党的十九大报告指出要“大力度推进生态文明建设……全面节约资源有效推进，能源资源消耗强度大幅下降。重大生态保护和修复工程进展顺利，森林覆盖率持续提高。生态环境治理明显加强，环境状况得到改善”。请回答下列相关问题：

（1）生态工程是对________进行修复重建，对________进行改善，促进人和自然的和谐发展。

（2）全面节约资源有效推进，能源资源消耗强度大幅下降很大程度上得益于实行“________”的原则，从而实现废弃物的资源化。

（3）实行生态工程，很多时候还需要考虑人文关怀、贫困地区的收入等问题，才能很好的解决“前面造林，后面砍林”的现象，这遵循的是生态工程的________原理。

（4）在保护濒危植物方面，运用了很多技术，比如微型繁殖运用的是________技术，其原理是________。

（5）在处理城市生态系统垃圾时，采用了生物治理法，分解者处理垃圾的相关目的基因从分解者体内用酶切割下来，再与________相连导入受体菌。

番木瓜有较高的营养价值和医用价值，但极易感染番木瓜环斑病毒（PRV）．科研人员通过现代生物技术大量培育抗病毒番木瓜并获得其中的有效成分，请根据所学知识回答下列问题：

（1）PRV是一种RNA病毒，科研人员提取该病毒的核酸，经反转录得到PRVCP基因（目的基因），利用目的基因构建     ，其中的终止子能使 过程在所需要的地方停下来．将目的基因导入番木瓜细胞时，常用     法，该方法需将目的基因插入到 的T﹣DNA上，目的基因在番木瓜细胞中表达后，使受体细胞能有效抵抗PRV的侵染．

（2）要获得抗PRV番木瓜植株，需在   的人工控制条件下，将受体细胞培养在人工配置的培养基上，给予适宜条件，诱导其产生 、丛芽，最终形成完整的植株，体现了细胞的           。

（3）为了检测目的基因是否表达，需从转基因番木瓜中提取       ，用相应的抗体进行检测，该方法称为       法．

（4）上述生物技术包括转基因技术和植物细胞工程中的      技术．

科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：

（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶               分别对                 进行切割，切割后产生的DNA片段分别为               种、               种。

（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有               作为标记基因。

（3）研究人员通常采用               法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用               技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。

（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的               过程。

（1）  提取目的基因①若已获取PG的mRNA，可通过_____________获取PG基因。

②在该基因上游加结构A可确保基因的反向转录，结构A上应具有   ____      结合位点。

③重组质粒转移到大肠杆菌中的目的是_____________________________。

(2)用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有___________的培养基进行筛选，培养24~48h后取样，在质量分数为25%的蔗糖溶液中，观察细胞________现象来鉴别细胞壁是否再生。

(3)由于导入的目的基因能转录出反义RNA，且能与________________互补结合，因此可抑制PG基因的正常表达。若转基因番茄的保质期比非转基因番茄长，则可确定转基因番茄培育成功。

(4)获得的转基因番茄产生的种子不一定保留目的基因，科研人员常采用           方法使子代保持转基因番茄的优良性状。