基因工程是在现代生物学、化学和工程学基础上建立和发展起来的，并有赖于微生物学理论和技术的发展，现在基因工程在动植物育种上有广泛而重要的应用。基因工程基本操作流程如下图，请据图分析回答：

（1）图中A最常用的是________。在基因工程中，第②步需要在________的催化作用下才能完成拼接过程。如果利用PCR技术扩增目的基因，需要加入的酶是________。

（2）研究中发现，番茄体内的蛋白酶抑制剂对害虫的消化酶有抑制作用，导致害虫无法消化食物而被杀死，人们成功地将番茄的蛋白酶抑制剂基因导人玉米体内，玉米获得了与番茄相似的抗虫性状，玉米这种变异的来源是________。

（3）科学家在某种植物中找到了抗枯萎病的基因，需要将该基因导入金茶花叶片细胞的染色体DNA上，培育出抗病的金茶花植株。在此基因工程操作过程中，如果需要检测目的基因是否在受体细胞中转录出相应的mRNA，需要利用________技术。如果需要

在个体生物学水平上检测该植物是否具备抗病性，需要做________实验。

（4）利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，联系有关细胞器功能的知识，请回答为什么不能利用大肠杆菌生产人的糖蛋白?

[生物——选修3：现代生物科技专题]

下图为基因工程获得转基因抗虫棉的过程。据图回答下列问题：

(1)图中①②所示的PCR技术是       反应的缩写，其原理是       。

（2）过程①中，加热至94℃的目的是       。过程②中，引物与单链相应互补序列结合，然后在       酶的作用下进行延伸，如此重复循环多次，使目的基因的数量以       形式扩增。

（3）过程③常用农杆菌转化法，农杆菌中Ti质粒上的       可转移至受体细胞，并整合到受体细胞染色体DNA上。要检测目的基因是否转录出了mRNA分子，可采用       技术。

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菊天牛是菊花的主要害虫之一，为达到防治目的，科研人员通过转基因技术培育出了抗虫菊花。请回答下列问题：

（1）可用处理土壤农杆菌，使其处于以便吸收重组质粒。

（2）将重组质粒导入土壤农杆菌的目的是利用农杆菌能够的特点，使目的基因进入受体细胞中，并插入到菊花细胞的上，最终形成转基因植株。

（3）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的的基因时，需根据的脱氧核苷酸序列设计特异引物，以为模板进行第一轮扩增。

（4）将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2龄幼虫，实验结果如下表所示：

①对照组应饲喂等量的菊花嫩茎及叶片与人工饲料混合物。

②据表分析，实验组与对照组差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用。

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科学家通过利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，提高了光合作用过程中Rubisco酶对CO₂的亲和力，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：

（1）PCR过程所依据的原理是________，利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成________；扩增过程需要加入________酶。

（2）启动子是一段有特殊结构的DNA片段，具作用是________。目的基因能在不同生物体内正常表达原来的蛋白质，说明整个生物界________。PCR定点突变技术属于________的范畴。

（3）可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用________将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的________技术，来最终获得转基因植物。

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   基因疫苗是指编码外源性抗原的基因导入人和动物体内，让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。某科研所计划利用基因疫苗，通过基因工程和胚胎工程技术培育具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛。请回答下列问题：

（1）基因工程的核心步骤是________________________，这一过程需要的酶是___________________________________________。

（2）一个完整的基因表达载体至少包括目的基因，________，________，标记基因等。通常用________________________技术将目的基因导入动物细胞。

（3）欲检测高产奶牛体内是否出现口蹄疫病毒的抗原蛋白，在分子水平上检测的方法及结果是从基因牛中提取________________，用________________________杂交，如果出现杂交带，表明奶牛中出现了抗原蛋白，反之，表明奶牛中未出现抗原蛋白。

（4）胚胎工程最后一道工序是胚胎移植，其实质是_________________________________。

（5）为提高胚胎的利用率，可以采用胚胎分割技术，应该选用___________________分割。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意将____________________均等分割。

（1）培育抗虫棉时，检测所得植株染色体的DNA上是否插入了目的基因的方法是_________，从个体水平检测所得植株是否具有抗虫特性，需要做_________。

（2）植物细胞原生质体融合后要进行筛选，目的是要获得_________进行组织培养。体细胞诱变育种过程中，可以对愈伤组织进行一定处理后，从中筛选_________，以培育新品种。

（3）单克隆抗体制备过程中，首先要用_________对融合的细胞进行筛选，之后还需进行克隆化培养和抗体检测，最终选择出的细胞具有_________的特点。

（4）在胚胎移植时，首先要对_________进行选择和处理，胚胎移植后，要对受体进行是否_________的检查。