(1) 基因工程中运用的基因载体必需的元件有启动子、终止子、____、____等。 

(2) 过程②利用了“假病毒颗粒”具有____和能将DNA整合到受体细胞染色体DNA上特点。与正常病毒相比较,这种“假病毒颗粒”的主要特点是________

(3) 科学家利用ES细胞培育出转基因动物依据的主要原理是_________________,在利用合成培养基培养ES细胞时,还要加入______等天然成分。 

(4) 经鉴定,某嵌合小鼠产生的配子中有1/2带有外源基因,请写出利用该嵌合小鼠培育纯合转基因小鼠的思路:_________。 

我国曾经发生过因“非典型性肺炎”而死亡的病例，经研究发现，该病是由SARS病毒(一种RNA病毒)感染所引起的疾病。SARS病毒表面的S蛋白是主要的病毒抗原，在SARS病人康复后的血清中有抗S蛋白的特异性抗体。某研究小组为了研制预防SARS病毒的疫苗，开展了前期研究工作，其简要的操作流程如图：

(1)步骤②构建重组表达载体A和重组表达载体B必须使用限制性核酸内切酶和__________酶，后者的作用是将_______________和_______连接起来。

(2)步骤③常用___________处理大肠杆菌，使其成为________细胞，有利于吸收重组DNA分子。

(3)为了检验步骤④所表达的S蛋白是否与病毒S蛋白有相同的免疫反应特性，可用___________________与_______________进行抗原—抗体特异性反应实验，从而得出结论。

(4)步骤④和⑥的结果相比，原核细胞表达的S蛋白与真核细胞表达的S蛋白的氨基酸序列________(填“相同”或“不同”)，根本原因是________。

科研人员从一些荒漠植物中成功克隆抗旱功能基因培育出抗旱耐盐碱和耐贫瘠能力明显的转基因紫花苜蓿新品系，它的研究成功对改良与利用大面积盐荒地、改善生态环境以及促进农牧业可持续发展具有现实意义。结合所学知识回答下列问题：

（1） 题目中的“克隆”最常用的是指_________技术，其原理为______________________。

（2）基因表达载体构建时目的基因的两端必须有______________________。

（3）紫花苜蓿为双子叶植物，常用的导入目的基因的方法是_______________。

（4）采用__________技术检测转基因植物的__________上是否插入了目的基因，同时还要采用__________技术检测目的基因是否在转基因植物细胞中表达。若进行个体水平的检测，需将该植株栽培于_________________________环境中，以观察其生长状况。

科学家利用PCR技术分别从抗根结线虫的番茄和辣椒中克隆抗性基因SIMi及CaMi，并利用遗传转化方法将它们转入对根结线虫敏感的番茄中，获得抗根结线虫的番茄转基因株系应用于植物抗根结线虫育种。请回答相关问题：

(1)PCR技术是扩增目的基因的常用手段。扩增过程中，目的基因DNA________后解旋为单链，__________与单链相应互补序列结合，在酶的作用下进行延伸。

(2)________________是实施基因工程的核心。

(3)将目的基因转入对根结线虫敏感的番茄中，最常用的方法是____________。通过转化，目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内_____________________。

(4)为了检测对根结线虫敏感的番茄中是否插入目的基因，可采用______________技术。检测目的基因在分子层面是否表达则可以用___________________的方法。

(5)为了比较两种抗性基因(SIMi和CaMi)在转基因后的抗根结线虫的效果，可分别取等量的两种成功表达的转基因番茄植株____________，比较其抗虫效果。

Ⅰ.下图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图。复制原点是质粒能正常复制的必需组成。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因。EcoRⅠ、PvuⅠ为相应的限制酶切割位点，括号内的数据是该切点与复制原点  的距离，单位为kb（1kb = 1000个碱基对长度）。请回答下列问题：

（2）该基因来自__________________（填“基因组文库”或“cDNA文库”）。

（3）翻译时与密码子发生碱基互补配对的是__________上的反密码子。

2017年8月2日，中华人民共和国农业部官网发布《2017年农业转基因生物安全证书（进口）批准清单》包含耐除草剂大豆MON87705、耐除草剂油菜T45、耐除草剂玉米T25等10多个转基因生物系列，回答下列问题：

（1）耐除草剂玉米T25植株的培育用到了基因工程技术，该过程以耐除草剂基因作为_________(填“目的基因”或“标记基因”）。

（2）如果将耐除草剂基因插入到Ti质粒的________上，通过农杆菌的转化作用，可使该基因转移进入玉米细胞，并将其插入到玉米细胞中染色体的DNA上，这种将耐除草剂基因导入玉米细胞的方法叫做_____。

（3）基因表达载体构建时，需用到__________酶将耐除草剂基因和Ti质粒结合在一起，在基因表达载体中位于耐除草剂基因的首端和尾端分别具有_________和_________(填结构名称)，以启动和停止基因的转录。

（4）在耐除草剂玉米T25植株的培育过程中__________(填“能”或“不能”）用动物病毒作为耐除草剂基因导入玉米细胞的载体，原因是__________________。

预防乙肝最有效的途径是接种疫苗。将乙肝表面抗原基因转移到植物细胞内可生产乙肝疫苗。回答下列问题。

    (1)欲在短时间内大量扩增乙肝表面抗原基因，可利用___________________(填写中文名称)技术，其原理是______________。利用该技术扩增乙肝表面抗原基因的前提是______________。

    (2)将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，此外采用________________法十分简便经济。用抗原一抗体杂交技术检测植物细胞是否成功合成乙肝表面抗原蛋白。若有__________出现，表明目的基因已控制合成蛋白质产品。

    (3)将乙肝表面抗原基因导入植物细胞后，采用______________技术获得愈伤组织，该技术需在_____________条件下进行。

    (4)乙肝疫苗在2～8℃条件下保存，其不宜在常温下保存最可能的原因是_____________________。

(1) 苏云金芽孢杆菌产生的毒蛋白,能有效杀死害虫。已知该基因的全部序列,科研人员可通过____法和PCR技术获得大量毒蛋白基因片段。据图分析,将毒蛋白基因和质粒连接获得重组质粒1的过程需要用到的工具酶是____________。 

​ABCD

(3) 将重组质粒2与感受态的白僵菌菌液混合进行转化,重组质粒2在白僵菌细胞内被修复。一段时间后用含有____的平板培养基进行筛选,获得含有Bar基因的重组白僵菌。 

(4) 提取上述重组白僵菌全部mRNA,加入____酶,获得cDNA,再加入毒蛋白基因引物进行PCR反应,根据是否有相应产物生成判断毒蛋白基因在白僵菌体内是否完成____。 

(5) 科研人员将重组白僵菌喷涂于植物叶片上,以此饲喂饥饿处理的害虫,记录单位时间内的______,以判断重组白僵菌的杀虫效果。