美国新希望生殖医学中心张进团队于2016年10月19日在美国生殖医学学会会议上正式宣布，世界首个细胞核移植“三父母”男婴已于2016年4月诞生。如图是该男婴的培育过程示意图，请据图回答下列问题：

(1)上述“三亲婴儿”的核DNA由_________提供，质DNA由_________提供。由此可见，“三亲婴儿”的意义在于可以避免子代_________遗传病的发生。

(2)过程③在体外进行时需要对精子进行________处理，卵母细胞应处于_________期。

(3)过程④是早期胚胎培养，需将受精卵移入_________继续培养。体外培养需要满足的条件有：_________、营养、适宜的温度和pH，并置于_________混合气体的培养箱中进行培养。

(4)过程⑤是_________技术，取_________的滋养层细胞可以对移植前的胚胎进行性别鉴定，采用SRY-PCR的鉴定方法，在该PCR扩增过程中若消耗引物分子14个，则DNA扩增了_________次。

（1）进行DNA亲子鉴定时，首先需要用__________________将待测的样品DNA切成片段，然后用电泳的方法将这些片段分开，最后形成DNA指纹帮助确认身份。

（2）PCR技术的原理是______________，甲过程所需要的条件是______________，完成乙、丙过程需要反应体系提供___________、___________、___________等物质。

（3）利用PCR技术扩增目的基因，要有一段____________________，以便合成a、b。下图为第一轮循环产生的产物。若继续循环，该DNA片段共经过________次循环后刚好能形成所需目的基因。

融合PCR技术是采用具有互补末端的引物，将不同来源的扩增片段连接起来的方法，其过程如下图1所示。下图2是中间载体1和中间载体2（利用融合PCR技术构建成）构建成叶绿体定点整合表达载体示意图（限制酶酶切位点标注于载体外侧），叶绿体定点整合表达载体通过与叶绿体基因的同源重组，将目的基因整合于叶绿体DNA上的特定位点上。请据图回答下列问题。

（1）图1第一阶段中PCR至少进行____________次循环，才能获得双链等长的含引物2的DNA，第二阶段中引物2与引物3部分碱基的____________关系使得两DNA能成功“搭桥”连接起来。
（2）若通过融合PCR技术将启动子、标记基因、目的基因、终止子拼接起来，需要设计__________种引物，其中能够起着“搭桥”作用的引物有__________种。
（3）图2中需使用__________（填限制酶）和DNA连接酶将两中间载体构建成定点整合表达载体，途中定点整合表达载体上未标出的结构是__________。

（4）叶绿体定点整合表达载体中_____________________________________________（填基因）能使目的基因准确插入叶绿体DNA上的特定位点上。与利用农杆菌转化法相比，利用定点整合表达载体将目的基因导入叶绿体中的优点是____________________________________。

下图1为某种常用质粒的序列图，Lac Z基因编码的酶能使无色的X—gal变为蓝色，Amp^r为氨苄青霉素抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列。请回答下列问题：

⑴若要筛选成功导入目的基因的重组质粒，培养基中应加入的物质有________和________。基因表达载体的组成除了目的基因外，还必须有_______、终止子和标记基因等。对获取的目的基因可用________技术对其扩增。

⑵实验小组用BamHⅠ和BlgⅡ两种限制酶切割目的基因和质粒，构建重组质粒后导入大肠杆菌中，在筛选重组质粒的培养基上，若大肠杆菌菌落显蓝色，说明导入了________；若大肠杆菌菌落显白色，说明导入了________。没有导入任何外源DNA的大肠杆菌________（填“能”或“不能”）在该培养基上生存。

⑶将若干个质粒和目的基因用BamHⅠ和BlgⅡ两种限制酶切割后，用DNA连接酶相连，若仅考虑质粒与目的基因相连接，会有   种连接方式。然后再用BamHⅠ和EcoRⅠ切割成功连接后的产物，获得了长度为0.8kb、3.8kb、1.1kb和3.5kb四种长度的DNA片段，则目的基因的长度为________kb（已知目的基因的长度大于2kb，1kb＝1000个碱基对）。

金属硫蛋白(MT)是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：

（1）设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物(引物1和引物2)，为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的______________位点。设计引物时需要避免引物之间形成______________，而造成引物自连。

（2）图中步骤1代表______________，步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。

（3）PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏引物与模板之间的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但____________的引物需要设定更高的退火温度。

（4）如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有_____(填序号：①升高退火温度 ②降低退火温度 ③重新设计引物)。

干旱会影响农作物产量，科学家们对此进行了研究。如图为用探针检验某一抗旱植物基因型的原理，相关基因用R和r表示。

（1）基因R与r的本质区别是______________________________的不同。在利用PCR技术扩增R或r基因过程中，利用_____________可寻找抗旱基因的位置并进行扩增。

（2）若被检植株发生A现象，不发生B、C现象，则被检植物的基因型为__________________。

（3）用从基因文库中获取目的基因的方法获取抗旱基因时需要用到限制酶，限制酶的具体作用部位是________________________。 

（4）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法，其依据主要是：当植物受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，这时农杆菌中的__________________________________________________________________________________________。

（5）经检测，抗旱基因已经导入烟草细胞，但未检测出抗旱基因转录出的mRNA，从构建基因表达载体的角度推测，最可能的原因是________________。

将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。

请根据以上图表回答下列问题。

（1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是_____________________。

（2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？__________。                            。

（3）为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为__________。

（4）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，。假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。

①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到_________种DNA片断。 

②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到_________种DNA片断。 

（1）FPP是合成青蒿素必需的前体物质，在青蒿细胞和酵母细胞中都存在，ADS酶和CYP71AV1酶只存在于青蒿细胞中。生物合成青蒿素的过程如下图：科研发现酵母的生长代谢速率较青蒿要高得多，若利用转基因技术培育能产生青蒿素的酵母细胞，理论上还需要向酵母细胞中导入___________等基因，获得以上基因的方法有：从____________中获取，利用___________扩增。要实现这一过程需要借助________________________(工具酶)来构建基因表达载体，所构建的基因表达载体中应该含有启动子，它是____________识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA。

（2）某科研小组在野外偶尔发现一株青蒿植物的突变株，突变株产生青蒿素的量较普通的青蒿植物要多，因此可通过____________技术迅速获得大量的突变株，该技术依据的原理是____________________。培养流程如图：A过程是___________________________培养，其结果产生_______________，B过程是_______________培养。A、B过程都需要合理匹配___________两类植物激素的比例。试管苗的根细胞没有叶绿素，而叶的叶肉细胞具有叶绿素，这是_________________的结果。

下图表示某科学家利用胚胎干细胞对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗的相关过程，据图回答下列问题：

（1）步骤①②利用的技术名称分别是                 、                     。图中造血干细胞中的遗传物质至少有         个来源。

（2）若利用PCR技术扩增目的基因并完成图示小鼠的基因治疗，涉及的酶有限制性核酸内切酶、DNA连接酶、耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）和                    等。

（3）下图所示的一个质粒分子经EcoRⅠ切割前后，分别含有         、           个游离的磷酸基团。由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，故利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从下图A、B、C、D四种单链DNA片段中选取         作为引物。一个目的基因通过PCR技术扩增第n次时，需要         个引物。

（4）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发           色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否转录，可以采用                        的技术。

（1）利用 PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。

（2）设计引物是 PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（如下图），请分别说明理由。