1．生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物（秸秆）生产乙醇，其技术流程为：纤维素酶分解→酵母菌发酵→蒸馏→成品。纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了从土壤中分离纤维索分解菌的实验流程：土壤取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。请分析回答下列问题：

（1）最好选择       环境采集土样。

（2）配置培养基时，各种成分在熔化后分装前必须进行       ，接种前要进行       。

在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板       放置，这样做的目的是       。

（3）以下是A、B两种培养基配方：

A培养基配方：

B培养基配方：

如果要分离提纯土壤中的纤维素分解菌，应选择   （填编号）培养基配方，从功能看该培养基属于___   ____培养基。该培养基能增加样品中纤维素分解菌的浓度，其原理是                  。

（4）为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基中加入       ，将筛选获得的菌液稀释后用      法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生     的菌落作为菌种进行扩大培养。

（5）乙醇是酵母菌的发酵产物，发酵时酵母菌直接利用的物质是               。

2.科学家从某些能无限增殖细胞的细胞质中分离出无限增殖调控基因（prG），该基因能激发许多动物细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更为广阔的前景。请回答下列问题：

（1）利用细胞融合技术制备单克隆抗体的过程中，促进动物细胞融合常用的诱导剂是       ，植物体细胞杂交在细胞融合之前要用           处理。

（2）利用细胞融合技术制备单克隆抗体时有两次筛选，第1次筛选的目的是       ，第2次筛选的目的是           。

（3）有人提出，可以直接通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，其思路如图所示。请回答下列问题：

①．酶A是指       ，酶B是指       。

②．对已导入重组质粒的Ⅱ进行“检测”的目的是         ；题目中Ⅱ所指的细胞是       ，Ⅲ所9指的细胞具有的特点是           。

（4）也有人提出用细胞核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，试用相关的图示及文字表示该过程：（图中·和▲代表细胞核，○代表细胞质）

【加试题】抗疟药青蒿素挽救了数百万人的生命。中国女科学家屠呦呦由于在青蒿素研发所做的重大贡献荣获2015年诺贝尔医学奖。青蒿中青蒿素的含量很低，科研工作者一直致力于提高青蒿素含量的研究。某研究小组给青蒿转入青蒿素合成的关键基因fps，通过该基因的过量表达来提高青蒿素的产量，其过程如下图所示（注：农杆菌中Ti质粒上只有T—DNA片段能转移到植物细胞中）。

（1）提取青蒿的总RNA，在        酶作用下获得青蒿的DNA片段。

（2）如果fps基因的基因序列已知，我们可以通过          合成目的基因或者用PCR扩增目的基因；如果fps基因的基因序列未知，可以从            获取目的基因。

（3）过程①需用同种                   酶对含fps基因的DNA和Ti质粒进行酶切。

（4）过程③中将青蒿细胞与农杆菌混合后共同培养，旨在让            进入青蒿细胞；除尽农杆菌后，还须转接到含卡那霉素的培养基上继续培养，目的是            。

（5）下列有关基因工程的叙述正确的是（   ）

A．大肠杆菌质粒上具有控制质粒DNA转移的基因

B．基因工程的基本原理是让目的基因在宿主细胞中稳定存在和高效复制

C．用氯化钙处理植物细胞，可增加细胞壁的通透性

D．将乙肝抗原导入酵母菌可以获得能生产乙肝疫苗的工程菌

（6）进行组织培养的一般培养基为MS培养基，该培养基由大量元素、微量元素和   组成。MS培养基含有十几种化合物，配制不方便也难称量，可将培养基的各种成分扩大5—10倍分别称量，配成       ，用时稀释。

（7）过程④要在        培养基中进行培养，使之长出较多的丛状苗。

（8）取出试管苗，在适宜的光照、温度和80%以上的         等条件下进行锻炼，再转移至土中培养（定植）。

（9）在植物组织培养中关于消毒和灭菌操作的叙述，正确的是（   ）

A．操作者的双手可以不消毒      B．外植体可以用酒精消毒

C．镊子等器械需用酒精灭菌      D．接种后培养基需用高压蒸汽灭菌

(1)在进行细胞培养时,要对取自转基因奶牛的组织细胞进行分散处理,形成单个细胞,这个过程中需要利用________酶处理。在培养过程中,将成纤维细胞置于5% CO₂的气体环境中,CO₂的作用是________。

