农业科技工作者在烟草中找到了一抗病基因，现拟采用基因工程技术将该基因转入棉花，培育抗病棉花品系。请回答下列问题。

（1）为了能把该抗病基因转入到棉花细胞中，常用的载体是__________。

（2）要使载体与该抗病基因连接，首先应使用限制性内切酶（限制酶）进行切割。假如载体被切割后，得到的分子末端序列为，则能与该载体连接的抗病基因分子末端是（    ）

（3）切割完成后，采用DNA连接酶将载体与该抗病基因连接，连接后得到的DNA分子称为_____。

（4）再将连接得到的DNA分子导入农杆菌，然后用该农杆菌去_________棉花细胞，利用植物细胞具有的_________性进行组织培养，从培养出的植株中筛选（选择）出抗病的棉花。

（5）转基因棉花获得的_______________是由该表达产物来体现的。

C．RNA自我复制           D．按照RNA上密码子的排列顺序合成蛋白质

（2）限制酶Sma和限制酶Xma作用的不同点是___________________________________。

（3）图二中的目的基因D需要同时使用Mse酶和Pst酶才能获取，而图一所示的质粒无相应的限制酶切位点。所以在用该质粒和目的基因构建重组质粒时，需要对质粒改造，构建新的限制酶切位点。试写出构建需要的限制酶切位点的过程（提供构建需要的所有条件）：

①首先用_______________酶处理质粒；

②然后用______________酶处理质粒，使被切开的质粒末端连接上相应的脱氧核苷酸；

③再运用DNA连接酶酶处理质粒，形成新的限制酶切位点，即可被_________酶识别。

（4）基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。下图表示运用影印培养法（使在一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法）检测基因表达载体是否导入大肠杆菌。培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有___________。从检测筛选的结果分析，含目的基因的是________（填编号）菌落中的细菌。

基因工程制药是制药行业突起的一支新军，自重组人胰岛素投放市场以来，利用转基因的工程菌生产的药物已有60多种。据此回答下列问题：

(1)制造工程菌所需要的工具酶是_________________________________________，其作用部位是________键。

(2)除采用人工合成目的基因的方法外，还可以通过____________和____________的方法获得目的基因，后者可以在特定的仪器中加入模板DNA、dNTP(即dATP、dTTP、dGTP、dCTP)、________以及________等物质后自动完成。

(3)利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，________(填“可以”或“不可以”)用大肠杆菌直接生产人的糖蛋白，原因是大肠杆菌缺少____________等细胞器。

如图是从酵母菌中获取某植物需要的某种酶的基因的流程,结合所学知识及相关信息回答下列问题：

（1）图中cDNA文库         基因组文库（选填“大于”或“等于”或“小于”）。

（2）①过程提取的DNA需要         的切割。

（3）为在短时间内大量获得目的基因，可用的技术是       ，其原理是                。该反应体系的主要成分应该包含：扩增缓冲液（含Mg²⁺）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、_____________和_________________。

（4）目的基因获取之后，需要进行基因表达载体的构建，基因表达载体的组成必须有_________             及标记基因等，此步骤是基因工程的核心。

（5）将该目的基因导入某双子叶植物细胞，常采用的方法是           ，其能否在此植物体内稳定遗传的关键是            ，可以用                技术进行检测。

2015年，屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法获奖。工业上青蒿素一般从青蒿植株中提取，产量低，价格高。基因工程及细胞工程等为培育出高青蒿素含量的青蒿提供了思路。科学家先通过紫外线处理大量青蒿幼苗后，偶然发现一株高产植株。通过基因测序发现该高产植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变。（6分，每空1分）

（1）提取了高产植株的全部DNA后，要想快速大量获得该突变基因可以采用PCR技术，该技术的原理是___________________，需要的条件有___________________________________________。

（2）如果用青蒿某个时期mRNA反转录产生的双链cDNA片段，该双链与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做青蒿的________________。

（3）将获得的突变基因导入普通青蒿之前，先构建基因表达载体，图1、2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答：

用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因________________________________________________________________________，构建好的重组质粒在其目的基因前要加上特殊的启动子，启动子是_______________________________识别结合位点。

（4）检测目的基因是否表达出相应蛋白质，应采取________________________________________技术。

（1）在培育转人生长激素基因牛过程中，①过程需要的工具酶是                  ，②过程常用的方法是                          。

（2）转人生长激素基因牛可通过分泌的乳汁来生产人生长激素，在基因表达载体中，人生长激素基因的首端必须含有                    。

（3）prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅱ最可能是            细胞，Ⅲ代表的细胞具的特点是                         。

（4）在抗虫棉培育过程中，经④过程，重组Ti质粒使目的基因进入受体细胞，并整合到该细胞的                     上。