下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：

（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用    和    两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过   酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于    态的大肠杆菌。

（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加    ，平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中   。

（3）若BamH I酶切的DNA末端与BclI酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为    ，对于该部位，这两种酶   （填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开。

（4）若用Sau3AI切图1质粒最多可能获得    种大小不同的DNA片段。

(一)请回答与“泡菜的腌制”实验有关的问题：

(1)腌制泡菜的基本过程是：将蔬菜、盐水、糖、白酒等放入洗净的菜坛，混合均匀。坛口加盖后用________封好。如果希望发酵快些，可将蔬菜在________中浸1分钟。加入的白酒，既可作为调味剂增加醇香感，还具有________的作用。

(2)腌制泡菜过程中起作用的微生物主要是乳酸菌和________。为了分离某种美味泡菜汁中的乳酸菌作为菌种，可将稀释后的泡菜汁用________法快速接种到平面培养基上，立即将培养皿________(A．正放于无氧培养箱 B．正放于有氧培养箱 C．倒置于无氧培养箱 D．倒置于有氧培养箱)中培养。

(二)生物工程技术为人们获得需要的生物新品种或新产品提供了便利。请回答：

人的生长激素基因重组DNA→受精卵转基因牛

抗虫基因→重组Ti质粒→细菌M棉花细胞抗虫棉

(1)在培育转人生长激素基因牛的过程中，①过程需要的工具酶是________。②过程中，应对代孕母进行________处理，以便早期胚胎的着床。若在②过程中培养到早期胚胎阶段采用________技术。可培育出多头相同的转基因牛。

(2)在抗虫棉培育过程中，重组Ti质粒先导入细菌M，细菌M的名称是________，③过程中的棉花细胞常采用愈伤组织细胞而不采用叶肉细胞，原因是愈伤组织细胞________，④过程中，愈伤组织细胞可通过________技术培养成单个胚性细胞，胚性细胞再分化形成的胚状体可发育成植株。

（1）图中D过程的方法称为_________。A过程所需的酶是_________和_________。

（2）图中重组质粒，除了含有目的基因外，还必须有___________、___________以及___________；目的基因能否遗传给后代常采用的检测方法是                                             。

（3）E过程需要运用__________技术，经过__________、___________过程最终形成植株，其依据的原理是__________。

科学家从某细菌中提取抗盐基因，转入烟草并培育成转基因抗盐烟草。如图是转基因抗盐烟草的培育过程，含目的基因的DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。请分析回答：

(1)①过程获得的抗盐基因可用PCR技术进行扩增，该技术必须用________酶，所需的原料是_____________。PCR一般要经历三十次以上的循环，每次循环包括变性、________和________三步。

(2)已知几种限制酶识别序列及其切割位点如表：

 用图中的质粒和目的基因构建重组质粒，不能使用SmaⅠ酶切割，原因是__________________________________。图中①②过程为防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用____________________酶对外源DNA、质粒进行切割。

(3)图中⑤、⑥依次表示组织培养过程中抗盐烟草细胞的________、________过程。

(4)为确定转基因抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的________作探针进行分子杂交检测，又要在个体水平上鉴定，后者具体过程是______________________________________________________________________________________________________________________。

(1)过程①中，应提取_______________的基因组DNA作模板；同时根据________________基因的核苷酸序列合成引物，过程①中使用的工具酶为____________________

(2)进行过程③前，利用_______________处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞。

(3)过程④中，应将大肠杆菌置于__________条件下诱导培养；然后提取大肠杆菌的____________进行检测，以鉴定目的基因是否成功表达，此方法称为___________

（1） 由过程①获得的A为____________；过程①中需用到的酶有____________；过程①中，PCR扩增人凝血因子IX基因前需根据已知的一小段核苷酸序列合成出________。

（2） 利用A中的_________基因特性来筛选鉴定出含有人凝血因子IX基因的成纤维细胞。

（3） 进行胚胎移植时，代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生______________，这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。

请依材料所给出的信息分析回答下列问题：

（1）在基因工程操作程序中，                是基因工程的核心，为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的         和       之间。

（2）采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。该PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液（含Mg^2＋）、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、              和                 。

（3）据材料Ⅱ，在过程②中，将成纤维细胞置于5％CO₂的气体环境中，CO₂的作用是         。在过程③中，用           处理以获取更多的卵（母）细胞。成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行          处理。

（4）从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是               。在胚胎移植前，通过             技术可获得较多胚胎。

（1）基因工程中，A→B利用____________技术，依据的原理是__________，其中①为__________过程。

（2）B→C为转基因绵羊的培育过程，其中③用到的生物技术主要有动物早期胚胎培养和____________。

（3）B→D为抗虫棉的培育过程，其中④过程常用的方法是____________，要确定目的基因(抗虫基因)导入受体细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在个体生物学水平上的鉴定过程：_____________________。

（1）据系谱图分析，该病为             染色体上的          性基因控制的遗传病，推测Ⅱ-3的基因型是               。

（2）该病患者由于垂体产生的             不足，引起侏儒症。

（3）研究人员采集了10位家系成员（系谱图中有编号的个体）的血样，提取了这些成员的DNA，采用                技术对该病相关基因—GHRHR基因片段（260bp，bp代表碱基对）进行大量扩增，然后用限制性核酸内切酶BstUⅠ对其切割，并进行琼脂糖凝胶电泳分析，电泳图谱如下图所示。

据系谱图和电泳图分析可知：

①该病患者GHRHR基因片段有         个BstUⅠ酶切位点。

②在提取DNA的部分家系成员中，            是致病基因的携带者。

③若Ⅱ-10与Ⅱ-11再生育一个孩子，这个孩子患病的概率是            。