铁皮石斛是一种名贵中药材，有生津养胃、降血糖和增强免疫力等作用，有效成分为石斛多糖、石斛碱等，温州雁荡山素有“中国铁皮石斛之乡”的美誉。请回答下列问题：

（1）用茎快速繁殖铁皮石斛时，给茎消毒时无须使用的是__________ （填“乙醇”，“无菌水”，“甘露醇”或“次氯酸钠”）。在细胞分裂素相对较多和生长素相对较少的培养基中培养茎的切段，待长出较多的_____________ ，将其进行______________ （处理）后再转入__________培养基中继续培养，直至长成幼苗，之后再后将苗移至草炭土或蛭石中进行___________，再转移至土中定植。

（2）研究发现，铁皮石斛的生长发育与其体内的内生菌密切相关。为进一步研究内生菌的作用，需要大量的内生菌进行相关实验。分离内生菌时采用的最简便的方法是________ 。

A．G6玻璃砂漏斗过滤法              B．血细胞计数法

C．划线分离法                       D．涂布分离法

    再将纯化的内生菌转移到液体培养基中进行_____________ 。

（3）研究发现，质量浓度为200mg /L的卡那霉素能有效抑制铁皮石斛细胞的增殖与分化。科学家欲利用卡那霉素，采用农杆菌转化法对现有铁皮石斛品种进行基因改良。在基因工程操作中，对于要导入受体细胞的_____________ 应同时带有目的基因和_____________ 基因，这样才能利用含有卡那霉素的培养基将成功导入目的基因的受体细胞筛选出来。

（4）鉴定铁皮石斛的品质，可通过苯酚—浓硫酸法测定石斛多糖的含量。其原理是石斛多糖水解成单糖并脱水生成糖醛衍生物后，与苯酚缩合产生橙黄色化合物，在490nm处测定光密度值，以不同浓度的葡萄糖溶液为标准溶液建立标准曲线，便可知道样品中石斛多糖的含量。

（5）为高效提取石斛多糖，可在提取液中加入_____________ ，以提高铁皮石斛的出汁率。

兔肝细胞中的基因E编码代谢甲醛的酶，拟利用基因工程技术将基因E转入矮牵牛中，以提高矮牵牛对甲醛的代谢能力，请回答：

（1）从兔肝细胞中提取mRNA，在_________________酶的作用下形成互补DNA，然后以此DNA为模板扩增得到基因E。在相关酶的作用下，将基因E与Ti质粒连接在一起，形成_____________，再导入用氯化钙处理的_________，侵染矮牵牛叶片。将被侵染的叶片除菌后进行培养，最终得到转基因矮牵牛。其中培养过程正确的是______（A.叶片在含适宜浓度生长素的培养基上分化形成愈伤组织 B.愈伤组织在含细胞分裂素和生长素配比较高的培养基上形成芽  C.再生的芽在细胞分裂素含量较高的培养基上生根    D.愈伤组织在含适宜浓度植物生长调节剂的培养基上脱分化形成再生植株）。

（2）取转基因矮牵牛叶片，放入含MS液体培养基和适宜浓度甲醛且密封的试管中。将试管置于___________上，进行液体悬浮培养液。一段时间后测定培养基中甲醛的含量，以判断基因E是否在转基因矮牵牛中正常表达。培养过程中液体培养基的作用：一是提供营养；二是___________________________，从而使叶片保持正常的形态。

（1）若分离以尿素为氮源的细菌。在含有___酶的细菌菌落周围会出现，这是由于尿素被分解产生的氨气使PH升高，______指示剂产生颜色变化。采用______法将发酵菌株固定在锯末上制成固定化菌株，可大幅缩短生产周期,降低生产成本和提高生产效率。

(2)亚硝酸盐测定原理:亚硝酸盐可与________________发生重氮化反应.这一产物再与____________________偶联,形成__________色产物。

（3）获得目的基因，获取已知目的基因序列用化学方法合成或_________________

基因工程的核心:通常用_________________分别切割目的基因和载体DNA，然后用________将目的基因和载体DNA连接在一起,形成重组DNA分子。

