_______________是在基因工程基础上，延伸出来的第二代基因工程，通过该项技术能够制造自然界并不存在的新蛋白质。

I.我国科研人员克隆了100多个重要基因，取得了抗虫棉、抗虫玉米、耐除草剂大豆等一批重大转基因成果。请回答下列问题：

（1）为避免Bt毒蛋白基因通过花粉传播进入其它植物，一般将Bt毒蛋白基因转入棉花细狍的__________（选择填入“细胞核”或“叶绿体”）。

（2）每一种Bt毒蛋白的杀虫范围有限，对现有的毒蛋白进行_______，使其具有更广杀虫范围，属于___________（生物工程）的范围。

（3）随着转基因成果的不断涌现，人们对转基因生物的安全性的关注与日俱增，在食物安全、生物安全和___________三个方面发生了激烈争论。

II.关注生态工程的建设：

（1）与传统的工程相比,生态工程是一类少消耗、__________、可持续的工程体系。

（2）“无废弃物农业”是我国古代传统农业的辉煌成就之一,也是生态工程最早和最生动的一种模式，该模式主要遵循生态工程的______________原理。我国西北一些地区年降雨量少，适宜种植灌木和草，却被硬性规定种植属于乔木的杨树，致使许多地方的杨树长成半死不活状，结果防护林成了残败的“灰色长城”。其失败的原因主要是违背了___________________原理。

（3）下面的结构示意图中，能体现系统学和工程学原理的是(　　)

T₄溶菌酶在温度较高时易失去活性。科学家对编码T₄溶菌酶的基因进行了改造，使其表达的T₄溶菌酶第三位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提高了T4溶菌酶的耐热性。请回答问题：

（1）上述操作涉及的技术属于________工程，该技术的基本途径：从预期的蛋白质功能出发→________→________→找到相应的脱氧核苷酸序列。

（2）在确定目的基因的碱基序列后，可通过________的方法获取目的基因，再利用________技术进行扩增。用这种方法获得的目的基因与从生物体内直接提取的目的基因在结构上的区别是________。

（3）在将目的基因导入受体细胞前，要构建基因表达载体。一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，还必须有________、________以及标记基因等。

T₄溶菌酶在温度较高时易失去活性。科学家对编码T₄溶菌酶的基因进行了改造，使其表达的T₄溶菌酶第三位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提高了T4溶菌酶的耐热性。请回答问题：

（1）上述操作涉及的技术属于________工程，该技术的基本途径：从预期的蛋白质功能出发→________→________→找到相应的脱氧核苷酸序列。

（2）在确定目的基因的碱基序列后，可通过________的方法获取目的基因，再利用________技术进行扩增。用这种方法获得的目的基因与从生物体内直接提取的目的基因在结构上的区别是________。

（3）在将目的基因导入受体细胞前，要构建基因表达载体。一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，还必须有________、________以及标记基因等。

请利用所学知识回答基因工程方面的有关问题：

（1）基因工程所用的生物学原理为_________________，其操作的核心步骤为_________________，在操作的过程中没有涉及碱基互补配对的步骤为_________________，获取目的基因的来源有_________________和_________________。

（2）利用PCR（聚合酶链式反应）技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。图中引物A、B为单链DNA片段，它是目的基因子链合成延伸的基础。

PCR过程除需要适宜的温度、模板DNA、引物，还需要_____________、_____________等条件才能扩增出大量DNA片段。

（3）将目的基因导入植物细胞时，采用最多的方法是_________________。目的基因进入受体细胞后的表达过程中，RNA聚合酶需与_________________识别和结合，从而驱动转录过程。最终目的基因是否成功表达，常用_____________方法进行检测，若出现杂交带，表明目的基因已形成蛋白质产品。

（4）蛋白质工程是在基因工程的基础上发展起来的，其基本流程为_________________、

________________、________________、找到对应的脱氧核苷酸序列。