为了有效控制水稻害虫的危害，中国农业科学院和华中农业大学合作，成功地获得了转Bt基因（Bt基因来源于一种细菌，即苏云金芽孢杆菌，该基因的表达产物执毒蛋白具有良好的杀虫效果）的二倍体水稻。请回答下列问题：

（1）若知道Bt毒蛋白的氨基酸序列，则可以推测出Bt基因的核苷酸序列，但推测出的核苷酸序列并不是唯一的，其原因是________________。

（2）获得Bt基因后，在体外可以通过______________________反应进行扩增，扩增时需以_____________为原料，反应体系中还应加入适量的______________酶。

（3）将Bt基因导入水稻细胞中时不宜采用农杆菌转化法，最可能的原因是________________。

(1)ES细胞能分化出成体动物的所有组织和器官，这体现了ES细胞的_____________。为获得适合人体移植的猪器官，减弱或消除排斥反应，可对ES细胞进行___________。

(2)—个ES细胞变成ES细胞群的过程中，细胞_________(填“可能”、“不可能”)出现接触抑制现象。下列关于动物细胞培养和核移植的叙述，正确的是__________。

A.从原代培养物或细胞系中选择和纯化无法获得细胞株

B.动物细胞培养基中添加胰岛素的目的是调节血糖浓度

C.胚胎干细胞培养时，加滋养层是为了抑制胚胎干细胞分化

D.核移植形成的重组细胞在初次分裂时核基因不转录

(3)为获得含兔褐毛基因的转基因小鼠，可将褐毛基因通过_________法导入ES细胞核中，再将该核移植到去核的卵细胞中，经过_____________、胚胎培养、胚胎移植，最终由代孕母鼠产下克隆小鼠。

(4)为获得大量的上述克隆小鼠，可用转基因的小鼠胚胎成纤维细胞进行体细胞克隆。因为含有褐毛基因的胚胎成纤维细胞可进行__________培养，理论上可获得无限个转基因小鼠。

(1)应用胚胎工程技术可以培育出“试管牛”。试管牛的培育需经过体外受精、________、________以及在母体中发育和产出等过程。

(2)在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行处理，使其__________。另外，培养的卵母细胞需要发育至减数第二次分裂的中期，该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和__________。

(3)通常奶牛每次排出一枚卵母细胞，采用激素处理可使其一次排出多枚卵母细胞，常使用的激素是______。

(4)利用基因工程可以获得转基因牛，从而改良奶牛的某些性状。基因工程的四个基本操作步骤是________、基因表达载体的构建、________和________。若要获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素，则所构建的基因表达载体必须包括：某种牛乳腺分泌蛋白基因及其启动子、________、________、________和复制原点等。将该基因表达载体导入受体细胞所采用的方法是________(显微注射法、农杆菌转化法)，为获得能大量产生人干扰素的转基因牛，该基因表达载体应导入的受体细胞是________(受精卵、乳腺细胞)。

下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线．图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉索抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点．

​（6）基因工程的四个操作步骤是___________、____________、____________、和____________。

血管内皮生长因子（VEGF)是目前发现的诱导肿瘤血管生成的最强烈的血锌生成因子，针对VEGF生产的抗肿瘤药物，是治疗癌症的一个方向；芝加哥大学的Katherine Knight博士成功地在转基因兔中获得骨髄瘤样肿瘤，经技术改进，能高产量地生产兔单克隆抗体：我国江苏省某公司首次在全球成功开发出人源化兔单抗药物“注射用人源化抗VEGF单克隆抗体”(SIM63),有效打破了跨国公司的技术垄断。人源化抗体可以大大减少异源抗体对人类机体造成的免疫副反应。请回答下列相关问题：

(1)动物细胞在体外培养的技术属于_____________工程，动物细胞体外培养需要满足的条件是：____________、合适的营养、______________、气体环境。由于人们对动物细胞所需的营养物质没有完全搞淸楚，在使用合成培养基时，通常需要加____________等一些天然成分：在培养时除提供细胞所需的O₂外，还需要CO₂，其作用是_____________________ 。

(2)在基因工程中，将目的基因导入动物细胞现今极常用、极有效的方法是________       _。

(3)当VEGF作为抗原进入动物体内时，动物体内的某些B细胞分化为浆细胞，这种浆细胞只分泌针对VEGF的一种抗体，但B细胞在体外培养不会无限增殖，解决这一问题的方法是通过动物细胞融合技术得到杂交瘤细胞，常用的化学诱导融合试剂为____________ ，要分离出杂交瘤细胞,应该

用______________培养基进行筛选，单克隆抗体最主要的优点是它的______________________,并可大量制备。

菊天牛是菊花的主要害虫之一。科研人员将抗虫基因转入菊花，培育出抗虫菊花。下图是获得转基因菊花的技术流程。请据图回答：

（注：卡那霉素抗性基因（kan^R）作为标记基因，菊花叶片对卡那霉素高度敏感）

（1）质粒是基因工程中最常用的载体，其化学本质是_ __，此外还可用                  _      _           作为载体。

（2）构建重组质粒过程需要的酶有限制酶和__________ ，图中将目的基因导入植物受体细胞采用的方法是______________。

（3）为了促进土壤农杆菌吸收重组质粒，可用__      _处理，使其处于感受态。

（4）将愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素、营养物质以及__       __和_________的固体培养基中，在适宜条件下进行培养，筛选转基因菊花。

（5）将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2 龄幼虫，对照组应饲喂等量的非转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料的混合物，实验结果如下表所示。

据表分析，__                             __差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用。

为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。

（1）将重组DNA分子导入植物细胞的常用方法有______________________法。(要写出两种) 

（2）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用____________________技术，该技术的核心是________________和_________________。 

（3）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的______________做探针进行分子杂交检测，又要将水稻___________________方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。

请回答胚胎工程和基因工程方面的问题：

（1）应用胚胎工程技术可以培育出“试管牛”。试管牛的培育需经过体外受精、__________________、__________________ 以及在母体中发育和产出等过程。

（2）在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行处理，使其___________。另外，培养的卵母细胞需要发育至_________________期。

（3）采用激素处理可使奶牛一次排出多枚卵母细胞，常使用的激素是__________________。

（4）利用基因工程可以获得转基因牛，从而改良奶牛的某些性状。若要获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素，则所构建的基因表达载体必须包括：某种牛乳腺分泌蛋白基因及其启动子、__________、________________、________________ 和复制原点等．将该基因表达载体导入受体细胞所采用的方法是_____________________，为获得能大量产生人干扰素的转基因牛，该基因表达载体应导入的受体细胞是 _____________________ （受精卵、乳腺细胞）。

科学家通过利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，提高了光合作用过程中Rubi-sco酶对CO₂的亲和力，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：

(1)PCR过程所依据的原理是____________，利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成_________；扩增过程需要加入__________________________酶。

(2)启动子是一段有特殊结构的DNA片段，其作用是______________________________。PCR定点突变技术属于__________的范畴。

(3)可利用定点突变的DNA构建基因表达载体。常用将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的______________技术，才能最终获得转基因植物，该技术利用的原理是________________。