（1）过程①中将修饰后的CHS基因与Ti质粒连接成重组Ti质粒的酶称为               。这种酶主要有两类，一类是从T4噬菌体中分离得到的，另一类是从大肠杆菌中分离得到的。这两类酶都能恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的                 键。

（2）图中将修饰后的CHS基因导入苦荞体细胞的方法称为                   ，除此外还可以利用的方法有                    。对过程②操作前，需先用Ca²⁺处理农杆菌，使其成为             细胞。

（3）检测转基因苦荞培育是否成功，可以比较转基因苦荞与普通苦荞的

                 含量或测定细胞中CHS含量进行鉴定。

去年冬季我国北方再次爆发流感，专家指出接种流感病毒疫苗仍是预防的有效措施。流感病毒为RNA病毒，M基因编码流感病毒表面抗原（M蛋白）。请回答下列问题：

（1）由病毒RNA通过________________可获得病毒DNA，若要通过PCR技术扩增M基因，前提是设计M基因对应的_____________ 。

（2）构建M基因表达载体所用的工具酶是 ____________________ 。若要将M基因表达载体导入到大肠杆菌细胞内，以大量生产疫苗，通常先用钙离子处理大肠杆菌，其目的是 _______________________。检测M基因是否转录出mRNA的具体方法是使用__________________与提取出的______做分子杂交。

（3）新型疫苗—“DNA疫苗”是将含M基因的重组表达载体直接导入人体内，在人体细胞内通过M基因的表达产生__________，刺激机体通过免疫过程产生_________，以提高机体的免疫能力。

鸡干扰素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草，以获得抗病毒烟草。下图为科研人员制备能合成鸡干扰素的烟草愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，两种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：

（1）步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是______。科研人员还在两种引物的一端分别加上了_________和__________序列，以便于后续的剪切和连接,一个DNA分子三轮复制以后，含有两种引物的DNA分子有________个． 为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用两种限制酶，选择的原则是________。

A．Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点

B．目的基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点

C．酶切后，目的基因形成的两个黏性末端序列不相同

D．酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同

（2）步骤②所构建的基因表达载体中未标注出的必需元件还有__________，步骤③中需先用_____处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。

（3）步骤④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过_______获得DNA，再进行PCR扩增，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是__________。

科研小组将大麦的抗旱基因(HVA)导入小麦细胞，并用植物组织培养的方法培育成高抗旱性小麦植株。回答下列问题：

(1)该科研小组采用________技术培育抗旱小麦，该生物技术的核心步骤是________。若要获得大量抗旱基因，可通过________技术对抗旱基因进行扩增。

(2)要确定抗旱基因在小麦细胞中是否成功表达，从分子水平上鉴定，可采用的方法是________；若要进行个体水平检测，则需要把转基因小麦植株分别种植在________不同的田地，以检测其是否有抗性及抗性程度。

(3)在培育成功的转基因抗旱小麦的繁育过程中，抗旱基因和标记基因________(填“遵循”或“不遵循”)基因的分离规律，理由是______________。