我国目前临床使用的乙肝疫苗大多为基因工程疫苗,其有效成分是乙肝表面抗原蛋白。下图是将乙肝表面抗原基因转移到烟草细胞内生产乙肝疫苗的示意图,请据图回答下列问题。

（1）过程①表示             。为了使目的基因正常表达，其首端必须有       ，它是RNA聚合酶识别和结合的部位。若限制酶切出了平末端，要选择           进行连接。（填“E•coli DNA连接酶”或“T4 DNA连接酶”）

（2）图中将乙肝表面抗原基因导入烟草细胞的方法称为            。它是利用运载体Ti质粒中含有__________序列，可以将目的基因整合到宿主细胞的染色体上。

（3）图中将乙肝表面抗原基因导入烟草细胞后，长芽、生根的过程中采用了细胞工程的_______________技术，该技术的原理是                    。

（4）检测烟草植株细胞中乙肝表面抗原基因是否合成出乙肝表面抗原蛋白，采用的方法是            。

科学家将人的生长激素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达．但在进行基因工程的操作过程中，需使用特定的限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选．已知限制性核酸内切酶I的识别序列和切点是-G↓GATCC-，限制性核酸内切酶II的识别序列和切点是-↓GATC-，据图回答：

(1)过程①表示的是采取             的方法来获取目的基因。

(2)根据图示分析，在构建重组质粒过程中，应用限制性核酸内切酶        （Ⅰ或II）切割质粒，用限制性核酸内切酶          （Ⅰ或II）切割目的基因。

(3)人的基因之所以能与大肠杆菌的质粒进行重组，原因是                     。

(4)将重组质粒导入细菌B之前，要将细菌B放入一定浓度的         溶液中处理，目的是                                。

(5)要筛选出含目的基因的受体细胞应将大肠杆菌培养在含           的培养基上

(6)人体的生长激素基因能在细菌体内成功表达是因为                    ，写出目的基因导入细菌中表达的过程                        。

[生物一选修3现代生物科技专题]

   人类是乙型肝炎病毒的唯一宿主，接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效方法。乙肝基因工程疫苗的生产和使用过程如下：

（1）从图可知，该目的基因的具体功能是________。目的基因在人体细胞和大肠杆菌细胞中均能表达出相同的抗原，这是因为________原因所致。

（2）若要迅速获取大量的目的基因，常用的技术是（写中文全称）________。过程①合成重组质粒需要限制酶，还需要________。过程②常需要________处理大肠杆菌细胞，促使转化完成。

（3）要形成有效的重组质粒，选择适当的限制酶很重要，图1示意大肠杆菌质粒的相关基因与限制酶切点；图2示意有关限制酶在DNA分子中的具体切点。

要成功转入目的基因，可有两种选择限制酶的方案，分别是________或________。其中有一种方案重组效率较高，可以避免出现自身环化。

[生物—选修3：现代生物科技专题]

科学家利用土壤农杆菌把编码霍乱毒素的无毒性β链的基因转移到苜蓿细胞，再将其培养成幼苗，食用这种苜蓿苗后，霍乱毒素β链很快被喉、肠胃等部位的分泌性粘液细胞吸收，刺激特异性抗体的大量产生，使机体获得对霍乱的免疫．其具体过程如下：

（1）构建重组DNA分子常用的工具酶是________、________，基因工程中构建基因表达载体的目的是________。

（2）图中过程②采用的方法是________，Ti质粒上有一个tms片段能促进生长素的大量合成，在对Ti质粒改造时要将该片段去除，其原因是________。

（3）该实验中将农杆菌转入苜蓿细胞的原生质体后，需再生细胞壁，实验室检测原生质体是否再生出细胞壁的方法是________。

（4）基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自于________，DNA的基因通过________合成蛋白质。

[选修3——现代生物科技专题]

科学家从某细菌中提取抗冻基因，转入番茄并培育出抗冻番茄。下图是转抗冻基因番茄的培育过程，含抗冻基因的DNA片段和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。分析回答问题：

（1）若要获得抗冻基因，可以从细菌中提取，也可以通过分析抗冻蛋白________的序列推测基因的结构，进而人工合成抗冻基因。对获得的抗冻基因可用________技术进行扩增。

（2）上述两种途径获得的抗冻基因________（填“一定”或“不一定”）相同，原因是________。

（3）用图中的质粒和抗冻基因构建重组质粒，不能使用SmaⅠ酶切割，原因是________。图中①②过程为防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用________酶对外源DNA、质粒进行切割。