（4）卵巢经超数排卵处理后，要使用__________________确定卵泡的位置。     

 科研人员单独培养胚胎干细胞，首先需要在培养皿底部制备一层______细胞，称为饲养层。 利用动物细胞培养技术中的细胞具有________________和__________________的特点可用烧伤患者自身的健康皮肤细胞培养出大量自身薄层皮肤细胞，用于移植。

（5）植物克隆和动物克隆共有的培养方法是_______

A.原生质体培养、传代培养     B.贴壁培养、传代培养 

C.器官培养、愈伤组织培养     D.悬浮培养、器官培

(3)取田间不同品种水稻的幼胚，先进行_______，然后接种到培养基中培养，幼胚发生_______形成愈伤组织，并进行继代培养。用含重组质粒的农杆菌侵染愈伤组织，再培养愈伤组织，以便获得抗虫的转基因水稻。影响愈伤组织能否成功再生出植株的因素有：培养条件如光温、培养基配方如植物激素配比、以及_______（答 2点即可）。

（3）取适量含产脲酶细菌的10^-4、10^-5两种土壤稀释液，分别涂布接种到LB固体培养基和尿素固体培养基上，培养48h，推测固体培养基上生长的菌落数最少的是_____(A. 10^-5稀释液+尿素固体培养基        B. 10^-5稀释液+LB固体培养基     C. 10^-4稀释液+尿素固体培养基         D. 10^-4稀释液+LB固体培养基)。在尿素固体培养基上产脲酶细菌菌落周围出现_____，其原因是细菌产生的脲酶催化_____分解产生_____所致。

白藜芦醇是一种天然的抗氧化剂，可降低血液粘稠度，抑制血小板凝结和血管舒张，保持血液畅通，可预防癌症的发生及发展，具有抗动脉粥样硬化和冠心病，缺血性心脏病，高血脂的防治作用。抑制肿瘤的作用还具有雌激素样作用，可用于治疗乳腺癌等疾病。下图表示利用植物组织培养的方法生产白藜芦醇的过程。请分析作答：

外植体愈伤组织丛芽或根—→完整植株

(1)植物组织培养是在____________和人工控制条件下，将________的植物体器官、组织、细胞，在人工配置的培养基上培养成完整植株，利用的原理是______________________________________。

(2)植物组织培养的核心步骤为____________和____________。①和②过程需要的培养基的激素含量________(填“相同”或“不同”)。

 (3)利用细胞产物工厂化生产技术提取白藜芦醇需要将外植体培养至________，原因是此阶段的细胞分裂能力强，但白藜芦醇的产量一般较低，可以用______________________处理愈伤组织，再筛选产量提高的细胞进一步培养。

(4)将白藜芦醇的基因转入大豆等重要粮食作物和经济作物中，提高农作物的营养价值和品质。导入受体细胞时常用方法为_____________________，目的基因是否插入的检测方法为_____________________。

DHA对脑神经发育至关重要。以A、B两种单细胞真核藻为亲本，利用细胞融合技术选育高产DHA融合藻。两种藻特性如下表。

据表回答：

（1）选育的融合藻应具有A藻_______与B藻________的优点。

（2）诱导融合前需用纤维素酶处理两种藻，其目的是获得______。

（3）通过以下三步筛选融合藻，步骤________可淘汰B藻，步骤________可淘汰生长速率较慢的藻落，再通过步骤________获取生产所需的融合藻。

步骤a：观察藻落的大小

步骤b:用不含有机碳源（碳源——生物生长的碳素来源）的培养基进行光照培养

步骤c：测定DHA含量

我国一科研团队将小麦液泡膜Na+/K+逆向转运蛋白基因（TaNHX2基因）转移到水稻细胞内，获得了转基因耐盐水稻新品种。回答下列有关问题：

（1）为保证目的基因在水稻细胞中能够表达，运载体上应含有特定的_______________（复制原点、启动子、标记基因）。

（2）水稻的转化过程为：将水稻幼胚接种到诱导培养基上，经过________过程，培养出________________________，然后用______________________法，将目的基因和相关功能片段整合到愈伤组织细胞的染色体DNA上，最后诱导形成水稻植株。

