[生物——选修3：现代生物科技专题]

   白菜、甘蓝均为二倍体，体细胞染色体数目分别为20、18。“白菜—甘蓝”是用细胞工程的方法培育出来的蔬菜新品种，它具有生长期短、耐热性强和易于储藏等优点。下图是“白菜—甘蓝”的杂交过程示意图，回答以下问题：

（1）为了得到原生质体需先用________和________来处理白菜细胞和甘蓝细胞；

（2）诱导原生质体融合的方法有多种，常用的物理方法是________，融合完成的标志是________。由杂种细胞得到白菜—甘蓝还需要经过组织培养技术，其中需要避光培养的步骤是________。

（3）上图通过植物体细胞杂交技术获得的“白菜—甘蓝”体细胞染色体数为_____；通常情况下，白菜和甘蓝有性杂交是不能成功的，原因是________，若对白菜和甘蓝采用杂交育种方法能成功的话，得到的后代应含________条染色体。

（4）植物体细胞杂交技术和传统杂交技术相比的优点是________。

【选修3】《现代生物科技专题》

（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式——________和____________。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择________(相同或不同)限制酶进行切割。

（2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是：它是                       的位点，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需要的蛋白质。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用________处理大肠杆菌，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的         基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为________。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成人胰岛素，常用______________技术。

（3）如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的________中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的________上。

Ⅱ．请根据材料回答下列问题。

单克隆抗体在医疗、诊断等方面发挥着越来越重要的作用。英国科学家米尔斯坦和柯勒设计了一个用被免疫的B淋巴细胞制备单克隆抗体的实验，图示其实验流程，请回答。

（1）a是               ，b是                ①过程是                      ，②表示在              上进行培养。③过程包括了体外培养和                    。

（2）制备单克隆抗体时，选择B淋巴细胞的原因是                             。

（3）如何判断经过②后的细胞就是杂交细胞                                   。   

（4）诱导动、植物细胞融合常用的一种化学诱导剂是                    ，植物体细胞杂交之前还需用                          去除细胞壁，植物体细胞杂交技术在一定程度上解决了杂交育种的                               问题。

(1)植物体细胞杂交的第①步是去掉细胞壁,分离出有活力的原生质体。目前此步聚最常用的方法是酶解法，也就是在温和的条件下用            等分解植物的细胞壁。

(2)人工诱导②过程原生质体融合的物理方法是：利用          等（至少写出两种）促使原生质体融合；化学方法是用    等试剂作为诱导剂诱导融合。动物细胞融合与植物原生质体融合的诱导方法类似，动物细胞的融合还常用到         作为诱导剂。

(3)③表示融合后的原生质体再生细胞壁，新细胞壁的产生与细胞内      (细胞器)有密切关系。

(4)图中④过程表示          ，⑤过程表示           ，由杂种细胞生长成杂种植株所依据的原理是               。

(5)植物体细胞杂交在育种工作中具有广泛的应用价值，其突出的优点是         。