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            • 1. 如图是科学家采用不同方法培育良种牛的过程,a~h为操作过程,请据图回答有关问题:

              (1)“试管牛”技术的操作流程是 ______ (填字母).
              (2)胚胎性别鉴定取 ______ (填①、②、‚或ƒ③)细胞做DNA分析,胚胎干细胞可从 ______ 填(①、②‚或③ƒ)获取.
              (3)f操作的名称是 ______ ,受体子宫内胚胎发育的过程中,细胞不断分裂,其分裂方式为 ______
              (4)图中用到的激素是 ______ ,其目的是获得更多的卵母细胞,经受精后可得到早期胚胎.用某染料鉴定胚胎细胞是否为活细胞时,发现活胚胎细胞不能被染色,其原因是活细胞膜 ______
              (5)过程h常用的方法是 ______ .为了能确定目的基因已经导入到受精卵,相应的载体需要有 ______ 以便于进行筛选检测.
              (6)若要获得遗传物质完全相同的两个新个体,可对发育到 ______ 阶段的早期胚胎进行处理,再植入到受体内.在对囊胚阶段的胚胎进行分割时,应注意 ______
            • 2. 研究人员利用生物工程技术,探究猪bmp15基因在不同组织细胞中的特异性表达.该工程技术基本流程如图(EGFP基因控制合成增强型绿色荧光蛋白;过程②表示表达载体2成功导入各组织细胞).请回答:

              (1)过程①中,需利用 ______ 限制酶处理表达载体1.为了大量获得猪bmp基因,可用 ______ 技术,该技术需要用到的酶是 ______
              (2)目前对动物细胞培养所需的营养条件还没完全研究清楚,培养受体细胞时往往需要添加 ______ 等天然成分.同时还需在培养液中添加一定量的 ______ ,以防污染.
              (3)在实验结果的基础上,提取上述猪肌肉细胞的 ______ (mRNA/DNA),利用标记的EGFP基因作探针,进行分子杂交,可进一步探究猪bmp基因特异性表达的原因.
              (4)据实验结果推测,猪bmp15基因在 ______ 细胞特异性表达.
            • 3. 某一质粒载体如图所示,外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因,Tetr表示四环素抗性基因).有人将此质粒载体用BamHI酶切后,与用BamHI酶切获得的目的基因混合,加入DNA连接酶进行连接反应,用得到的混合物直接转化大肠杆菌,结果大肠杆菌有的未被转化,有的被转化.被转化的大肠杆菌有三种,分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌.回答下列问题:
              (1)限制性核酸内切酶作为基因工程的工具,其作用特点是 ______
              (2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选,在上述四种大肠杆菌细胞中,未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的,其原因是 ______ ;并且 ______ ______ 的细胞也是不能区分的,其原因是 ______ .在上述筛选的基础上,若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落,还需使用含有 ______ 的固体培养基.
              (3)基因工程中,某些噬菌体经改造后可以作为载体,其DNA复制所需的模板来自于 ______
            • 4. 绞股蓝细胞中含有抗烟草花叶病毒(TMV)基因,可以合成一种抗TMV蛋白,叶片对TMV具有抗感染性.烟草是重要的经济作物,由于TMV的感染会导致大幅度减产.研究人员利用转基因技术培育出了抗TMV的烟草,主要流程如如图所示.

              (1)科学家首先从绞股蓝细胞中提取抗TMV基因转录的RNA,然后合成目的基因.图中①过程表示 ______ ,采用 ______ 技术可得到大量的TMV基因,这个基因的表达需要 ______ ______  等不可缺少的调控组件.
              (2)由图分析,在过程③构建的重组Ti质粒上应该含有的标记基因是 ______ 基因,重组Ti质粒导入烟草体细胞的方法是 ______
              (3)过程⑥可采取 ______ 的方法检测植株是否合成了抗TMV蛋白.在个体水平的鉴定过程中,可通过 ______ 的方法来确定植株是否具有抗性.
            • 5. 科学家从某无限增殖的细胞中分离出无限增殖调控基因(prG),该基因能激发细胞分裂,这为单克隆抗体的制备提供了更为广阔的前景.请回答下列问题.
              (1)利用 ______ 技术制备单克隆抗体,常用聚乙二醇、 ______ 、电激等诱导因素诱导细胞融合.再经多次筛选和细胞培养获得足够数量的能分泌所需抗体的 ______ 细胞.
              (2)有人提出用核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体,请完成设计方案:①取 ______ 细胞的细胞核,移植到去核的能够 ______ 的细胞中,构成重组细胞(假定移植后细胞核中基因的表达状态不受影响).
              (3)也有人提出,可以直接通过基因工程导入该调控基因(prG)来制备单克隆抗体,其思路如图所示.

