[生物——生物技术实践]

幽门螺杆菌是栖息在胃粘膜的革兰氏阴性螺旋状杆菌，具有强的脲酶（能降解尿素）活性，其代谢类型属于异养厌氧型（氧气浓度在5％～8％左右适合，完全无氧或空气环境中无法生存），这种细菌是慢性胃炎、甚至胃癌发生的元凶。

（1）为了对胃炎患者的胃粘膜提取物稀释样液中幽门螺杆菌进行分离，应将样品稀释液接种于以________为唯一氮源的固体选择培养基上，接种后的培养皿在________条件下，倒置于37℃的恒温培养箱中培养。

（2）分离培养幽门螺杆菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，培养基常用的灭菌方法有________。

（3）欲检测上述培养基中是否具有幽门螺杆菌这类细菌的存在，向培养基中添加酚红指示剂，培养基中菌落周围显示红色环带，即表明这类细菌的存在，这种检测过程的机理是________。

（4）采用液体培养基培养幽门螺杆菌，为了测定菌液中的菌体数量，一般采用________法将一定量的菌液接种到固体培养基上，统计________的数量来代表菌体数，这种检测方法测得的结果一般偏________（填“大”或“小”），原因是________。

人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染。土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：

(1)分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有                   、                    (至少答2种)。

(2)用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培养基属于     培养基。若培养基中存在有分解尿素的细菌，其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的         使pH升高，使酚红指示剂产生颜色变化，从而证明这一菌株以尿素为氮源。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力              。

(3)与全营养培养基中的菌落相比，以尿素为氮源的培养基中菌落数           。

A．多        B．少      C．相等      D．几乎为零

(4)将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养。在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在              旁进行操作。接种后的培养皿            于37℃的                中培养。

某科研兴趣小组欲对土壤中分解尿素的细菌进行分离纯化和计数，请帮助完成实验。

（1）实验原理：分解尿素的细菌由于含有脲酶，可将                  而使周围环境的PH上升，在                的培养基中加入                 指示剂，对其进行分离、鉴别；通过平板上的菌落数可以推测样品中的活菌数。

（2）实验简要步骤：

①土壤取样并制备培养基：用                 法对培养基进行灭菌。

②分离纯化该细菌：用稀释涂布平板法进行接种，首先需对土壤滤液进行              ，再分别取土壤滤液0.1mL涂布在每一平板上。

③培养、观察与计数。

（3）有同学发现，稀释倍数为10⁴的5个平板上，长出的菌落数分别为9、147、150、153和360，则每升土壤样液中的细菌数量为               个。

（4）某些同学想将分离出的目的菌在-20℃长期保存，菌液中常需要加入一定量的____（填化学物质）。

[生物——选修1：生物技术实践]

已知硅酸盐细菌在甲（尿素为唯一氮源）、乙、丙培养基上均能生长。表1表示以尿素为唯一氮源的培养基的配方，表2是每种培养基上每个稀释度的菌落数及菌落直径。请回答下列问题：

表1

表2

（1）表1从物理性质看属于________培养基，按用途划分属于________培养基。

（2）为统计硅酸盐细菌的数目，应采用________法进行接种，该方法的所有操作都应在________环境中进行。表2中，稀释度为________时，统计的结果较为可靠。

（3）为检测培养基灭菌是否彻底，应进行的操作是________。由表2中的数据得出，用________培养基分离硅酸盐细菌的效果最好。

（4）甲培养基中加入________指示剂，可根据指示剂变红的情况初步鉴定菌种分解尿素的情况。