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            • 1. 埃博拉病毒(EBO)呈纤维状,EBO衣壳外有包膜,包膜上有5种蛋白棘突(VP系列蛋白和GP蛋白),其中GP蛋白最为关键,能被宿主细胞强烈识别.请回答下列问题:
              (1)基因疫苗指的是DNA疫苗,要获得编码GP蛋白抗原的基因疫苗,首先要提取出病原体的RNA,并将RNA______要大量获得表达特异抗原的基因,可采用PCR技术进行扩增.
              (2)以GP蛋白作为疫苗比基因疫苗更安全,其原因是GP蛋白自身没有感染能力,但保留有______.为了从牛分泌的乳汁中生产GP蛋白,在基因导入牛受体细胞前,基因的首段必须含有使其仅能在牛的乳腺细胞中特异性表达的______,才能驱动转录过程.这种通过分泌乳汁来生产所需要的药品的转基因动物称为______.
              (3)为了提高胚胎的利用率,可采用胚胎分割技术.进行胚胎分割时,应选择发育良好、形态正常的囊胚或______进行操作.在对囊胚阶段的胚胎进行分割时,要注意将______.转基因牛是否培育成功,可以通过______技术从分子水平进行检测.
              (4)科研人员利用经EBO免疫后小鼠的______与鼠的瘤细胞进行融合成杂交瘤细胞,培养后可以获得纯净的单一品种抗体,其特点是______,可以用此抗体与药物制成“生物导弹”,抗击EBO.
            • 2.

              (1)PCR技术利用了_________原理解决了打开DNA双链的问题,从一种细菌中分离到_______,解决了DNA聚合酶失活的新问题。

              (2)利用PCR技术从基因文库中提取目的基因时,首先要根据目的基因的核苷酸序列设计并合成出2种引物。在第_________轮开始出现目的基因片段。

              (3)试管动物技术正广泛应用于畜牧业生产,此技术中从母牛体内获得的卵母细胞需要到____________________(时期)才能与精子结合。在体外培养受精卵时,需要满足以下条件:_______________、营养、温度和pH以及气体环境。

              (4)将外源基因导入小鼠受精卵后,外源基因会随机插入到小鼠受精卵DNA中。这种受精卵有的可发育成转基因小鼠,有的却死亡。请分析:因外源基因的插入导致受精卵死亡的最可能原因_________________。

            • 3.

              荒漠齿肋赤藓具有超强耐旱能力的原因是其含有抗旱基因ScALDH21。科研人员提出两种提高棉花抗旱能力的途径,回答下列相关问题:

              (1)第一条途径:利用_________酶从荒漠齿肋赤藓中提取目的基因,即____________。科研人员将目的基因整合到Ti质粒的_________上,常利用________法导入棉花的叶肉细胞。最后,将含目的基因的棉花叶肉细胞培育成转基因植株。

              (2)第二条途径:可通过__________技术获得荒漠齿肋赤藓与棉花的杂种植物。在该方法中,荒漠齿肋赤藓细胞与棉花细胞融合前需用___________酶去除细胞壁,常用诱导两原生质体融合成杂种细胞的化学试剂为___________。该技术利用的主要原理有____________________________。

            • 4.

              欲利用基因工程技术将人胰岛素基因转入到小鼠基因组中,以期利用小鼠生产出人胰岛素,请回答:

              (1)若用逆转录的方法获得人胰岛素基因,则需要从人体相应的______________细胞中提取mRNA,获得的人胰岛素基因经过相应处理后,再利用显微注射技术将其注入到受体细胞中,下列最不适合作为受体细胞的是_______(A. 受精卵  B. 胚胎干细胞  C. 第一次卵裂形成的细胞  D. 第三次卵裂形成的细胞)

              (2)为获得更多的受体细胞,可先对成年雌鼠注射激素进行________处理,将获得的卵母细胞培养成熟,与经__________处理的精子结合形成受精卵后再进行后期操作。

              (3)导入胰岛素基因的受体细胞还需借助____________________、__________________等技术才能成为转基因小鼠。

            • 5. 回答下列有关遗传信息传递与表达的问题.
              pIJ702是一种常用质粒(如图),其中tsr为硫链丝菌素(一种抗生素)抗性基因,mel是黑色素合成基因,其表达能使白色的链霉菌菌落变成黑色菌落;而限制酶ClaⅠ、BglⅡ、PstⅠ、SacⅠ、SphⅠ在pIJ702上分别只有一处识别序列.
              (1)质粒DNA分子中的两条链靠______键维系成双链结构.
              (2)以SacⅠ和SphⅠ切取的目的基因置换pIJ702上0.4kb(1kb=1000对碱基)的SacⅠ/SphⅠ片段,构成重组质粒pZHZ8.上述两种质粒的限制酶酶切片段长度列在表1中.由此判断目的基因内部是否含有BglⅡ切割位点,并说明判断依据______.
              (3)已知pIJ702上含mel基因的ClaⅠ/PstⅠ区域长度为2.5kb,若用ClaⅠ和PstⅠ联合酶切pZHZ8,则参照表1数据可断定酶切产物中最小片段的长度为______kb. (4)上述目的基因来源于原核生物,其蛋白质编码序列(即编码从起始密码子到终止密码子之间的序列)经测定为1256对碱基,试判断对这段序列的测定是否存在错误:______,并说明依据______.
            • 6. (9分)转基因抗病香蕉的培育过程如下图所示。图中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等为限制酶,质粒和抗病基因上的箭头表示限制酶的切割位点。下表示四种限制酶的识别序列及酶切位点。

