在盛产柿子的某地，生物小组开展柿子酒、柿子醋生产的相关活动。

（1）土壤中的酵母菌计数：

在秋季的柿子园中，落地的柿子流出果汁的周围土壤中有酵母菌大量生长繁殖。

①用灭过菌的小铁铲、信封取该处土样，并在________旁称取10g土样，加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。而后进行系列稀释操作：吸取锥形瓶中土壤液的上清液________mL，转移至盛有9mL无菌水的大试管中充分摇匀，依次等比稀释，获得稀释至10¹、10²、10³、10⁴倍的土壤液的稀释液。

②为测定土壤中酵母菌的数量，选用第①步中所获得的10²、10³、10⁴倍的土壤液的稀释液，并依次分别吸取0.1mL进行平板涂布操作。在适宜条件下培养，当菌落数目稳定时，对各稀释度涂布的三个平板进行菌落计数（如下表）。

则每克土壤样品中的酵母菌数量约为________个。要使该实验所得数据可靠，还应该实施的操作是________。

（2）柿子醋生产菌的制备：

   为去掉酵母菌，挑取变酸的柿子酒内的菌膜于________℃进行纯化培养，获得如图所示菌落分布。应从________（填“甲”“乙”或“丙”）区域中挑取部分菌落制玻片观察，选择所需菌种。

（3）柿子酒、柿子醋的制作（发酵装置如下图所示）：

①排气口弯管设置的目的是________。

②可通过装置中的________对发酵情况进行及时监测。此时，若采用血细胞计数板对发酵液的酵母菌观察计数，与（1）中计数方法相比，该计数方法测得的酵母菌数自较________。

③柿子醋可在柿子酒生产的基础上改变________进行生产。

[生物——选修1：生物技术实践]

请回答下列与果酒制作、微生物的培养有关的问题：

（1）葡萄酒是一种由纯果汁发酵制成的酒精饮料。在酒精发酵过程中所利用的微生物是________，检测发酵是否产生酒精的试剂是________。

（2）酒精发酵所需的微生物可以从葡萄酒中分离获得，方法是：

第一步：配制琼脂固体培养基。

第二步：对培养基进行________灭菌。

第三步：采用________法进行接种。

第四步：在20℃左右温度下培养，挑选符合要求的________。

一、[生物——选修1：生物技术实践]人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质——培养基，培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。

（1）培养微生物常用牛肉膏蛋白胨培养基，其中牛肉膏可以为微生物提供________（填“碳源”、“氮源”或“碳源和氮源”），培养基中常加入________作为凝固剂。

（2）培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加________，培养霉菌时需要将培养基的pH调至________（填“酸性”、“中性”或“碱性”）。如果要鉴定大肠杆菌，培养基中需要加入________，大肠杆菌的菌落呈现黑色；如果要纯化大肠杆菌，可采用平板划线法或________法进行接种。

（3）制作果酒时，在缺氧、呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到抑制。该过程中，缺氧、呈酸性的发酵液相当于一种________（功能）培养基，温度一般控制在________。

二、[生物——选修3：现代生物科技专题]

科学家利用基因工程技术创造出了“蜘蛛羊”、“抗虫棉”等转基因生物。请回答有关基因工程的问题：

（1）科学家要想成功获得上述生物，其实施基因工程的第一步是获取________，可采用________技术大量扩增上述物质。

（2）基因工程的核心步骤是________；其中启动子是________识别和结合的部位；终止子相当于一盏红色信号灯，使________（过程）在所需要的地方停止下来；标记基因的作用是________。

（3）检测目的基因是否翻译成蛋白质常用的方法是________法；在检测导入目的基因的棉花植株是否抗虫时，需要进行________水平的鉴定。

（1）由果酒制作转为果醋制作，需要改变的条件有哪些？                         。

（2）泡菜制作过程中，盐水要煮沸冷却待用，煮沸的目的是                          。

（3）纯化微生物常用的方法是                                   。

（4）按物理性质划分：没有加入凝固剂琼脂的是      培养基，一般用于微生物的工业生产:；只有在      培养基上才可观察到菌落。培养基中没有加碳源可选出     （自养或异养）微生物。

【生物—选修1：生物技术实践】

苹果醋是指以苹果汁经发酵而成的苹果原醋，再兑以苹果汁等原料而成的饮品。既有淡淡的醋味，又有果汁的香甜，喝起来非常爽口。苹果醋还能保健养生、改善疲劳、 美容养颜，是目前大众非常喜爱的饮品。下图是苹果醋的制作简图，据图回答：

