ES细胞(胚胎干细胞）在基础生物学、畜牧学和医学上有十分重要的应用价值。请回答下列问题：

（1）ES细胞在体外培养时，可以增殖而不发生分化。在ES细胞培养液中加入分化诱导因子___________(只填一种即可)时，就可以诱导ES细胞向不同类型的组织细胞分化。

（2）将人的ES细胞进行细胞培养时，要用__________酶分散细胞，制成细胞悬液，放入培养瓶中进行培养。使用合成培养基进行细胞培养时，通常需要加入_____________等天然成分。在细胞培养过程中，ES细胞主要通过_______________的方式进行细胞增殖。

（3）将来源于两种不同哺乳动物的两个ES细胞进行细胞融合，常用的生物诱导因素是____________，经融合后所形成的细胞被称为__________。动物细胞融合技术的意义在于__________________。

近年来，我国死于狂犬病的人数有上升趋势。狂犬病病毒的核酸是RNA，机体感染病毒后产生的特异性IgG抗体，能消灭狂犬病病毒，这是接触狂犬病病毒后及时注射疫苗和特异抗体的重要依据。我国利用地鼠的肾细胞培养狂犬病疫苗，已取得良好效果。

请根据上述材料，回答下列问题：

(1)巴斯德利用固定毒株制成减毒活疫苗，预防狂犬病，制成减毒活疫苗需要用________培养。

(2)特异性抗体获取可用单克隆抗体制备。在制备单克隆抗体的过程中，应用的动物细胞工程技术是______________________________________________。

①图中A过程从小鼠的脾脏中取得的“小鼠细胞”是________细胞，该细胞能够产生________。从小鼠体内提取分离该细胞之前，给小鼠注射的特定的物质是________。

②图中B过程是细胞融合，该过程需要用灭活的________、聚乙二醇或电激等诱导。

③特异性抗体获取的方法也可以采用向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。与这种方法制备的抗体相比，单克隆抗体具有________________________________________等优点。

(4)动物细胞体外培养需要满足的环境条件有_________________________。

(5)单克隆抗体的制备还有哪些用途？_______________________________________。

(1)ES细胞能分化出成体动物的所有组织和器官，这体现了ES细胞的_____________。为获得适合人体移植的猪器官，减弱或消除排斥反应，可对ES细胞进行___________。

(2)—个ES细胞变成ES细胞群的过程中，细胞_________(填“可能”、“不可能”)出现接触抑制现象。下列关于动物细胞培养和核移植的叙述，正确的是__________。

A.从原代培养物或细胞系中选择和纯化无法获得细胞株

B.动物细胞培养基中添加胰岛素的目的是调节血糖浓度

C.胚胎干细胞培养时，加滋养层是为了抑制胚胎干细胞分化

D.核移植形成的重组细胞在初次分裂时核基因不转录

(3)为获得含兔褐毛基因的转基因小鼠，可将褐毛基因通过_________法导入ES细胞核中，再将该核移植到去核的卵细胞中，经过_____________、胚胎培养、胚胎移植，最终由代孕母鼠产下克隆小鼠。

(4)为获得大量的上述克隆小鼠，可用转基因的小鼠胚胎成纤维细胞进行体细胞克隆。因为含有褐毛基因的胚胎成纤维细胞可进行__________培养，理论上可获得无限个转基因小鼠。

血管内皮生长因子（VEGF)是目前发现的诱导肿瘤血管生成的最强烈的血锌生成因子，针对VEGF生产的抗肿瘤药物，是治疗癌症的一个方向；芝加哥大学的Katherine Knight博士成功地在转基因兔中获得骨髄瘤样肿瘤，经技术改进，能高产量地生产兔单克隆抗体：我国江苏省某公司首次在全球成功开发出人源化兔单抗药物“注射用人源化抗VEGF单克隆抗体”(SIM63),有效打破了跨国公司的技术垄断。人源化抗体可以大大减少异源抗体对人类机体造成的免疫副反应。请回答下列相关问题：

(1)动物细胞在体外培养的技术属于_____________工程，动物细胞体外培养需要满足的条件是：____________、合适的营养、______________、气体环境。由于人们对动物细胞所需的营养物质没有完全搞淸楚，在使用合成培养基时，通常需要加____________等一些天然成分：在培养时除提供细胞所需的O₂外，还需要CO₂，其作用是_____________________ 。