(2)用于核移植的供体细胞,一般都选用传代10代以内的细胞,原因是________。

(3)在进行原代培养时,细胞增殖的方式是________,此外,细胞增殖还表现出________和接触抑制等特点。

(4)将进行培养的供体细胞的细胞核注入去核的卵母细胞中,去除卵母细胞细胞核的目的是________。

(5)在转基因奶牛的克隆过程中，下列哪项技术没有运用到 ________ 。     

A．细胞培养技术　　　　             B．细胞核移植

C．胚胎移植技术                    D．基因工程技术

(6) 转基因奶牛克隆的过程是否遵循孟德尔的遗传分离定律________。

(7)人生长激素基因能在奶牛细胞中表达，说明不同生物共用一套________。

（1）根据表面抗原蛋白质的氨基酸序列推测出目的基因的________，进行人工合成，然后通过______技术大量扩增。

（2）基因工程的核心步骤是________，要利用________连接被限制酶切开的键。

（3）在表达过程中，启动子需与________识别和结合，从而驱动转录过程。

（4）实验证明，一定时间内间隔口服该疫苗3次效果更好，其主要原因是体内产生的________细胞数量增多，导致获得的免疫预防作用更强，持续时间更久。

［生物——选修3现代生物科技专题］

下图是利用现代生物工程技术治疗遗传性糖尿病（基因缺陷导致胰岛B细胞不能正常合成胰岛素）的过程图解，请据图回答：

（1）图中①、②所示的结构分别是     、     。

（2）图中③所示的生物工程技术分别是                。

（3）过程④通常用②做受体细胞的原因是              。

（4）过程④的完成需要用到的基因操作工具有   、     、    。

（5）图示方法与一般的异体移植相比最大的优点是           。

下图是科学家研究良种奶牛快速繁殖的过程示意图。

 请据图回答下列问题：

（1）克隆牛G的性别是              。

（2）从良种公牛A采集的精子，需经          处理，才能穿入到卵细胞内部。对良种母牛B进行           处理

（3）为了获得多个基因型相同的后代，可对早期胚胎进行                。

（4）胚胎移植中，需要对代孕D牛进行              处理，以保证胚胎能够在受体的子宫着床、继续生长发育。

（5）限制性核酸内切酶是能够识别和切割DNA分子内一小段特殊           的酶，该酶主要是从原核生物中分离的。若要构建重组DNA分子，通常用     的限制性核酸内切酶分别切割        和     从而形成相同的           ，然后用         将他们连接起来。该酶催化            键形成。

（6）下图为DNA分子的某一片段，其中①②③分别表示某种酶的作用部位，则相应的酶依次是                                   (　　)

A.DNA连接酶、限制性内切酶、解旋酶

B.限制性内切酶、解旋酶、DNA连接酶

C.解旋酶、限制性内切酶、DNA连接酶

D.限制性内切酶、DNA连接酶、解旋酶

【生物——选修3：现代生物科技专题】

人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，且疫苗生产和抗体制备的流程之一如下图：

(1)过程①代表的过程是________，基因工程操作的核心步骤是      （填序号）。

(2)过程③构建出的表达载体必须要含有__________________（至少填两个）和目的基因等结构。

(3)生产药物时可用微生物做受体细胞，则④应采用________处理，使受体细胞处于________，从而将表达载体导入受体细胞；药物生产也可用乳腺生物反应器，那么④应采用________的方法，从而将表达载体导入受体细胞。

(4)过程⑦的实验技术名称是________，诱导该过程的化学试剂是________。

下图为生产干扰素转基因牛的培育过程示意图，据图回答：

（1）过程①属于基因工程基本操作程序中的第二步基因表达载体的构建，是基因工程的核心。那么这一基因表达载体的组成有目的基因、____________、_________、_____________、复制原点。在这一步骤中把目的基因和质粒结合起来，需要用到的工具是_____________，其作用的部位是____________。

（2）科学家在实际操作中，往往用双酶切目的基因后插入到该双酶切割开的Ti质粒以构成基因表达载体，用两种酶切的目的是_________________。

（3）过程②，采用最多也最有效的方法是_________________。

（4）图中所说的早期胚胎一般指_________________。

（1）卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可以从处死的雌鼠________中获取。

（2）图中的高血压相关基因作为__________，质粒作为_________,二者需用________切割后连接成重组载体，该过程与质粒上含有________（2分）有关。

（3）子代大鼠如果________            和__________      ，即可分别在分子水平和个体水平上说明高血压相关基因已成功表达，然后可用其建立高血压转基因动物模型。

（4）在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是___________、早期胚胎培养和胚胎移植。

（1）过程①需要的工具酶有                                    。

（2）在构建基因表达载体时，除了要在重组DNA中插入目的基因外，还需要有         

                                      。

（3）提取目的基因采用的限制性核酸内切酶的识别序列和切点是—↓GATC—。在目的基因的两侧各有1个酶的切点，请画出目的基因两侧被限制酶切割后形成黏性未端的过程示意图。

                                                                      。

（4）在番茄新品种的培育过程中，将目的基因导入受体细胞的方法叫做                 。

（5）从图中可见，mRNA1和mRNA2的结合直接导致了                  无法合成，最终使番茄获得了抗软化的性状。

（6）培养②、③为植物组织培养过程中的                               。

（7）上述转基因番茄会通过花粉将抗多聚半乳糖醛酸酶基因传播给其它植物而造成基因污染，原因是                                                   ，请你提出一个上述转基因工程的改良方案，以防止这样的污染发生。                                            。