（3）为验证外源基因整合到水稻基因组后是否转录，可从转基因植株的细胞中提取所有mRNA并反转录成______________________，再以反转录产物为模板，进行基因扩增。若以根细胞为材料扩增结果为阳性（有产物生成），以叶细胞为材料扩增结果为阴性（无产物生成），则说明_______________________________________________________________

（4）将生长至4叶期的转基因幼苗转入____________________溶液中培养，进行耐盐试验，用非转基因幼苗作为对照。培养30天后观察现象，若___________________则说明转基因植株获得了耐盐特性。

请回答下列有关转基因抗病毒马铃薯的问题：

  （1）获取抗病毒基因常用的方法有______________________、_____________________________________、__________________________________。

  （2）获得转基因马铃薯的核心操作是_______________________________________，其中与调节抗病毒基因转录有关的部分是_______。

  （3）利用农杆菌转化法将抗病毒基因导入马铃薯，首先应将重组质粒导入_________，再将它与切成小圆片的马铃薯叶片共同培养，使插入在Ti质粒上的______________中的抗病毒基因可以转移至受体细胞，并整合到马铃薯的_________________________。

  （4）将共同培养后的马铃薯转移到特定的培养基上，在___________________________（填激素名称）的协同调控作用下，经过脱分化形成_________________，再分化得到胚状体或丛芽；对获得的植株进行个体生物学水平鉴定的做法是__________________________。 

（1)湿地具有蓄洪防旱，调节区域气候等生态功能，这体现了生物多样性的_______价值。依据生态工程的________原理，黄河三角洲自然保护区的建立需考虑周边的经济发展等相关因素。

（2）常用________法将植酸酶基因导入野大豆细胞中，采用________方法检测植酸酶基因是否成功表达。

（3）可利用__________技术快速繁殖转植酸酶基因野大豆，该技术的核心步骤是__________________。

（4）染色体加倍后的转基因野大豆，作为饲料有更好的品质。低 温诱导可获得四倍体转基因野大豆，诱导染色体加倍的原因是______________。若用这样的植株根类制片后观察到含8个染色体组的细胞，合理的解释是_____________。

A．[生物技术实践]

淀粉分解菌是能分解淀粉的一类微生物，在自然条件下，淀粉分解菌和其他各种细菌混杂生活在土壤中。某实验小组利用培养基将土壤中的淀粉分解菌筛选出来，回答下列问题：

(1)将土壤中的淀粉分解菌筛选出来的培养基应添加________作为唯一的碳源，此外还需要添加的成分有___________________。

(2)稀释涂布平板法可用于微生物的接种和计数，该实验小组将样液分别稀释了10倍、10²倍、10³倍、10⁴倍，然后将10²倍、10³倍、10⁴倍的稀释液分别涂布在不同的平板上，涂布多个稀释倍数的稀释液的目的是____________________________________。若有三个平板均涂布了稀释倍数为10³倍的稀释液1mL，分别形成了68、70和72个菌落，则原样液体中每毫升含有淀粉分解菌________个，该方法测量值一般比实际值________。

(3)涂布一段时间后，待长出菌落后可向培养基中滴入________，挑取有明显淀粉分解圈的单菌落，一般来说，淀粉分解圈越大，则淀粉分解菌分解淀粉的能力越________。

B．[现代生物科技专题]

科学家从某细菌中提取抗冻基因，转入番茄并培育出抗冻番茄。下图是转抗冻基因番茄的培育过程，含抗冻基因的DNA片段和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。分析回答问题：

​

(1)若要获得抗冻基因，可以从细菌中提取；也可以通过分析抗冻蛋白________的序列推测基因的结构，进而人工合成抗冻基因。对获得的抗冻基因可用________技术进行扩增。

(2)上述两种途径获得的抗冻基因________(填“是”或“否”)一定相同，原因是_____________________________________________。

(3)用图中的质粒和抗冻基因构建重组质粒，不能使用SmaⅠ酶切割，原因是________。图中①②过程为防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用________酶对外源DNA、质粒进行切割。

(4)图中过程⑤表示______________________________________。