金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理．PCR扩增过程示意图如图，请回答下列问题：

(1) 定点突变第一步得把突变位点设计在引物上,据图中信息人工合成短DNA引物应包含的序列是_______,突变位点一般设计在引物中间位置的理由是_________________,该定点突变技术是否成功的标志是________,该技术属于____工程的范畴。 

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基因工程在农业中的应用发展迅速，基因可导入农作物中，用于改良该农作物的性状。通过多重PCR技术可扩增并检测转基因农作物的外源基因成分。多重PCR是在一个PCR反应体系中加入多对引物，针对多个DNA模板或同一模板的不同区域，扩增多个目的基因的PCR技术。请回答：

(1)我国科学家将Bt毒蛋白基因、鱼的抗冻蛋白基因、控制果实成熟的基因导入农作物，可获得________、_________、延熟的转基因作物。

(2)引物是根据________的一段核苷酸序列合成的，每种基因扩增需要一对引物的原因是___________________________________________________________。下表是A、B、C三种基因的引物，据表分析，引物特异性主要体现在_____________________________________________。

(3)PCR过程中温度从90℃降到55～60℃的目的是________________________________。

1为已知A、B、C三种基因对照，2、3、4为待测农作物样品

(5)与PCR技术相比，多重PCR技术的优势是________________________________。

(1)①代表的是_________过程。为获得A基因表达载体，需用_________酶对A基因和载体进行切割。将A基因表达载体导入动物细胞常用的方法是______________。

(2)利用PCR技术扩增A基因时，设计引物序列的主要依据是_______________________，加入引物的作用是___________________________________________。

(3)与体内DNA复制相比较，PCR反应要在一定的缓冲溶液中才能进行，并且要严格控制_________等条件。

(4)过程⑦采用的技术是________，获得的X叫细胞。

人眼球玻璃体淀粉样变性是一种罕见的眼病，主要症状是眼前黑影飘动并伴有视力缓慢下降，一般在40岁以上发病，常有家族史。在某个连续传递三代的玻璃体淀粉样变性的家族中（遗传系谱图如图1所示），第1代发病情况不详，第2～4代共有7人发病，男女发病机会均等。请分析回答：

（1）依据遗传系谱图推断，玻璃体淀粉样变性最可能的遗传方式为_______。

（2）经研究发现，此眼病患者的转甲蛋白（TTR）空间结构异常，提取III-1和III-2的DNA，通过_______技术扩增TTR基因，实现TTR基因的特异性扩增的关键是设计合理的_______。

（3）扩增产物测序结果发现，III-2的TTR基因序列仅有T1（图2）一种，而III-1的TTR基因序列有T1和T2（图3）两种。

①根据T1基因和T2基因碱基序列推断，III-1部分TTR结构变异的根本原因是_______，T1基因与T2基因的关

系为_______。

②依据遗传系谱图和基因测序结果_______（可以，不可以）确定玻璃体淀粉样变性的遗传方式，III-5和III-6生育一个终生正常孩子的概率为_______。

（4）进一步研究发现，TTR基因序列有多种变异，体现了基因突变的_______特点，TTR基因的突变_______（一定，不一定）会导致TTR变异，原因是_______，该机制的意义是降低突变的多害性。

（5）I-1和I-2在40岁前的视力状况最可能为_______，该实例说明表现型是由_______决定的。

               图1

(1)甲、乙两种酶用同一种蛋白酶处理，酶活性与处理时间的关系如图1所示。甲酶的化学本质最可能是________。

图2

图3

① 使用该加酶洗衣粉的最适宜温度为________。

② 在0 ℃和75 ℃时，酶的催化效率基本都为零。但当温度再度恢复到45 ℃时，后者酶的催化能力已不能恢复，这是因为________________________________。

图4

①a、b过程中，酶作用的部位依次是________。

② 若将获得的DNA片段用PCR技术进行扩增，与细胞内的DNA复制过程相比，利用PCR技术扩增DNA时所需酶的不同之处是____________。