（1）过程①中使用到的微生物是         。若要检测是否产生了苹果洒时可用      试剂进行检测。

（2）过程②和过程③中起作用的微生物都是       ，但过程②和过程③该微生物分解的碳源不同，过程②和过程③的碳源分别是             、       ，产生醋时该微生物可以从食醋中分离纯化获得，具体方法是：                   。

（3）第一步：配置培养基，该培养基必须含有微生物生长所需要的基本营养成分。

第二步：对培养基用     方法进行灭菌。

第三步：接种。微生物常用的接种方法有           、            。

第四步：培养。温度控制在30-35℃。培养时需要提供氧气。一般应釆用平板倒置培养，主要原因是              。

第五步：挑选符合要求的菌落

[生物---一选修1:生物技术实践]

在葡萄酒酿制过程中，有许多需要注意的环节，请回答下列有关问题：

(1)用于酿制葡萄酒的主要微生物是          ，酒精发酵一般将温度控制在            。

(2)工厂化生产果酒，为提高果酒的品质，需更大程度地抑制其他微生物的生长，采取的措施是对原料和设施进行          和               ,并接入合适的菌种。

(3)在制作葡萄酒的实验中，向发酵瓶中装人葡萄汁时，要留有大约           的空间。如果要继续制作葡萄醋，在发酵后期要向发酵液中通入           ，以保证发酵液处于          环境，并将发酵液置于           的温度环境中，一段时间后，发酵液中会出现醋酸菌。

【生物一选修1：生物技术实践】

   柿子经过发酵可制成柿子醋，以下是柿子醋制作的流程:柿果→挑选→清洗→去皮→去核→脱涩处理→切块→压榨→柿汁→灭菌→酒精发酵→醋酸发酵→灭菌→陈酿→淋醋→过滤→成品。请回答下列问题：

（1）脱涩过程可以用成熟的苹果、梨等水果释放的_____气体促进柿子成熟。

（2）将压榨后的柿汁加热到80℃保持10〜20分钟的目的是________。酒精发酵时可添加活性干酵母进行，发酵的原理是____     ____（写出反应式）。

（3）若醋酸发酵时需扩大培养醋酸菌种，实验室常用的接种方法是________________和_____________接种前应对培养皿、接种环和培养基进行灭菌，方法分别是______________。接种时应在火焰附近进行，同时设置空白培养基做对照，原因是_____                          。

【生物—选修1：生物技术实践】

回答下列与微生物发酵、培养以及应用相关的问题：

(1)苹果酒清香、明快，风味清爽，它是由果汁发酵产生的。果汁发酵后是否有酒精产生，可用 

              来检验。

(2)严格控制发酵条件是保证发酵正常进行的关键，这直接关系到是否能得到质量高、产量多的理想产物，通常所指的发酵条件不包括   。

 A.温度控制          B.溶氧控制        C．pH控制       D.酶的控制

(3)苹果酒在      的作用下，经过深层发酵可形成苹果醋；在此过程中要适时向发酵液中充气，原因是                  

(4)腐乳是用豆腐发酵制成，有多种微生物参与发酵，其中起主要作用的是           。在腐乳的制作过程中，从微生物培养的角度来看，豆腐应该属于           。

(5)在充足的碳源、氮源、无机盐和水的条件下，乳酸菌仍然不能正常生长，还需要在培养基中添加               。应用平板划线法分离乳酸菌时，从第二次划线操作起，每次总是要从上一次划线的末端开始划线，并划线数次，其原因是                                             。

下图是果酒果醋的制作流程 （如图所示）。请据图回答以下问题：

（1）在葡萄酒制作过程中出现葡萄酒变酸现象，其原因可能是发酵液中混有______菌发酵产生乳酸；也可能是             ，导致           菌生长繁殖，产生醋酸。

（2）某同学尝试用罐头瓶制作果酒，在培养过程中，每隔12 h左右将瓶盖拧松一次，此后再拧紧，这样做的主要目的，一是           ，二是避免氧气进入和杂菌污染。

（3）在酸性条件下，可用­­              来检测果酒发酵是否成功。若要进一步检测所得果酒中活体酵母菌的密度时，一般采用                 法，但此种方法最终计算得出的菌体数往往比实际数目低。

（4）在果酒制作中，加入的新鲜葡萄汁没有经过灭菌处理，但是在制出的果酒中基本检测不出酵母菌以外的杂菌，从生态学角度分析：一是酵母菌与杂菌之间存在      关系；二是由于果酒中的         不利于杂菌的生长。

（5）发酵阶段需要的菌种是酵母菌，在产生乙醇时要控制的必要条件是：          。