科学家从某些能无限增殖的细胞质中分离出无限增殖的调控基因（PrG），该基因能激发许多动物细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更为广阔的前景．请回答下列问题．

（1）利用细胞融合技术制备单克隆抗体时有两次筛选，第一次筛选的目的是________________________，第二次筛选的目的是_________________。

（2）有人提出，可以直接通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，其思路如图1所示．请回答．

①已导入重组质粒的Ⅱ进行“检测”的目的是________________________；

②题目中Ⅱ所指的细胞是______________________________，Ⅲ所指的细胞具有的特点是__________________________________________．

（3）也有人提出用细胞核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，在图2中试用相关的图示及文字表示该过程．

研究人员将动物体内的能够合成胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组，并且在大肠杆菌中表达成功．请据图1回答：

C．既不能被E也不能被F切开 D．能被F但不能被E切开．

hNaDC3（人钠/二羧酸协同转运蛋白-3）主要分布于肾脏等重要器官，它具有促进人肾小管上皮细胞能量代谢和转运等功能。科研人员利用基因工程技术构建绿色荧光蛋白与hNaDC3融合基因，并在肾小管上皮细胞中表达，以动态观察hNaDC3在肾小管上皮细胞中的定位情况，为进一步研究hNaDC3的生理功能奠定基础。研究主要过程如图（实验中使用的限制酶SacⅠ的识别序列是GAGCT↓C，限制酶SacⅡ识别序列是CCGC↓GG）。请分析回答：

（1）与PCR相比，过程①需要的特有的酶是    _，应从人体     _（器官）的组织细胞中获得模板RNA。

（2）DNA分子被SacⅠ切割后，形成的黏性末端是      _ 。过程②选用SacⅠ、SacⅡ分别切割hNaDC3基因和质粒载体，可实现目的基因定向插入并正常表达的原因是       _   。

（3）过程③可获得多种重组DNA，可依据不同DNA分子的大小，运用       _（技术）分离、筛选重组表达载体。

（4）显微观察导入“绿色荧光蛋白-hNaDC3融合基因”的猪肾小管上皮细胞后发现：转染后第1天绿色荧光混合分布于细胞质和细胞膜，核中未见绿色荧光；到第5天绿色荧光清晰聚集于细胞膜，细胞质和细胞核中未见绿色荧光。根据这一观察结果还不能得出“hNaDC3是在细胞质中生成后，在细胞膜上发挥作用”的结论，需要设置对照实验以排除绿色荧光蛋白本身的定位，对照实验的设计思路是      _  。

（5）研究人员以较高浓度的葡萄糖溶液培养导入融合基因的猪肾小管上皮细胞，一段时间后发现，转染细胞的细胞膜上绿色荧光明显增强。这一实验结果可以说明        _。

下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。

据图回答：

(1)图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含________的培养基上进行。

(2)过程①可采用的操作方法是________。

(3）重组质粒中除含目的基因和标记基因外，还需有         、         等调控序列，标记基因的作用是                               。

（4）为了检测人乳铁蛋白基因是否转录出了mRNA，可用标记的人乳铁蛋白基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为____________。为了检测人乳铁蛋白基因转录的mRNA是否翻译成蛋白质，常用             技术。

（5)如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的________中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的________上。

(一)空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。步骤如下：

①配制培养基（成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H₂O）；②制作无菌平板；③设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；④将各组平板置于 37℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。

回答下列问题：

（1）                 __是消除污染杂菌的通用方法。
（2）该培养基中的成分X通常是                 __，步骤②中常采用的灭菌方法是                 __。
（3）步骤③中，实验组的操作是                 __。
（4）将各组平板置于 37℃恒温箱中培养过程中，平板应倒置，其作用是                 __。
（5）若在调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落。对该实验数据的正确处理的方法是                 __，理由是               __。
（二）在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（ kan′）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长．下图为获得抗虫棉的技术流程．

请据图回答：
（1）A过程需要的酶有               __．
（2）除了质粒外，基因工程的载体还有               __、               __
（3）C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入               __．
（4）科学家发现转基因植株的卡那霉素抗性基因的传递符合孟德尔遗传规律．
①将转基因植株与               __杂交，其后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为1： 1．
②若该转基因植株自交，则其后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为 __ __     __．
③若将该转基因植株的花药在卡那霉素培养基上作离体培养，则获得的再生植株群体中抗卡那霉素型植株占 ______ %．

一种重症联合免疫缺陷病（简称SCID），这种患者缺乏正常的人体免疫功能，只要稍被细菌或病毒感染，就会发病死亡。经研究证实，SCID病人细胞的一个常染色体上编码腺苷酸脱氨酶（简称ADA）的基因ADA发生了突变。目前，人们已经找到了治疗该疾病的方案。如下图：

（1）运载体必须具备的条件是（    ）

a．能在宿主细胞中复制并保存     b．具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接

c．具有标记基因，便于进行筛选      d．是环状形态的DNA分子

 （2）在此图过程中用到的基因操作工具分别是                                。

 （3）研究人员将ADA注入淋巴细胞，而不是其他细胞，其原因是什么？

 （4）图中的治疗方法是_______（体内或体外）基因治疗法，这是___________生物技术的应用。请列举除了在医学领域，该生物技术在其他领域的一些成就。                

 （5）可用SCID病人的血液来作为实验“DNA粗提取”的实验材料吗？为什么？

下图为科研人员制备能合成干扰素的人参愈伤组织细胞的流程，①—④表示相关的操作，E coRⅠ、Bam HⅠ为限制酶，它们的识别序列及切割位点如表所示。回答下列问题：

（1）上述过程中，将目的基因导入人参愈伤组织细胞使用的方法是___________，检测目的基因是否导入人参愈伤组织细胞的方法是___________。

（2）步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是___________。科研人员还在两种引物的一端分别加上了___________和___________序列，以便于后续的剪切和连接。

（3）过程②所构建的基因表达载体中启动子的作用是___________，过程③中需先用___________处理根瘤脓肝菌以便将基因表达载体导入细胞。

（4）同一种限制酶切割质粒和目的基因相比，用EcoRⅠ、BamHⅠ两种限制酶切割的优点是___________。

口蹄疫是由RNA病毒引起的一种偶蹄动物传染病。科学家尝试利用转基因番茄来生产口蹄疫疫苗(主要成分：该病毒的一种结构蛋白VP1)，过程如图所示。请据图回答下列问题：

(1)在上述实验过程中所涉及的生物技术工程有______________、________________。

(2)⑤过程代表的是________，经过该过程形成的细胞具有_________________________的特点。

(3)若要检测转化成功的番茄植株，除检测标记基因产物外，还可采用________技术检测目的基因在番茄体内是否转录。

(4)在该过程中，研究人员首先获取了目的基因，并采用________技术对目的基因进行扩增，该技术需要的条件是________、酶、原料、模板；然后构建基因表达载体，基因表达载体中除了具有目的基因、启动子和终止子之外，还需具有__________。