（4）图中过程⑤表示________。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

   乙型肝炎病毒（HBV）是一种DNA病毒，接种乙肝疫苗是最有效的预防乙型肝炎的方法，目前我国广泛使用的是利用基因工程生产的重组乙肝疫苗，请根据图回答问题：

（1）编码乙肝病毒表面抗原（HBsAg）的基因可通过________酶从病毒DNA中获得，再用________技术进行扩增，该技术使用的工具酶是________。

（2）构建[X]________时必须使用________酶将HBsAg基因和________连接起来。

（3）检测HBsAg基因是否在受体细胞成功表达，可进行________杂交，若有杂交带出现，说明受体细胞已经合成HBsAg。

（4）之前有研究发现，选用细菌为受体细胞时，即使使用强启动子，也不能得到大量具有免疫原性的HBsAg。这可能是由于________，故选用真核细胞（酵母菌）作为受体细胞更合适。

(1)获得矮杆抗病小麦新品种，常规方法是进行杂交育种，其培育过程如下图所示：

子二代中出现矮杆抗病个体的比例为________，基因型有________种，最符合要求的基因型是________。

(2)若用单倍体育种，首先需利用子一代产生的花粉进行离体培养，得到的幼苗被称为________，为使幼苗染色体数目加倍，还需用________处理，因为它能抑制________的形成导致染色体不能移向细胞两级，引起细胞内染色体数目加倍。

(3)为获得符合要求的小麦品种，还可用物理因素(如X射线)来处理，该育种方法是________，利用的原理是________。

(4)利用基因工程技术，也可获得具有各种抗逆性的小麦新品种。转基因育种过程中需要用到一些工具，其中“基因的剪刀”是________，DNA连接酶是________(填“基因的针线”或“基因的运载体”)。

(选修三)毛角蛋白Ⅱ型中间丝(KIFⅡ)基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。

(1)过程①中最常用的运载工具是　　　　,所需要的酶是限制酶和　　　　。

(2)在过程②中,用　　　　处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养过程中,将成纤维细胞置于5% CO₂的气体环境中,CO₂的作用是　　　　　。

(3)在过程③中,用　　　　处理以获取更多的卵(母)细胞。成熟卵(母)细胞在核移植前需要进行　　　　处理。

(4)从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是　　　　。在胚胎移植前,通过　　　　技术可获得较多胚胎。

（选修一）从自然菌样筛选较理想的生产菌种的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。

（1）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养嗜盐菌的菌样应从　　　　　　　环境采集。

（2）富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其在群落中的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择　　　　　的培养基，并在　　　　　　　条件下培养。

（3）下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。 

获得图A效果的接种方法是　　　　　　　　，获得图B效果的接种方法是　　　　　　　　。

（4）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行　　　　　，接种前要进行　　　　　，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在　　　　　　　条件下进行。

（1） 筛选微生物 L时，用            作为培养基中的唯一氮源，加入            凝固剂。接种时应采用           方法

（2） 下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是           灭菌

   A高压蒸汽     B 紫外灯照射      C 70%的酒精侵泡液      D过滤

（3）对微生物L进行扩大培养时宜采用            培养基，接种时采用           方法对接种环进行灭菌

（4）脲酶宜采用共价偶联法进行固定化，可通过检测固定化脲酶的           确定其应用价值。除此法外，酶的固定化方法还包括           及交联法等。

（二）下面是关于获得能产生人干扰素大肠杆菌的问题。请回答：

（5）用限制性核酸内切酶识别人干扰素基因和质粒中一段特定的          并切割，然后用           连接形成重组DNA。该质粒是一种含抗生素抗性基因的          核酸分子

 A.双链环状  B.单链环状  C.双链线状  D.单链线状

（6）将含有人干扰素基因的重组质粒导人到大肠杆菌，经含有           的培养基筛选等过程，最终获得能产生人干扰素的大肠杆菌。

(1)如图表示目的基因在DNA分子中的相对位置及利用PCR技术(多聚酶链式反应)扩增目的基因过程中第一轮循环产生的产物：

①PCR技术的原理是利用了________。

②与体内DNA复制相比较，PCR反应要在一定的缓冲溶液中才能进行，并且要严格控制________条件。

③PCR中加入的引物有________种。

④请绘出以3链为模板经PCR扩增的产物________。

(2)用两种识别序列不同的限制酶M和N切割(识别序列和切割位点如图)某种质粒后，通过凝腔电汰分离分析得下表：

则：①在该质粒中，N酶的切割位点有________个。

②若将M酶与N酶切出的DNA末端用________酶相互连接后，对于该连接部位序列是否仍可以用M酶、N酶进行切割：________(填“都可以”、“都不可以”或“只有一种可以”)。