我国一科研团队将小麦液泡膜Na+/K+逆向转运蛋白基因（TaNHX2基因）转移到水稻细胞内，获得了转基因耐盐水稻新品种。回答下列有关问题：

（1）为保证目的基因在水稻细胞中能够表达，运载体上应含有特定的_______________（复制原点、启动子、标记基因）。

（2）水稻的转化过程为：将水稻幼胚接种到诱导培养基上，经过________过程，培养出________________________，然后用______________________法，将目的基因和相关功能片段整合到愈伤组织细胞的染色体DNA上，最后诱导形成水稻植株。

（3）为验证外源基因整合到水稻基因组后是否转录，可从转基因植株的细胞中提取所有mRNA并反转录成______________________，再以反转录产物为模板，进行基因扩增。若以根细胞为材料扩增结果为阳性（有产物生成），以叶细胞为材料扩增结果为阴性（无产物生成），则说明_______________________________________________________________

（4）将生长至4叶期的转基因幼苗转入____________________溶液中培养，进行耐盐试验，用非转基因幼苗作为对照。培养30天后观察现象，若___________________则说明转基因植株获得了耐盐特性。

请回答下列有关转基因抗病毒马铃薯的问题：

  （1）获取抗病毒基因常用的方法有______________________、_____________________________________、__________________________________。

  （2）获得转基因马铃薯的核心操作是_______________________________________，其中与调节抗病毒基因转录有关的部分是_______。

  （3）利用农杆菌转化法将抗病毒基因导入马铃薯，首先应将重组质粒导入_________，再将它与切成小圆片的马铃薯叶片共同培养，使插入在Ti质粒上的______________中的抗病毒基因可以转移至受体细胞，并整合到马铃薯的_________________________。

  （4）将共同培养后的马铃薯转移到特定的培养基上，在___________________________（填激素名称）的协同调控作用下，经过脱分化形成_________________，再分化得到胚状体或丛芽；对获得的植株进行个体生物学水平鉴定的做法是__________________________。 

基因工程在农业中的应用发展迅速，基因可导入农作物中，用于改良该农作物的性状。通过多重PCR技术可扩增并检测转基因农作物的外源基因成分。多重PCR是在一个PCR反应体系中加入多对引物，针对多个DNA模板或同一模板的不同区域，扩增多个目的基因的PCR技术。请回答：

（1）我国科学家将Bt毒蛋白基因、鱼的抗冻蛋白基因、控制果实成熟的基因导入农作物，可获得     、     、延熟的转基因作物。

 （2）引物是根据           的一段核苷酸序列合成的，每种基因扩增需要一对引物的原因是                                       。下表是A、B、C三种基因的引物，据表分析，引物特异性主要在                            。

（3）PCR过程中温度从90℃降到55-60℃的目的是                          。

（4）检测人员通过多重PCR技术确定农作物中是否含有A、B、C三种转基因。将A、B、C三种基因和待测的农作物基因样品进行PCR，扩增后的产物再进行电泳，结果如图。

 据图分析：含有三种转基因的农作物是____    ，判断依据是                                            。

 （5）与PCR技术相比，多重PCR技术的优势                             。  

利用基因工程技术培育转基因抗冻番茄.该过程需要用多种限制酶,下图依次表示EcoR I、Sma I、Nae I三种限制酶的识别序列及切割位点.

请回答:

（1）上述限制酶在特定位点切割DNA,其实质是断开DNA分子每条链中特定部位的两个核苷酸之间的_______切割后产生了____________末端.

（2）利用EcoR I和NAE酶切得某种鱼的抗冻蛋白基因,可与被EcoR I和Sam I酶切后的质料连接成重组质料,原因是___________

（3）重组质料导入番茄后,欲检测抗冻蛋白基因是否转录出mRNA,需利用__________作探针.

（4）利用抗冻蛋白制备出相应的__________,然后进行抗原-抗体杂交,观察到杂交带出现,尚不足以确定转基因抗冻番茄培育是否成功.因此,还应将转基因番茄__________,以确定其耐寒能力是否提高

单克隆抗体技术在疾病诊断和治疗以及生命科学研究中具有广泛的应用。下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。

（1）病原体注入小鼠体内后，要经过_________细胞处理后形成抗原—MHC复合体，才能被免疫细胞识别。

（2）制备单克隆抗体所用的B淋巴细胞一般从脾中采集，然后用_______________（动物细胞特有）诱导，使B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，如果只考虑两个细胞融合，细胞融合实验完成后,融合体系中除含有未融合的细胞和杂交廇细胞外,还含有____,体系中出现多种类型细胞的原因是________。

（3）生产单克隆抗体时涉及两次筛选，第一次用选择培养基选出_______________，第二次筛选是选出                 _______________。

（4）单克隆抗体还可以用下面方法制备：

prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体时，Ⅱ最可能是________细胞。某人利用图(b)所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因（prG）的重组DNA，如图(c)所示。这三种重组子中，目的基因能在宿主细胞中正确表达的有_________。

A．[生物技术实践]

淀粉分解菌是能分解淀粉的一类微生物，在自然条件下，淀粉分解菌和其他各种细菌混杂生活在土壤中。某实验小组利用培养基将土壤中的淀粉分解菌筛选出来，回答下列问题：

(1)将土壤中的淀粉分解菌筛选出来的培养基应添加________作为唯一的碳源，此外还需要添加的成分有___________________。

(2)稀释涂布平板法可用于微生物的接种和计数，该实验小组将样液分别稀释了10倍、10²倍、10³倍、10⁴倍，然后将10²倍、10³倍、10⁴倍的稀释液分别涂布在不同的平板上，涂布多个稀释倍数的稀释液的目的是____________________________________。若有三个平板均涂布了稀释倍数为10³倍的稀释液1mL，分别形成了68、70和72个菌落，则原样液体中每毫升含有淀粉分解菌________个，该方法测量值一般比实际值________。

(3)涂布一段时间后，待长出菌落后可向培养基中滴入________，挑取有明显淀粉分解圈的单菌落，一般来说，淀粉分解圈越大，则淀粉分解菌分解淀粉的能力越________。

B．[现代生物科技专题]

科学家从某细菌中提取抗冻基因，转入番茄并培育出抗冻番茄。下图是转抗冻基因番茄的培育过程，含抗冻基因的DNA片段和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。分析回答问题：

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(1)若要获得抗冻基因，可以从细菌中提取；也可以通过分析抗冻蛋白________的序列推测基因的结构，进而人工合成抗冻基因。对获得的抗冻基因可用________技术进行扩增。

(2)上述两种途径获得的抗冻基因________(填“是”或“否”)一定相同，原因是_____________________________________________。

(3)用图中的质粒和抗冻基因构建重组质粒，不能使用SmaⅠ酶切割，原因是________。图中①②过程为防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用________酶对外源DNA、质粒进行切割。

(4)图中过程⑤表示______________________________________。