（1）PCR技术利用了_________原理解决了打开DNA双链的问题，从一种细菌中分离到_______，解决了DNA聚合酶失活的新问题。

（2）利用PCR技术从基因文库中提取目的基因时，首先要根据目的基因的核苷酸序列设计并合成出2种引物。在第_________轮开始出现目的基因片段。

（3）试管动物技术正广泛应用于畜牧业生产，此技术中从母牛体内获得的卵母细胞需要到____________________(时期)才能与精子结合。在体外培养受精卵时，需要满足以下条件：_______________、营养、温度和pH以及气体环境。

（4）将外源基因导入小鼠受精卵后，外源基因会随机插入到小鼠受精卵DNA中。这种受精卵有的可发育成转基因小鼠，有的却死亡。请分析:因外源基因的插入导致受精卵死亡的最可能原因_________________。

荒漠齿肋赤藓具有超强耐旱能力的原因是其含有抗旱基因ScALDH21。科研人员提出两种提高棉花抗旱能力的途径，回答下列相关问题:

（1）第一条途径：利用_________酶从荒漠齿肋赤藓中提取目的基因，即____________。科研人员将目的基因整合到Ti质粒的_________上，常利用________法导入棉花的叶肉细胞。最后，将含目的基因的棉花叶肉细胞培育成转基因植株。

（2）第二条途径：可通过__________技术获得荒漠齿肋赤藓与棉花的杂种植物。在该方法中，荒漠齿肋赤藓细胞与棉花细胞融合前需用___________酶去除细胞壁，常用诱导两原生质体融合成杂种细胞的化学试剂为___________。该技术利用的主要原理有____________________________。

欲利用基因工程技术将人胰岛素基因转入到小鼠基因组中，以期利用小鼠生产出人胰岛素，请回答：

(1)若用逆转录的方法获得人胰岛素基因，则需要从人体相应的______________细胞中提取mRNA，获得的人胰岛素基因经过相应处理后，再利用显微注射技术将其注入到受体细胞中，下列最不适合作为受体细胞的是_______（A. 受精卵  B. 胚胎干细胞  C. 第一次卵裂形成的细胞  D. 第三次卵裂形成的细胞）

(2)为获得更多的受体细胞，可先对成年雌鼠注射激素进行________处理，将获得的卵母细胞培养成熟，与经__________处理的精子结合形成受精卵后再进行后期操作。

(3)导入胰岛素基因的受体细胞还需借助____________________、__________________等技术才能成为转基因小鼠。

（1）若要获得抗病基因，不能用限制酶SmaⅠ对图中对应的位点进行切割，因为若在SmaⅠ位点进行切割会                                                。要获得含抗病基因的重组质粒可用            和              限制酶切割质粒。它们能使特定部位的两个脱氧核苷酸之间的____________________ 断开。

（2）卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长。欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，重组质粒中应同时含有               基因，作为标记基因。

（3）将重组DNA分子导入香蕉受体细胞的常用方法是                法。

（4）为了进一步确定抗病基因是否插入香蕉细胞染色体，可采用的检测方法是                   。

（5）图中导入抗病基因的香蕉组织块一般需要通过________________________的方法，可培育成能表现新性状的植株，该方法依据的原理是：_______________________________。

图1 表示含有目的基因D 的DNA 片段长度(bp 即碱基对)和部分碱基序列,图2 表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp、BamHⅠ、Mbo、Sma 4 种限制性核酸内切酶,它们识别的碱基序列和酶切位点分别为

C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题:

(1)图1 的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由 脱氧核糖--_________--脱氧核糖 连接。

(2)若用限制酶Sma完全切割图1 中DNA 片段,产生的末端是 ______ _ 末端,其产物长度为__________________。

(3)若图1 中虚线方框内的碱基对被T-A 碱基对替换,那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图1 及其对应的DNA 片段,用限制酶Sma 完全切割,产物中共有_____种不同长度的DNA片段。

(4)若将图2中质粒和目的基因D 通过同种限制酶处理后进行连接,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是 ________________。在导入重组质粒后,为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加_________     的培养基进行培养。经检测,部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D 不能正确表达,其最可能的原因是 _____________________________________________。

请回答胚胎工程和基因工程方面的问题：

（1）应用胚胎工程技术可以培育出“试管牛”。试管牛的培育需经过体外受精、__________、_____________以及在母体中发育和产出等过程。

（2）通常奶牛每次排出一枚卵母细胞，采用激素处理可使其一次排出多枚卵母细胞，常使用的激素是__________。

（3）利用基因工程可以获得转基因牛，从而改良奶牛的某些性状。基因工程的四个基本操作步骤是_____    _____、基因表达载体的构建、____   ______和____   ______。若要获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素，则所构建的基因表达载体必须包括：某种牛乳腺分泌蛋白基因及其启动子、__________、__________、__________和复制原点等。为获得能大量产生人干扰素的转基因牛，该基因表达载体应导入的受体细胞是__________。

（4）某生态农业把鱼塘、农田、果园和牛羊养殖场有机地组合在一起，优化了系统结构，遵循系统学与工程学原理中的____________的原理。

​（7）从分子水平检测目的基因存在与鉴定目的基因表达的方法依次为_______________、_______________。

艾滋病病毒(HIV)外壳的包膜上有多种蛋白质，其中包膜糖蛋白(env)基因编码gpl60蛋白，进一步加工成gpl20蛋白，具有较强的抗原性。制备抗HIVgpl20的单克隆抗体，为艾滋病的治疗带来希望。清回答下列问题：

  (1)若利用动物细胞工程制备抗HIVgpl20的单克隆抗体，涉及到的技术手段主要有动物细胞培养技术和________技术。

  (2)细胞融合常用的生物诱导剂是__________。融合后需要用特定的选择性培养基筛选，只有融合的__________才能生长，这种细胞的特点是______________________________。

  (3)若要大量制备该单克隆抗体，可将筛选出来的细胞进行体外培养，在培养液中通入一定浓度的CO₂，主要作用是_______________________________________。

  (4)科研人员设想用基因工程制备能表达抗HIVpl20抗体的重组细胞，获得目的基因可利用PCR技术扩增，需要在反应体系中添加的有机物有__________、模板DNA、Taq酶和4种脱氧核苷酸。利用________法将目的基因导入骨髓瘤细胞。基因工程的核心是______________________。

  (5)现代生物工程技术不仅推动了免疫学的发展，对畜牧业的发展也起到了积极的推动作用。用细胞核移植技术繁育良种牛的过程需要进行胚胎移植，移植前需要对受体牛进行________技术处理，受体对外来胚胎基本不发生____________，为胚胎在受体内的存活提供了可能。