(1)ES细胞能分化出成体动物的所有组织和器官，这体现了ES细胞的_____________。为获得适合人体移植的猪器官，减弱或消除排斥反应，可对ES细胞进行___________。

(2)—个ES细胞变成ES细胞群的过程中，细胞_________(填“可能”、“不可能”)出现接触抑制现象。下列关于动物细胞培养和核移植的叙述，正确的是__________。

A.从原代培养物或细胞系中选择和纯化无法获得细胞株

B.动物细胞培养基中添加胰岛素的目的是调节血糖浓度

C.胚胎干细胞培养时，加滋养层是为了抑制胚胎干细胞分化

D.核移植形成的重组细胞在初次分裂时核基因不转录

(3)为获得含兔褐毛基因的转基因小鼠，可将褐毛基因通过_________法导入ES细胞核中，再将该核移植到去核的卵细胞中，经过_____________、胚胎培养、胚胎移植，最终由代孕母鼠产下克隆小鼠。

(4)为获得大量的上述克隆小鼠，可用转基因的小鼠胚胎成纤维细胞进行体细胞克隆。因为含有褐毛基因的胚胎成纤维细胞可进行__________培养，理论上可获得无限个转基因小鼠。

血管内皮生长因子（VEGF)是目前发现的诱导肿瘤血管生成的最强烈的血锌生成因子，针对VEGF生产的抗肿瘤药物，是治疗癌症的一个方向；芝加哥大学的Katherine Knight博士成功地在转基因兔中获得骨髄瘤样肿瘤，经技术改进，能高产量地生产兔单克隆抗体：我国江苏省某公司首次在全球成功开发出人源化兔单抗药物“注射用人源化抗VEGF单克隆抗体”(SIM63),有效打破了跨国公司的技术垄断。人源化抗体可以大大减少异源抗体对人类机体造成的免疫副反应。请回答下列相关问题：

(1)动物细胞在体外培养的技术属于_____________工程，动物细胞体外培养需要满足的条件是：____________、合适的营养、______________、气体环境。由于人们对动物细胞所需的营养物质没有完全搞淸楚，在使用合成培养基时，通常需要加____________等一些天然成分：在培养时除提供细胞所需的O₂外，还需要CO₂，其作用是_____________________ 。

(2)在基因工程中，将目的基因导入动物细胞现今极常用、极有效的方法是________       _。

(3)当VEGF作为抗原进入动物体内时，动物体内的某些B细胞分化为浆细胞，这种浆细胞只分泌针对VEGF的一种抗体，但B细胞在体外培养不会无限增殖，解决这一问题的方法是通过动物细胞融合技术得到杂交瘤细胞，常用的化学诱导融合试剂为____________ ，要分离出杂交瘤细胞,应该

用______________培养基进行筛选，单克隆抗体最主要的优点是它的______________________,并可大量制备。

（一）回答与果酒、果醋制作有关的问题。

（1）在酿酒过程中，酵母菌只有在无氧条件下才能进行__________。发酵开始时，发酵瓶内看不到气泡冒出的原因可能是酵母菌的________使发酵瓶内出现负压。

（2）下列各项中，与果酒中的酒精浓度有关的是 ____________________（多选）。

A.发酵时间                                     B.发酵温度

C.培养液中糖的含量                  D.酵母菌对酒精浓度的耐受程度

（3）不同地域所酿制的葡萄酒风味会有一定的差异，出现风味差异的原因除了与当地相应的土壤、气候等地理环境因素和葡萄品种有关外，还可能与不同地域酿酒时所用的_____________________等生物因素有关。

（4）在利用果酒制作果醋过程中，如果已获得醋化醋杆菌菌种，可先在液体培养基中进行·              培养，然后接种到发酵瓶中。发酵瓶下口直角玻璃管内塞有松紧合适的脱脂棉球，其作用是_______________。开始收集果醋前，应检测发酵瓶流出液的_____________________。

（二）毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIF-Ⅱ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转 KIF-Ⅱ 基因的高绒质绒山羊的简单流程如图：

（1）转基因过程用到的工具酶有___________和_______________________。

（2）在过程②中，用_________________处理将皮肤租住分散成单个成纤维细胞。由于人们对动 物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚，因此在培养细胞时需在培养基中加入一定量的 __________________________ ，在培养过程中，应将培养瓶置于_____________________中培养。

（3）要获得多只相同的转基因山羊， 可对图中早期胚胎进行___________后进行胚胎移植。

（4）下列有关基因工程的叙述，正确的是______________________  。

A.切割目的基因和载体DNA 时为获得相同的粘性末端，必须用相同的核酸内切酶

B.基因工程的原理是基因重组，其核心是上图中的过程④

C.图示过程获得的转基因绒山羊并不是克隆动物

D.重组表达载体上含有 RNA 聚合酶的识别位点

据《自然》杂志介绍，日本研究人员利用实验鼠的胚胎干细胞人工培育出了名为“视杯”的视网膜雏形结构。据悉，在一种特殊的培养介质中，来自实验鼠的胚胎干细胞能逐渐发育成感光细胞、神经细胞等，进而形成视网膜的雏形结构。研究人员现正在测试该“视杯”是否真能感受光线刺激，并将相关神经信号传递给实验鼠的大脑。