              ①图中I表示 ______ ,把重组质粒导入动物细胞的方法是 ______
              ②Ⅲ所指细胞具有的特点是 ______
            • 6. 如图为利用生物技术获得生物新品种的过程.据图回答:

              (1)A→B必需的工具酶有 ______
              (2)在基因工程中,B表示 ______
              (3)B→C为转基因绵羊的培育过程,其中④用到生物技术主要有 ______
              (4)若使用棉花的体细胞为受体细胞,⑤表示的生物技术是 ______ .请简述利用棉花受体细胞培育成转基因抗虫棉幼苗的过程: ______
              (5)要确定目的基因(抗虫基因)是否导入受体细胞,检测的方法是 ______ .目的基因(抗虫基因)是否能稳定遗传并表达,在个体水平上通过 ______ 进行检测和鉴定.
              (6)转基因工程改良动植物的品种,最突出的优点是 ______
            • 7. 图1表示含有目的基因D的DNA片段及其中部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列.现有MpsⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶.它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG.现要培育含目的基因D的大肠杆菌,请回答下列问题:

              (1)为了提高试验成功率,需要通过PCR扩增目的基因,以获得目的基因的大量拷贝,该过程除需目的基因和dNTP (包括dATP、dGTP,dCTP、dTTP)之外还需提供 ______ ______
              (2)图2中,启动子的作用是 ______
              (3)分别用4种限制酶切割图1中的DNA片段,能形成黏性末端的是 ______
              (4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是 ______ .为了提高重组质粒导入大肠杆菌的成功率,需将大肠杆菌用 ______ 进行处理.
              (5)为了筛选出成功导入含目的基因D的重组质粒的大肠杆菌,首先将大肠杆菌图3所示的培养基上培养,得到如图3的菌落.再将灭菌绒布按到培养基上,使绒布面沾上菌落,然后将绒布按到图4所示的培养基上培养,得到如图4的结果(空圈表示与图3对照无菌落的位置).请推测:图3和图4培养基里含的抗生素分别是 ______ ______ .图4中生长的大肠杆菌中是否有目的基因D? ______
            • 8. 回答下列有关遗传信息传递和表达的问题.
              如图表示利用致病病毒M的表面蛋白基因和无害病毒N,通过基因工程制作重组M病毒疫苗的部分过程.其中①~⑤表示操作流程,a~h表示分子或结构.据图回答问题.

              (1)基因工程除了微生物基因工程外,还有 ______ .在如图所示过程中,获取目的基因的步骤是流程 ______ (请用图中编号回答);在流程③中须使用 ______ 酶.
              (2)在如图所示的整个过程中,用作运载体的DNA来自分子 ______ (请用图中字母回答).
              (3)下列关于质粒运载体的说法正确的是 ______ (多选).
              A.使用质粒运载体是为了避免目的基因被分解
              B.质粒运载体只能在与目的基因重组后进入细胞
              C.质粒运载体可能是从细菌或者病毒的DNA改造的
              D.质粒运载体的复制和表达也遵循中心法则
              E.质粒运载体只有把目的基因整合到受体细胞的DNA中才能表达
              F.没有限制酶就无法使用质粒运载体.
            • 9. 绞股蓝叶片对TMV (烟草花叶病毒)具有抗感染能力,原因是其细胞中含有抗TMV 基因,可以合成一种抗TMV蛋白.烟草是有重要经济价值的双子叶植物,由于TMV的感染会导致大幅度减产.研究人员利用转基因技术培育出了抗TMV的烟草,主要流程如图所示.

              (1)理论上,基因组文库含有生物的 ______ 基因;而cDNA 文库中含有生物的 ______ 基因.
              (2)科学家从绞股蓝细胞中提取抗TMV 基因转录的RNA,然后合成目的基因.图中①过程表示 ______ ,获得的目的基因必须在两侧添加 ______ ______
              (3)④过程将重组Ti 质粒导入烟草体细胞的常用方法是 ______
              (4)由图分析,在过程③构建的重组Ti 质粒上应该含有的标记基因是 ______ 基因.
              (5)在过程⑤培养基中除含有卡那霉素及植物必需的各种营养成分外,还必须添加 ______ 以保证受体细胞能培养成再生植株.
              (6)过程⑥可采取 ______ 的方法,检测植株是否合成了抗TMV 蛋白.在个体水平的鉴定过程中,可通过 ______ 的方法来确定植株是否具有抗性.
            • 10. 基因工程发展迅猛,进入二十一世纪的第二个十年,新的技术不断提出、发展,如锌指核酸酶、TALEN技术、CRISPR/Cas9技术等.2015年末,英国医生用基于TALEN技术的基因疗法,成功治愈了小女孩莱拉(Layla)的白血病;2016年3月11日,科学家宣布用CRISPR方法根除了已整合到人体细胞染色体上的HIV病毒.回答下列问题:
              (1)基因工程实现了 ______ 改造生物性状;基因工程的核心步骤是 ______ ;获得目的基因的方法有: ______ 、PCR法和 ______ .进行PCR时,加入反应体系的 ______ 决定了目的DNA被扩增的片段.
              (2)现代基因工程有关人类疾病、发育的研究,主要实验材料是诱导多能干细胞(iPS cells).实验室大量培养iPS细胞所需的条件有: ______ 、营养、温度和PH、 ______ .iPS细胞是用体细胞经过诱导成为具有分裂、分化能力,类似胚胎干细胞的一类细胞.相比于直接使用胚胎干细胞,iPS细胞的使用避免了 ______ 等问题.
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