【生物——选修1：生物技术实践】

   日常生活中人们常将吃剩的食物盖上保鲜膜后放入冰箱储藏以防止污染。但事实上，有时候盖上保鲜膜储藏的食物中的细菌种类和数目反而比没用保鲜膜的多。某生物研究小组用保鲜膜保存三天的食物制成液体，研究其中细菌的种类和数量。

（1）微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是________。常用的对培养基进行灭菌的方法是________。对无菌操作间的灭菌方法一般是________。

（2）为了避免培养基污染，在培养过程中，需将平板________（填“正置”或“倒置”）。为了鉴定食物液体中微生物的种类并测定数量，应采用________法接种。用这种方法统计的菌种数往往比活菌的实际数目低，其原因是________。

（3）在培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，说明食物液体中有________（填“一种”或“多种”）细菌。菌落总数越多，说明食物被细菌污染的程度越________（填“高”或“低”）。

将没有吃完的西瓜盖上保鲜膜后放入冰箱，是很多人日常储藏西瓜的办法。但事实上，有时候盖上保鲜膜储藏的西瓜中的细菌种类和数目反而比没用保鲜膜的多。某生物研究小组用保鲜膜保存三天的西瓜表面的瓜瓤制备浸出液，研究细菌的种类和数量。请回答下列问题：

（1）该研究小组需配制用于培养微生物的培养基，配制的培养基一般都含有水、碳源、________和________。一般采用________法对培养基进行灭菌。

（2）为了避免培养基污染，在培养过程中，需将平板________（填“正置”或“倒置”）。为了观察浸出液中微生物的种类和数量，采用____法接种。接种时，为了避免环境中微生物的污染，实验操作应在________附近进行。

（3）在培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，说明西瓜的浸出液中有________（填“一种”或“多种”）细菌。细菌总数越多，说明西瓜被细菌污染的程度越________（填“高”或“低”）。

请回答下列与大肠杆菌有关的问题：

（1）从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于            ；它的同化作用类型是           。

（2）下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。

根据用途划分该培养基属于         培养基（选择、鉴别）。该培养基中的碳源是             ，氮源是               。

（3）培养大肠杆菌时，常用的接种方法是              和               。为防止杂菌污染需要对培养基和培养皿进行             。

（4）现有一升水样，用无菌吸管吸取1mL转至盛有9mL无菌水的试管中，依次稀释10³稀释度。各取0.1mL已稀释10³倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原水样中大肠杆菌数为           。

（5）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，这样做的目的是                                            。

（6）以下微生物发酵生产特定产物时，所利用主要微生物的细胞结构与大肠杆菌相同的是____________。

A．制作果酒        B．制作果醋    C．制作泡菜         D．制作腐乳

【生物——选修1生物技术实践】

由于酵母菌利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程菌菌种（过程如图甲所示）。

(1)图甲中，过程①需要的酶有_____________。为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以____________作为唯一碳源。②.③过程需要重复几次，目的是______________。

(2）某间学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是_____________________；推测该同学接种时可能的操作失误是______________。

(3）以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵，接种________菌的发酵罐需要先排气，其原因是__________________________。

（4）用凝胶色谱法分离α一淀粉酶时，在色谱柱中移动速度较慢的蛋白质，相对分子质量较________。

【生物—选修1：生物技术实验】

研究发现柚皮精油和乳酸菌素（小分子蛋白质）均有抑菌作用，两者的提取及应用如图所示。

（1）柚皮易焦糊，宜采用____________法提取柚皮精油，该过程得到的糊状液体可通过___________除去其中的固体杂质。

（2）筛选乳酸菌A时可选用平板划线法或____________接种。对新配制的培养基灭菌时所用的设备是_______________。实验前需对超净工作台进行____________处理。

（3）培养基中的尿素可为乳酸菌A生长提供______________。电泳法纯化乳酸菌素时，若分离带电荷相同的蛋白质，则其分子量越大，电泳速度___________。

（4）抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定透明圈的______________来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。

[生物—选修1：生物技术实践]

临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：

（1）为统计样品中活菌的数目，常将样品用        法接种于培养基表面。运用活菌计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是               。

（2）为了检验该致病菌对于抗生素的敏感性，在该病菌菌落均匀生长的平板的不同位置，分别放置含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片，培养一段时间后，在四个滤纸片周围出现透明圈由大到小依次是A＞C＞D＞B，由此推断，该病人目前适合使用的抗生素________。含C的滤纸片周围透明圈比含A的小，说明该病人                       ；若抗生素B的滤纸片周围没有出现透明圈，最可能的原因是            导致的结果；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现一个菌落，这种菌落的出现可能是由于接种过程不严格导致的，也可能是产生了抗生素D的耐药菌，这种变异的特点是_____           （至少列举两个）。

（3）实验中培养基需用        灭菌、接种环用灼烧灭菌、接种过程也在酒精灯火焰旁进行，其达到的目的是                                  。