1型糖尿病患者的另一种治疗方法是可以通过注射胰岛素的方法来缓解病情。利用微生物基因工程技术发酵生产可以获得大量胰岛素。现有一种可以作为目的基因运载体的普通质粒，用不同的酶切割质粒如图2所示[ 1kb即1000个碱基对，*表示EcoRV限制酶切割的一个黏性末端（单链片段）]。请将Mbol酶和EcoRV酶在图3中标注其所在位置和切割的长度。

回答下列有关遗传信息传递与表达的问题。

利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素，图甲中的三个DNA片段上以此表示出了EcoRI、BamH I和Sau3A I三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图乙为某种表达载体示意图（载体上的EcoRI、Sau3A I的切点是唯一的）。

（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有                      。

（2）可以从下列哪些人体细胞中获取生产人胰岛素的目的基因         （多选题）。

A.消化道黏膜上皮细胞              B.胰岛A细胞

C.胰岛B细胞                      D.造血干细胞

（3）经BamH I酶切割得到的目的基因可以与图乙所示质粒被            酶切后的产物连接，理由是              。连接后的重组质粒________（能、不能、不一定）被BamH I切割。

（4）将重组质粒导入到大肠杆菌受体细胞，可用含有          的培养基进行初步筛选。目的基因成功表达的标志是               。

（5）已知图乙所示质粒经EcoRI和Sau3AI联合酶切后形成2.0 kb和4.2 kb（1 kb = 1000对碱基）两种DNA片段，若将0.8 kb的单个基因插在质粒的Sau3AI位点处，所形成的重组质粒用EcoRI和Sau3AI联合酶切后，能形成的DNA片段分别为________。

A. 2.8  2.0  2.2               B. 1.8  2.0  2.2 

C. 4.0 1.8  1.0                D. 2.0  0.8  4.2

A．卡那霉素和亮氨酸均含的培养基

B．卡那霉素和亮氨酸均不含的培养基

C．含卡那霉素但不含亮氨酸的培养基

D．含亮氨酸但不含卡那霉素的培养基

回答下列有关遗传信息传递与表达的问题。

利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素，图甲中的三个DNA片段上以此表示出了EcoRI、BamH I和Sau3A I三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图乙为某种表达载体示意图（载体上的EcoRI、Sau3A I的切点是唯一的）。

（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有                      。

（2）可以从下列哪些人体细胞中获取生产人胰岛素的目的基因________（多选题）。

A.消化道黏膜上皮细胞              B.胰岛A细胞

C.胰岛B细胞                      D.造血干细胞

（3）经BamH I酶切割得到的目的基因可以与图乙所示质粒被            酶切后的产物连接，理由是              。连接后的重组质粒    （能、不能、不一定）被BamH I切割。

（4）将重组质粒导入到大肠杆菌受体细胞，可用含有          的培养基进行初步筛选。目的基因成功表达的标志是               。

（5）已知图乙所示质粒经EcoRI和Sau3AI联合酶切后形成2.0 kb和4.2 kb（1 kb = 1000对碱基）两种DNA片段，若将0.8 kb的单个基因插在质粒的Sau3AI位点处，所形成的重组质粒用EcoRI和Sau3AI联合酶切后，能形成的DNA片段分别为________。

A. 2.8  2.0  2.2               B. 1.8  2.0  2.2 

C. 4.0 1.8  1.0                D. 2.0  0.8  4.2

（1）用稀释涂布平板法可以纯化三孢布拉氏霉菌，进行梯度稀释时一般是将1 mL菌液移入盛有________mL无菌水的试管中。常用_____________法进行活菌计数，其原理是培养基表面的一个菌落来源于______________________。但统计的菌落数往往__________（填“多于”或“少于”）稀释液中的活菌数。

（2）不同的材料选用的提取方法不同，根据胡萝卜素具有_________________________的特点，常用_______法提取胡萝卜素，其效率主要取决_________________。

（3）图为提取的胡萝卜素样品通过纸层析进行鉴定的结果，从图中分析可知，色带________为β­胡萝卜素。出现样品2的结果，可能原因是在操作过程中①________(A．萃取温度高，时间长　B．干燥温度高，时间长)；②________(A．未经浓缩蒸馏　B．点样太快，样点小)。

【选修3现代生物科技专题】继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，膀胱生物反应器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培养出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中，请回答下列问题。

