定点突变技术是指通过聚合酶链式反应（PCR）向目的基因片段中引入所需变化。GFP（绿色荧光蛋白）的发光基团是第65至67位的三个氨基酸（丝氨酸﹣酪氨酸﹣甘氨酸），该发光基团可利用定点突变技术使第66位酪氨酸换成组氨酸，即可发出更明亮的蓝光，成为蓝色荧光蛋白。

⑴定点突变第一步得把突变位点设计在引物上，据图中信息人工合成短DNA 引物应包含的序列是___________，突变位点一般设计在引物中间位置的理由是___________，该定点突变技术是否成功的标志是___________，该技术属于___________工程的范畴。

⑵如下图所示，如果要用PCR 扩增以下DNA 模板中的基因1（左），一位同学设计了一对引物如下（右），该设计不合理的理由是___________。

5′－－－－－－基因1－－－－－－3′ 引物1 5′－－AGATCT －－－3′

3′－－－－－－基因1－－－－－－5′ 引物2 5′－－TCTAGA －－－3′

⑶下图表示引物修正后PCR 扩增目的基因（基因1）的第___________轮循环的示意图。若再进行一轮循环，仅有基因1（含引物）的DNA 片段有___________个。

请回答下列与PCR有关的问题。

（1）PCR的原理是______________。当温度上升到90℃以上时，DNA双链打开，这一步是破坏DNA分子中的________键，此步骤称为________。

（2）PCR中加入的引物是一小段____________。当温度下降到50℃时，引物会与模板链的___________（5′或3′）端结合，此步骤称为___________。

（3）当目的基因在一条DNA的中间时，至少需要扩增________个循环，才会出现目的基因产物。当扩增4个循环时，有目的基因产物_________个。

2015年，屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法获奖。工业上青蒿素一般从青蒿植株中提取，产量低，价格高。基因工程及细胞工程等为培育出高青蒿素含量的青蒿提供了思路。科学家先通过紫外线处理大量青蒿幼苗后，偶然发现一株高产植株。通过基因测序发现该高产植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变。

（1）提取了高产植株的全部DNA后，要想快速大量获得该突变基因可以采用PCR技术，该技术的原理是______________________。

（2）如果用青蒿某个时期mRNA反转录产生的双链cDNA片段，用该双链cDNA进行PCR扩增，进行了30个循环后，理论上可以产生约为__________个DNA分子，该双链与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做青蒿的________，获得的cDNA与青蒿细胞中该基因碱基序列___________（填“相同”或“不同”）。

（3）将获得的突变基因导入普通青蒿之前，先构建_______________,构建好的重组质粒在其目的基因前端要加上特殊的启动子，启动子是___________识别结合的位点。

（4）检测目的基因是否表达出相应蛋白质，应采取_______________技术。目的基因导入组织细胞后，通过________技术培育出青蒿幼苗。

2013年，全球首批全基因组测序的PGD/PGS试管婴儿在长沙诞生。新技术的突破意味着通过设计试管婴儿解决部分不孕不育问题的同时，部分肿瘤疾病、遗传性疾病的家族性遗传也将有望避免。

(1)设计试管婴儿时为了提高受孕率，胚胎移植时多采用多胚胎移植，因此需要用________处理，促进母亲排出更多的卵子。胚胎发育的卵裂期在________(填“透明带”或“放射冠”)内进行。受精卵经72小时体外培养发育成有32个细胞左右的胚胎，叫________，可用于胚胎移植。

(2)目前SRY－PCR法是对胚胎的性别进行鉴定最有效最准确的方法。操作的基本程序是：从被测的囊胚中取出几个________(填“部位”)细胞，提取DNA；然后用位于Y染色体上的性别决定基因(即SRY基因)的一段碱基作________，以________为模板进行PCR扩增。PCR技术能把某一DNA分子片断进行扩增。每次循环需要经过____                     三步

【生物选修3：现代生物科技专题】（15分）油菜中油酸为不饱和脂肪酸，能降低人体血液的胆固醇含量，减少人体患心血管病的风险。F基因控制合成的油酸酯氢酶催化油酸形成饱和脂肪酸，转反义F基因油菜能提高菜籽油的油酸含量。请分析回答下列问题：

（1）从油菜细胞的染色体DNA获取F基因后进行大量扩增的方法为_____________。利用该方法扩增目的基因的前提是_____________________________。

（2）构建反义F基因表达载体时,需要用到的工具酶有___________；农杆菌可用来将反义F基因表达载体导入油菜细胞，从分子角度分析，其具有的特点是__________。构建反义F基因表达载体时没有设计标记基因，其可能的原因是___________________________。

（3）Le启动子为种子特异性启动子，将F基因反向连接在Le启动子之后构建了反义F基因。检测转反义F基因油菜细胞内F基因转录的mRNA含量，结果表明，因杂交形成双链RNA,细胞内F基因的mRNA水平下降。由此推测，反义F基因的转录抑制了F基因的___________(填“复制”“转录”或“翻译”)过程。若F基因转录时，两条单链(a1、a2)中a1为转录的模板链,则反义F基因转录时的模板链为_________________。

为了使番茄的耐寒能力大大提高，科学家将鱼的抗冻蛋白基因转入番茄。回答下列相关问题：

（1）在该过程中，研究人员首先获取目的基因，并采用PCR技术対目的基因进行扩增，该技术需要的条件是：          、模板、原料和引物。引物必须能和模板DNA的______（填“3’末端”或“5’末端”）结合。

（2）若要使目的基因在受体细胞中表达,需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是__________________________(答出两点即可).为了确保在番茄中获得抗冻蛋白，必须在抗冻蛋白基因的首端添加特定的          。基因工程核心步骤是                     。

（3）研究人员通常采用          法将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄细胞内，通常采用          技术，在分子水平检测目的基因是否翻译成了相应的蛋白质。若培养的转基因番茄抗冻能力没有明显的提高，则理论上应该调整基因结构的______部分的碱基序列。