              (1)若要获得抗病基因,不能用限制酶SmaⅠ对图中对应的位点进行切割,因为若在SmaⅠ位点进行切割会                                                。要获得含抗病基因的重组质粒可用                          限制酶切割质粒。它们能使特定部位的两个脱氧核苷酸之间的____________________ 断开。

              (2)卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长。欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞,重组质粒中应同时含有               基因,作为标记基因。

              (3)将重组DNA分子导入香蕉受体细胞的常用方法是                法。

              (4)为了进一步确定抗病基因是否插入香蕉细胞染色体,可采用的检测方法是                  

              (5)图中导入抗病基因的香蕉组织块一般需要通过________________________的方法,可培育成能表现新性状的植株,该方法依据的原理是:_______________________________。

            • 7.

              图1 表示含有目的基因D 的DNA 片段长度(bp 即碱基对)和部分碱基序列,图2 表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp、BamHⅠ、Mbo、Sma 4 种限制性核酸内切酶,它们识别的碱基序列和酶切位点分别为

              C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题:

              (1)图1 的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由 脱氧核糖--_________--脱氧核糖 连接。

              (2)若用限制酶Sma完全切割图1 中DNA 片段,产生的末端是 ______ _ 末端,其产物长度为__________________。

              (3)若图1 中虚线方框内的碱基对被T-A 碱基对替换,那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图1 及其对应的DNA 片段,用限制酶Sma 完全切割,产物中共有_____种不同长度的DNA片段。

              (4)若将图2中质粒和目的基因D 通过同种限制酶处理后进行连接,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是 ________________。在导入重组质粒后,为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌,一般需要用添加_________     的培养基进行培养。经检测,部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D 不能正确表达,其最可能的原因是 _____________________________________________。

            • 8.

              请回答胚胎工程和基因工程方面的问题:

              (1)应用胚胎工程技术可以培育出“试管牛”。试管牛的培育需经过体外受精、__________、_____________以及在母体中发育和产出等过程。

              (2)通常奶牛每次排出一枚卵母细胞,采用激素处理可使其一次排出多枚卵母细胞,常使用的激素是__________。

              (3)利用基因工程可以获得转基因牛,从而改良奶牛的某些性状。基因工程的四个基本操作步骤是_____    _____、基因表达载体的构建、____   ______和____   ______。若要获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素,则所构建的基因表达载体必须包括:某种牛乳腺分泌蛋白基因及其启动子、__________、__________、__________和复制原点等。为获得能大量产生人干扰素的转基因牛,该基因表达载体应导入的受体细胞是__________。

            • 9. 现代生物科学技术应用广泛,请回答下列问题:
              (1)基因工程的核心步骤是__________________,目的基因能在受体细胞中表达,说明同生物__________________。
              (2)植物组织培养时,常用的激素是_______________和______________。
              (3)利用体细胞核移植技术培育克隆鼠时,所用的去核卵母细胞要培养至______期。所用供体细胞一般选择10代以内的细胞,原因是这样的细胞_____________。

              (4)某生态农业把鱼塘、农田、果园和牛羊养殖场有机地组合在一起,优化了系统结构,遵循系统学与工程学原理中的____________的原理。

              埃及伊蚊是登革热等病毒的重要传播媒介。科学家培育出转基因的雄性埃及伊蚊(不叮咬人),其可与野生雌性埃及伊蚊(叮咬人)生育后代,但它们的后代在幼虫阶段就会死去。回答下列问题:
              (5)增育转基因蚊子需要的目的基因比较小且核苷酸序列已知,可通过____________获取,该方法获得的目的基因不含___________与___________。
              (6)将目的基因导入受体蚊子细胞中的方法为____________。

              (7)从分子水平检测目的基因存在与鉴定目的基因表达的方法依次为_______________、_______________。

            • 10.

              艾滋病病毒(HIV)外壳的包膜上有多种蛋白质,其中包膜糖蛋白(env)基因编码gpl60蛋白,进一步加工成gpl20蛋白,具有较强的抗原性。制备抗HIVgpl20的单克隆抗体,为艾滋病的治疗带来希望。清回答下列问题:

                (1)若利用动物细胞工程制备抗HIVgpl20的单克隆抗体,涉及到的技术手段主要有动物细胞培养技术和________技术。

                (2)细胞融合常用的生物诱导剂是__________。融合后需要用特定的选择性培养基筛选,只有融合的__________才能生长,这种细胞的特点是______________________________。

                (3)若要大量制备该单克隆抗体,可将筛选出来的细胞进行体外培养,在培养液中通入一定浓度的CO2,主要作用是_______________________________________。

                (4)科研人员设想用基因工程制备能表达抗HIVpl20抗体的重组细胞,获得目的基因可利用PCR技术扩增,需要在反应体系中添加的有机物有__________、模板DNA、Taq酶和4种脱氧核苷酸。利用________法将目的基因导入骨髓瘤细胞。基因工程的核心是______________________。

                (5)现代生物工程技术不仅推动了免疫学的发展,对畜牧业的发展也起到了积极的推动作用。用细胞核移植技术繁育良种牛的过程需要进行胚胎移植,移植前需要对受体牛进行________技术处理,受体对外来胚胎基本不发生____________,为胚胎在受体内的存活提供了可能。

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