（1）实验鼠的胚胎干细胞________（填“具有”或“不具有”）细胞周期，可取白________。

（2）利用实验鼠的胚胎干细胞能培育出视网膜雏形，其根本原理是________。该过程是否实现了细胞的全能性？________。在体外诱导培养时，“特殊的培养介质”中除了加入________等天然成分，很可能还应添加有________，以诱导胚胎干细胞向视网膜雏形分化。

（3）用ATP合成酶基因作为探针，如果能与胚胎干细胞诱导培养过程中某细胞内的mRNA杂交，能否说明该细胞已发生分化？________，理由是________。

（4）假如研究人员在对“视杯”细胞中的某种酶进行提取时，向“视杯”细胞悬液中加入一定量的pH＝7.0的缓冲液并充分搅拌，获得了破碎的“视杯”细胞。与生理盐水相比，使用缓冲液的优点：________。

科学家通过诱导黑鼠体细胞去分化获得诱导性多能干细胞（iPS），继而利用iPS细胞培育出与黑鼠遗传特性相同的克隆鼠，流程如下：

（1）从黑鼠体内获得体细胞后，对其进行的初次培养称为_________；培养的细胞在贴壁生长至充满培养皿底时停止分裂，这种现象称为_______。

（2）图中2—细胞胚胎可用人工方法从灰鼠输卵管内获得，该过程称为__________；也可从灰鼠体内取出卵子，通过_____________后进行早期胚胎培养获得。

（3）图中重组囊胚通过____________技术移入白鼠子宫内继续发育，暂不移入的胚胎可使用_________方法保存。

（4）小鼠胚胎干细胞（ES）可由囊胚的______________分离培养获得，iPS与ES细胞同样具有发育的_______性，有望在对人类iPS细胞进行定向诱导分化后用于疾病的细胞治疗。

如图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计生产破伤风杆菌抗体的实验方案。请据图回答问题。

（1）该方案能达到预期效果吗？________，原因是                                                       。

（2）在制备破伤风杆菌抗体过程中之所以选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具有________________，________________的特性。

（3）在上图制备破伤风杆菌抗体的过程中，进行了两次筛选，其目的不同，②是通过筛选获___________，④是通过筛选获得 _______________________________。

（4）细胞悬液转入⑤瓶中进行的初次培养称为____________，悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为_____________。

（5）该技术利用的生物学原理有                                 。

（6）此过程中，常用的与植物细胞融合不同的诱导方法是              。

2016年 4月6日，世界上首个拥有“三位亲生父母”的健康男婴在墨西哥诞生。其培育过程采用如下技术路线。

据图回答下列问题：

（1）由于女性的自然周期产生的卵子太少，捐献者在取卵前通常需要注射____________激素，促使一次有更多的卵泡发育。受捐者也要注射相关激素，目的是____________________。

（2）重组细胞需培养到MⅡ中期的原因是该时期的卵母细胞才具备________________，重组细胞体外培养所需的气体主要是O₂和CO₂，CO₂的主要作用是______________。

（3）从受精卵到三亲婴儿的培育需要_________________和__________________等技术。

（4）三亲婴儿的培育技术________（填“能”或“不能”）避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代，而___________（填“能”或“不能”）避免母亲的红绿色盲基因传递给后代。三亲婴儿的染色体_____________（填比例）来自母亲提供的细胞核。

（5）设计试管婴儿技术与为解决不孕夫妇的生育问题而出现的试管婴儿技术主要区别是植入前对胚胎进行___________________。

图甲是抗寨卡病毒（一种RNA病毒）单克隆抗体制备的过程图，图乙是克隆羊培育过程示意图，请据图回答下列问题：

（1）图甲和图乙所示的过程中，应该都会用到的动物细胞工程技术是____________。

（2）图甲中②过程常需要借助动物细胞融合技术，其过程中动物细胞融合所特有的方法是使用____________诱导细胞融合。

（3）利用基因工程生产寨卡病毒的疫苗时，需要将重组DNA导入细菌细胞中，这一步骤常用的方法是____________。

（4）核移植时受体应选用_____________期的卵母细胞。

（5）在制备单克隆抗体的过程中，进行了两次筛选，第一次筛选是利用HAT______（填“选择”或“鉴别”）培养基，由于骨髓瘤细胞无法在HAT培养基上生存，故只有____________细胞能长期存活；第二次筛选获得____________。

（6）通过上述方法得到的抗体与常规的血清抗体相比最大的优点是______________。

运用现代生物技术改良奶牛或肉牛可提高经济产值，请回答下列问题：

（1）科学家构建含人乳铁蛋白（hLF）的基因表达载体，通过_____________将其导入受体细胞而获得转基因牛；构建上述基因表达载体时用同一种限制酶切割目的基因和运载体的理由是__________。

（2）日本科学家成功获取两头体细胞克隆的牛犊。操作者从荷兰奶牛体内分离出乳腺细胞并进行细胞培养，通常在培养液中加入___________等天然成分 。而后取出乳腺细胞的细胞核并将其导入到_____________中以获取重组细胞。若获得的克隆牛与供体牛性状不完全相同，从遗传物质的角度分析其原因最可能是________________。

（3）科学家在日本东京某养牛场还成功获取了由分裂的胚胎培育而成的4对试管双胞胎牛犊。获取试管牛需要进行体外受精，受精前需对精子进行______________处理，操作中可用激素对供体母牛进行________________处理以增加排卵量。