(2)在基因工程中，将目的基因导入动物细胞现今极常用、极有效的方法是________       _。

(3)当VEGF作为抗原进入动物体内时，动物体内的某些B细胞分化为浆细胞，这种浆细胞只分泌针对VEGF的一种抗体，但B细胞在体外培养不会无限增殖，解决这一问题的方法是通过动物细胞融合技术得到杂交瘤细胞，常用的化学诱导融合试剂为____________ ，要分离出杂交瘤细胞,应该

用______________培养基进行筛选，单克隆抗体最主要的优点是它的______________________,并可大量制备。

（一）回答与果酒、果醋制作有关的问题。

（1）在酿酒过程中，酵母菌只有在无氧条件下才能进行__________。发酵开始时，发酵瓶内看不到气泡冒出的原因可能是酵母菌的________使发酵瓶内出现负压。

（2）下列各项中，与果酒中的酒精浓度有关的是 ____________________（多选）。

A.发酵时间                                     B.发酵温度

C.培养液中糖的含量                  D.酵母菌对酒精浓度的耐受程度

（3）不同地域所酿制的葡萄酒风味会有一定的差异，出现风味差异的原因除了与当地相应的土壤、气候等地理环境因素和葡萄品种有关外，还可能与不同地域酿酒时所用的_____________________等生物因素有关。

（4）在利用果酒制作果醋过程中，如果已获得醋化醋杆菌菌种，可先在液体培养基中进行·              培养，然后接种到发酵瓶中。发酵瓶下口直角玻璃管内塞有松紧合适的脱脂棉球，其作用是_______________。开始收集果醋前，应检测发酵瓶流出液的_____________________。

（二）毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIF-Ⅱ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转 KIF-Ⅱ 基因的高绒质绒山羊的简单流程如图：

（1）转基因过程用到的工具酶有___________和_______________________。

（2）在过程②中，用_________________处理将皮肤租住分散成单个成纤维细胞。由于人们对动 物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚，因此在培养细胞时需在培养基中加入一定量的 __________________________ ，在培养过程中，应将培养瓶置于_____________________中培养。

（3）要获得多只相同的转基因山羊， 可对图中早期胚胎进行___________后进行胚胎移植。

（4）下列有关基因工程的叙述，正确的是______________________  。

A.切割目的基因和载体DNA 时为获得相同的粘性末端，必须用相同的核酸内切酶

B.基因工程的原理是基因重组，其核心是上图中的过程④

C.图示过程获得的转基因绒山羊并不是克隆动物

D.重组表达载体上含有 RNA 聚合酶的识别位点

据《自然》杂志介绍，日本研究人员利用实验鼠的胚胎干细胞人工培育出了名为“视杯”的视网膜雏形结构。据悉，在一种特殊的培养介质中，来自实验鼠的胚胎干细胞能逐渐发育成感光细胞、神经细胞等，进而形成视网膜的雏形结构。研究人员现正在测试该“视杯”是否真能感受光线刺激，并将相关神经信号传递给实验鼠的大脑。

（1）实验鼠的胚胎干细胞________（填“具有”或“不具有”）细胞周期，可取白________。

（2）利用实验鼠的胚胎干细胞能培育出视网膜雏形，其根本原理是________。该过程是否实现了细胞的全能性？________。在体外诱导培养时，“特殊的培养介质”中除了加入________等天然成分，很可能还应添加有________，以诱导胚胎干细胞向视网膜雏形分化。

（3）用ATP合成酶基因作为探针，如果能与胚胎干细胞诱导培养过程中某细胞内的mRNA杂交，能否说明该细胞已发生分化？________，理由是________。

（4）假如研究人员在对“视杯”细胞中的某种酶进行提取时，向“视杯”细胞悬液中加入一定量的pH＝7.0的缓冲液并充分搅拌，获得了破碎的“视杯”细胞。与生理盐水相比，使用缓冲液的优点：________。

科学家通过诱导黑鼠体细胞去分化获得诱导性多能干细胞（iPS），继而利用iPS细胞培育出与黑鼠遗传特性相同的克隆鼠，流程如下：

（1）从黑鼠体内获得体细胞后，对其进行的初次培养称为_________；培养的细胞在贴壁生长至充满培养皿底时停止分裂，这种现象称为_______。

（2）图中2—细胞胚胎可用人工方法从灰鼠输卵管内获得，该过程称为__________；也可从灰鼠体内取出卵子，通过_____________后进行早期胚胎培养获得。

（3）图中重组囊胚通过____________技术移入白鼠子宫内继续发育，暂不移入的胚胎可使用_________方法保存。

（4）小鼠胚胎干细胞（ES）可由囊胚的______________分离培养获得，iPS与ES细胞同样具有发育的_______性，有望在对人类iPS细胞进行定向诱导分化后用于疾病的细胞治疗。