程中技术人员需连续取样进行计数,计数方法一般有稀释涂布平板法和____________法。当用前者进行计数时,培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的____________,统计平板上的菌落数即可推测出样品中含有的活菌数目。通常情况下,用此计数方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目__________。

(4)土壤中分解尿素的微生物的分离与计数中，接种时每个稀释度下至少接种______组用于统计菌落数，一般选择菌落数为________的平板用于计数。

(5)对分离分解尿素菌进一步鉴定需要在培养基中加入_________。

淀粉分解菌是能分解淀粉的一类微生物，在自然条件下，淀粉分解菌和其他各种细菌混杂生活在土壤中。某实验小组利用培养基将土壤中的淀粉分解菌筛选出来，回答下列问题：

（1）将土壤中的淀粉分解菌筛选出来的培养基应添加_____________作为唯一的碳源，此外还需要添加的成分有________________。微生物的接种的方法很多，最常用的是________________和________________。

（2）该实验小组将样液分别稀释了 10^１倍、 10² 倍、 10³ 倍、 10⁴ 倍，然后将 10² 倍、 10³ 倍、 10⁴ 倍的稀释液分别涂布在不同的平板上，若有三个平板均涂布了稀释倍数为 10³ 倍的稀释液 0.1 mL，分别形成了 68、 70 和 72个菌落，则原样液体中每升含有淀粉分解菌_____________个，该方法测量值一般比实际值___________，原因是________________________________  。

（3）胡萝卜素化学性质比较稳定，易溶于有机溶剂，可采用萃取法提取。萃取过程中采用___________加热，因为______________________________________________________；

萃取装置要在加热瓶口安装回流冷凝装置，其目的是___________________________________ 。

传统发酵技术和微生物分离、纯化过程中，无菌操作是微生物接种技术的关键。某实验小组欲从污水污染的污泥中筛选出脲酶细菌(脲酶可将尿素分解为氨）。回答下列问题：

（1）配制培养基时各种成分在溶化后分装前一般需要先_______；平板冷却凝固后一般要_______放置，这样操作的目的是____________________。

（2）在菌株筛选过程中，应将污泥样品稀释液接种于______________固体培养基上；并加入_________指示剂加以鉴别。平板划线法时在第二次及其后的划线操作时，总是从____________开始划线，原因是_______________________________ 

（3）如何设计实验判断培养基是否被污染？_________________________________________________________

（4）对于频繁使用的菌种，可以采用______的方法进行保藏，但该方法具有________________________缺点。