（5）我国西北一些地区年降雨量较少，适宜种植灌木和草，却被硬性规定种植属于乔木的杨树，致使许多地方的杨树长成半死不活状，结果防护林成为残败的“灰色长城”．其失败的原因主要是违背了 ______ 原理．

含有限制酶的细胞中通常还具有相应的甲基化酶，这两种酶对DNA分子有相同的作用序列，但具有不同的催化功能。甲基化酶可以对DNA序列进行修饰，使限制酶不能对这一序列进行识别和切割。回答下列问题

（1）目前，基因工程中使用的限制酶主要是从                生物中分离纯化获得的。构建“基因组文库”和“cDNA文库”的过程中需要使用DNA连接酶的是                （填“基因组文库”,“cDNA文库”或“基因组文库”和“cDNA文库”）

（2）含有某种限制酶的细胞，可以利用限制酶切割外源DNA，但不破坏细胞自身的DNA,其原因可能有①                ；②                。

（3）利用PCR扩增目的的基因的过程由高温变性（90~95°C）,低温复性（55~60°C），适温延伸（70~75°C）三个步骤构成一个循环，为使得DNA聚合酶能够重复利用，选用的酶应在                °C处理后仍然具备催化活性。

（4）在PCR扩增目的基因时，为实现序列中的腺嘌呤被放射性同位素标记，反应体系中添加的原料应包括碱基已被标记的                （填“腺嘌呤核糖核苷酸”，“dATP”或“ATP”）.

自然条件下，哺乳动物不发生孤雌生殖。2014年3月，云南农大科研团队把猪卵母细胞进行人为的孤雌激活处理，使其发育成胚胎，移植到代孕母猪体内，获得世界上第一批成活的孤雌生殖克隆猪。这种克隆猪不同于核移植获得的克隆猪。现将两种技术进行比较。

（1）图中过程_____________(填序号)是获得核移植克隆猪的技术流程。   

（2）孤雌激活处理其实质是要激活卵母细胞的_______________，使其发育成早期胚胎，得到克隆猪。

（3）体细胞核移植技术中也会用到卵母细胞，需要选择_________时期的卵母细胞，并用微型吸管吸出_________。欲得到更多的卵母细胞，需用__________处理良种母猪。

（4）早期胚胎移植时，必需移植到同种____________的其他雌性动物子宫中，才可能移植成功。

（5）可以从良种不同的克隆猪中提取mRNA直接进行研究，也可通过_______方法得到多种cDNA，并通过_____技术扩增产物

关于PCR的说法不正确的是（ ）

用已学基因工程相关知识，解决以下问题：

A：下图表示利用基因工程培育抗虫棉的过程，请据图回答下列问题。

(1)  若限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—↓GATC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是

—G↓GATCC—，那么在①过程中，应用限制酶_______________切割质粒，用限制酶_______________ 切割抗虫基因。①过程在___________(填“体内”或“体外”)进行。

B：多聚半乳糖醛酸酶(PG)能降解果胶使细胞壁破损。成熟的番茄果实中，PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程减少PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入番茄细胞中，得到转基因番茄，具体操作流程如下图。据图回答下列问题：

(1)若已获取PG的mRNA，可通过____________方法获取PG基因。PCR技术扩增目的基因的前提是_______________，以便根据这一序列合成引物。

(2)该质粒含14000碱基对（14kb），若同时使用BamHⅠ和Smal两种限制酶切割，产生的片段有5kb、7．5kb、1．5kb,则只用限制酶BamHⅠ切割时产生的片段长度分别是_____和______。

抗体的制备经历了细胞学层面和分子学层面两个合成途径的研究。如图是利用生物学技术制备抗体的两条途径的模式简图。下列说法错误的是（ ）

科学家通过转基因山羊已经生产出重组的人类丁酰胆碱酯酶（BCE），该酶可以用于对抗生化武器。下图是转基因山羊的培育过程示意图，请据图回答问题：

（1）采用PCR技术扩增BCE基因的过程中需要加入的物质除目的基因和原料外，还需加入的物质是_______、__________。

（2）步骤②中将该重组DNA分子导入受精卵常用的方法是__________________法。

（3）为了获得更多的卵母细胞，往往需要向雌性山羊体内注入______激素。受精过程中防止多精入卵的两道屏障是透明带反应和__________。

（4）早期胚胎需要发育到__________（时期）才能进行步骤⑦。要同时获得多只与此转基因山羊遗传物质相同的小羊，可对囊胚进行_____操作。

下列有关PCR过程的叙述中不正确的是( )