基因工程制药是制药行业的一支新军,不仅具有独特的优势,发展速度也很快,下图是应用基因工程构建疱疹病毒亚单位疫苗的方法,请根据图示回答下列问题:

(1) 提取单纯疱疹病毒DNA后用____酶切取____基因作为目的基因,获取目的基因后,要用______对其进行扩增。 

(2) 首先,要已知目的基因的________,以便人工合成引物。将过量的引物与目的基因混合,加热到____℃,使双链DNA解旋成单链,之后冷却到5560 ℃,引物与DNA单链结合,下一步,加入____和4种脱氧核苷酸,升高温度至7075 ℃后,完成互补链的合成,如此重复循环多次,直到产生足够供实验用的目的基因。 

(3) 提取并剪切牛痘DNA,使其与目的基因连接成重组DNA后,在____中培养一段时间后,分离出无害的病毒(疫苗),它含有与______相同的外壳。 

(4) 将分离出的疫苗注射到人体内,激活人体的____免疫,产生抗体和记忆细胞。 

  (1)核移植的受体细胞一般选用____________________________________细胞。进行相关显微操作时，一般用微型吸管一并吸出细胞核和__________。

  (2)细胞在体外培养时，除培养液提供必需的营养条件、适宜的温度和pH、气体环境外，还需要有无菌、无毒环境，为保证无菌、无毒环境，在培养液中通常要加入__________。此外，还应定期__________。以便清除代谢废物。

  (3)现有一段人工合成的正常胰岛素基因的脱氧核苷酸序列，可利用PCR技术扩增正常胰岛素基因，该技术的原理是______________。将正常胰岛素基因导入胚胎干细胞通常采用________法。

  (4)“定向诱导”的本质是_____________________________________________________。

图1

图2

(1)图1基因表达载体中没有标注出来的基本结构是　　　　。

(2)图1中启动子是　　　　酶识别和结合的部位,有了它才能启动目的基因的表达;氨苄青霉素抗性基因的作用是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。

(3)构建基因表达载体时必需的工具酶有　　　　　　　　　　　　　　。 

(4)β-半乳糖苷酶与胰岛素A链或B链融合表达,可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部,其意义在于　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 

(5)溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键,用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的A链或B链,且β-半乳糖苷酶被切成多个肽段,这是因为　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 

(6)根据图2中胰岛素的结构,请推测每个胰岛素分子中所含游离氨基的数量。你的推测结果是　　　　,理由是　　　　　　　　　　　　　　。 

Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：

(1)步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的________。

(2)步骤②中，重组胚胎培养到________期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。

(3)步骤③中，需要构建含有Rag₂基因的表达载体。可以根据Rag₂基因的_______设计引物，利用PCR技术扩增Rag₂基因片段。用Hind Ⅲ和Pst Ⅰ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有___________酶的酶切位点。

(4)为检测Rag₂基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的________，用抗Rag₂蛋白的抗体进行杂交实验。

下列有关基因工程和蛋白质工程步骤的叙述不正确的是(　　)

埃博拉病毒（EBOV）是一种能引起人类和灵长类动物发生埃博拉出血热（EBHF）的烈性病毒，利用相应的生物学技术制备出抗EBOV的单克隆抗体，可快速检测EBOV。请回答下列问题：

（1）方法一：给小鼠注射纯化的EBOV蛋白，一段时间后，从小鼠的________中获取浆细胞，将获得的浆细胞与小鼠的________细胞融合，再经过至少________次筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞。

（2）方法二：科学家从细胞中分离出无限增殖基因（prG），可将prG基因导入能产生抗EBOV抗体的小鼠浆细胞中，导入prG基因的浆细胞具有________的特点。

（3）以上两种方法获得的杂交瘤细胞或带有prG基因的浆细胞，可在________的环境、营养、适宜的________和一定的气体环境等条件下进行体外培养，以便源源不断的产生抗EBOV的单克隆抗体。

（4）方法二中，若用PCR扩增方法获取目的基因，则需要用到________酶，该方法能够成功获取目的基因的前提是________，以便合成引物。

用限制酶EcoRⅠ、KpnⅠ和二者的混合物分别降解一个1 000 bp(1 bp即1个碱基对)的DNA分子,对降解产物分别进行凝胶电泳,在电场的作用下,降解产物分开,凝胶电泳结果如图所示。该DNA分子的酶切图谱(单位:bp)正确的是( )

控制哺乳动物的性别对于畜牧生产有着十分重要的意义。目前，分离精子技术是有效的性别控制方法。例如：牛的X精子的DNA含量比Y精子的高出4%左右，利用这一差异人们借助特殊仪器将它们分离开来，再通过胚胎工程技术就可培育出所需性别的试管牛（如下图所示）。 根据以上信息回答下列相关问题：

（1）图中过程①通常采用体外受精技术。在这个过程中获能的精子与卵母相遇时，首先快速分裂完成减数第二次分裂，当观察到卵细胞周围有_______时，标志着受精；防止多精入卵的生理反应有_______________________________________________。

（2）胚胎移植时，受体应处于适合的生理状况，此时可利用激素对受体进行___处理；此外，受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生___反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能。

（3）为了确保得到所需性别的试管牛，往往需要对移植前的胚胎进行性别鉴定，请举出一种对早期胚胎进行性别鉴定的方法（只需写出名称或简要原理）：____________________________。

（4）人们利用试管动物技术成功培育了转基因动物，在基因工程操作的基本程序中，基因工程的核心是______，科学家利用基因工程技术，使转基因动物本身变成“批量生产药物的工厂”。如建立的生产生长激素的乳房生物反应器，即：科学家将____________________等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物的受精卵中，然后，将受精卵送入母体内，使其生长发育成转基因动物。转基因动物进入泌乳期后，可以通过分泌乳汁来生产所需要的药物。