（1）人的生长激素基因可以从人类cDNA文库中获取，建立该基因文库时通常需要从人的_________________细胞中提取全部的_____________，通过__________方法获取cDNA，并将其导入________________中储存。

（2）人的生长激素基因进入小鼠细胞内，且能维持稳定和表达的过程称为________。常用方法是_______________________。基本操作是：首先提纯含有目的基因的_________________。并将其转入________细胞中。经过早期胚胎培养后再移植到雌性动物的子宫或输卵管中使其发育。

（3）若要一次获得多只相同的转基因小鼠，可采用_________技术，该技术的最后一道工序是___________________。

胡萝卜是生活中常见的植物，根据所学知识回答下列有关问题。

（1）胡萝卜的韧皮部细胞中含有核酸的细胞器有&;      ，胡萝卜植株叶肉细胞的叶绿体和线粒体中，部分蛋白质由细胞核基因指导合成，说明二者具有       （选填“自主”、“半自主”）细胞器的特点。

（2）从胡萝卜中提取胡萝卜素常用的方法是        法，用这种方法提取胡萝卜素常选用石油醚作为溶剂。

（3）一般情况下，提取胡萝卜素时，提取效率与原料颗粒的含水量成       比。

（4）对提取的胡萝卜素粗品进行鉴定时需要用         对照。

（5）用胡萝卜韧皮部进行植物组织培养所用的MS培养基通常要加入一定量的       、        等植物激素，以启动外植体的细胞分裂、脱分化和再分化。这两种激素的使用先后顺序和     都会影响植物组织培养的结果。

40 【生物———选修 3 :现代生物科技专题】( 15 分)

下图是人体免疫物质的培养方法，①~⑥ 表示不同的过程，请回答。

（1）方法 1 中，细胞 A 应具备的特点是      。体外培养细胞 Y 需要满足以下条件：           、添加了血浆（或 “血清”）培养基、适宜温度与pH、         的气体环境等。

（2）方法 2 中，通过④得到的目的基因与细胞 B 中原有基因            （一定/不一定）相同，⑤过程必须用到的工具酶有           ，结构甲的组成必须包括          及目的基因等。

（3）若用棉花生产抗体 2，⑥过程的受体细胞应选用                   ，经过一系列的过程得到再生植株。要确认该抗体基因是否在再生植株中正确表达，通常采用                  法，在田间试验中检测植株是否含有该种抗体。

如图是从酵母菌细胞内获取某植物需要的某种酶基因的流程，请回答下列问题：

​

(1)图中cDNA文库含有酵母菌的________基因，与基因组文库中的基因相比无________、_________。

(2)①过程提取的DNA需要用限制酶，该酶能够识别_____________________，并且使_____________________断开。

(3)为在短时间内大量获得目的基因，可用PCR方法扩增，该反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含 )、水、4种脱氧核苷酸、模板DNA、________和________。

(4)蛋白质工程也被称为第二代基因工程，其基本途径是从________出发，通过设计蛋白质结构和推测相应的氨基酸序列，进而确定相对应的________，据此获得基因，再经表达、纯化获得蛋白质。

生物技术已经渗入到了我们生活的方方面面，比如：

（1）目前临床用的胰岛素生效较慢，科学家将胰岛素B链的第28和29个氨基酸调换顺序，成功获得了速效胰岛素。生产速效胰岛素，需要对______________（胰岛素/胰岛素mRNA/胰岛素基因）进行定向改造。将改造后的分子导入受体大肠杆菌，一般需要用________处理大肠杆菌细胞，使之成为____________细胞。

（2）科学家利用人绒毛膜促性腺激素的单克隆抗体，制作出了早早孕试纸。要获得人绒毛膜促性腺激素的单克隆抗体，需要先将____________________注射到小鼠体内，培养一段时间之后，将从小鼠的脾脏中提取出的____________和小鼠的骨髓瘤细胞融合，获得杂交细胞。

（3）许多不孕不育的夫妇受益于试管婴儿技术，在体外受精前，要对采集到的精子进行____________处理，才能与卵子受精。受精后形成的受精卵要移入_____________中继续培养一段时间再移植到母亲体内，早期胚胎发育到___________阶段的某一时刻，会冲破透明带，称为“孵化”。

（4）在进行林业工程建设时，一方面要号召农民种树，保护环境。另一方面要考虑贫困地区农民的生活问题，如粮食、烧柴以及收入等问题，其主要体现了生态工程的基本原理是__________________（填一个即可）。