为了给水牛体外胚胎产业化生产中合理使用亚麻酸提供理论依据，科研人员研究了不同浓度的亚麻酸对水牛卵母细胞体外成熟、早期胚胎发育的影响，分析回答：

①卵母细胞的收集和体外培养：从屠宰场水牛的卵巢中收集并处理卵母细胞，随机分成5组，分别置于不同浓度亚麻酸的培养液中，在恒温的培养箱中培养22-24h。

②卵母细胞成熟判断：在显微镜下观察卵母细胞，判断其是否成熟，统计结果如表。

③体外受精：在受精溶液中进行体外受精后，用显微镜观察判断是否完成受精。

④早期胚胎培养：将受精卵移入胚胎培养液中培养44-48h后检查分裂情况，每隔48h更换一次培养液，第5-9天观察囊胚发育情况。

如表亚麻酸对水牛卵母细胞体外成熟的影响

（1）步骤①中，细胞培养箱中加5%CO₂的作用是____________。

（2）步骤②中，卵母细胞发育到____________时期才能与获能的精子受精；步骤③中，判断是否受精的依据是____________。

（3）步骤④中，受精卵经过卵裂期、____________（时期）发育成囊胚，培养过程定期更换培养液的目的是____________。

（4）根据实验数据分析，亚麻酸溶液为200μmol·L^-1时，对水牛卵母细胞体外成熟和囊胚发育起____________作用（填“促进”、“抑制”）。

（5）将囊胚移植到受体（代孕母牛）子宫内，最终生出的犊牛和受体遗传上有无亲缘关系？____________原因是___________

____________。

用医学手段培育“三亲婴儿”可以解决遗传基因带来的缺陷，其培养过程如图所示．请据图回答有关问题：

（1）由于女性的自然周期产生的卵子太少，捐献者在取卵前需要注射________激素，促使一次有更多的卵泡发育。重组细胞体外培养所需的气体主要是O₂和CO₂，CO₂的主要作用是___________________。

（2）从受精卵到三亲婴儿的培养还需要______和______等技术。三亲婴儿的培育方式属于____________生殖．

（3）三亲婴儿的培育技术______（填“能”或“不能”）避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代。三亲婴儿的染色体______（填比例）来自母亲提供的细胞核．设计试管婴儿技术与为解决不孕夫妇的生育问题而出现的试管婴儿技术主要区别是植入前对胚胎进行_____________________。

（1）若分离以尿素为氮源的细菌。在含有___酶的细菌菌落周围会出现，这是由于尿素被分解产生的氨气使PH升高，______指示剂产生颜色变化。采用______法将发酵菌株固定在锯末上制成固定化菌株，可大幅缩短生产周期,降低生产成本和提高生产效率。

(2)亚硝酸盐测定原理:亚硝酸盐可与________________发生重氮化反应.这一产物再与____________________偶联,形成__________色产物。

（3）获得目的基因，获取已知目的基因序列用化学方法合成或_________________

基因工程的核心:通常用_________________分别切割目的基因和载体DNA，然后用________将目的基因和载体DNA连接在一起,形成重组DNA分子。

（4）卵巢经超数排卵处理后，要使用__________________确定卵泡的位置。     

 科研人员单独培养胚胎干细胞，首先需要在培养皿底部制备一层______细胞，称为饲养层。 利用动物细胞培养技术中的细胞具有________________和__________________的特点可用烧伤患者自身的健康皮肤细胞培养出大量自身薄层皮肤细胞，用于移植。

（5）植物克隆和动物克隆共有的培养方法是_______

A.原生质体培养、传代培养     B.贴壁培养、传代培养 

C.器官培养、愈伤组织培养     D.悬浮培养、器官培

某课题组为解决本地奶牛产奶量低的问题，引进了具高产奶基因但对本地适应性差的 纯种公牛。

（1）拟进行如下杂交。

♂A（具高产奶基因的纯种）╳♀B（具适宜本地生长基因的纯种）→C

若C中的母牛表现为适宜本地生长，但产奶量并不提高，说明高产奶是______性状。为获得产奶量高且适宜本地生长的母牛，根据现有类型，最佳杂交组合是________，后代中出现这种母牛的概率是______（假设两对基因分别位于不同对常染色体上）。

（2）用以上最佳组合，按以下流程可加速获得优良个体。

①  动物细胞培养是动物细胞工程最基础的技术。在此技术中单细胞的获取通常需要用________进行处理，动物细胞在培养过程中培养箱所需的气体环境为___________。在培养过程中，应定期更换培养液，其目的是__________。

② 精子要具有受精能力，需对其进行_________处理；卵子的成熟在过程______（填图中序号）中完成。胚胎发育过程中胚胎从透明带中伸展出来的过程叫做__________。

③ 为了提高已有胚胎的利用率，可采取_________技术。④～⑤过程需要用到________技术，在畜牧生产中采用这种技术的优势是_______________。

欲研究药物乙对海拉细胞增殖的抑制作用，请根据以下提供的材料与用具，以海拉细胞的细胞数变化为测定指标，完善实验分组设计和实验思路，预测实验结果并进行分析与讨论。

材料与用具：海拉细胞悬液，药物甲溶液（对细胞增殖有促进作用），药物乙溶液，培养液、培养瓶，血细胞计数板，显微镜等。

（要求与说明：细胞计数的具体操作过程不做要求，不考虑加入溶液对体积的影响，实验条件适宜）

回答下列问题：

（1）实验分组设计：

A组：海拉细胞悬液+培养液

B组：海拉细胞悬液+培养液+__________

C组：海拉细胞悬液+培养液+药物甲溶液，培养一段时间后，加入________________

（2）完善实验思路：

 ①取等量细胞悬液分别加入到含等量培养液的培养瓶中，用________________在显微镜下计数并记录

②将_______海拉细胞悬液分别加入到A、B、C三组培养瓶中进行培养

③每隔一段时间分别测定三组培养瓶中的______并记录

④当细胞增殖达一定数量时，向C组中加入药物乙溶液

⑤重复③，对所得数据进行______

（3）预测实验结果（以坐标曲线图形表示实验结果，并标出加入药物的时间）

为提供治疗乳腺癌的新思路，科研人员检测到乳腺癌细胞内蛋白A的表达量高于癌旁组织。为了探讨蛋白A与乳腺癌细胞增殖的关系，请根据以下提供的实验材料及结果完善实验思路并分析。

实验材料：体外培养乳腺癌细胞株MCF﹣7悬液、动物细胞培养液、浓度为50mmol/L的X溶液（用B液体配置）、B液体等。（要求与说明：实验初始时等量细胞悬液中细胞数量相等，细胞培养条件适宜。实验仪器、试剂、用具操作不做要求。）

请回答：

（1）实验思路：

①取培养瓶若干随机均分为6组，编号为A、B、C、D、E、F

②用B液体将50mmol/L的X溶液进行稀释，得到浓度依次为40mmol/L、30mmol/L、20mmol/L、10mmol/L的X溶液。

③_____________________________________________________________________

④在相同适宜条件下培养一段时间后，分别测定并记录每只培养瓶细胞数、培养液中腺嘌呤剩余浓度，破碎细胞后，再测蛋白A浓度。

⑤对所得实验数据进行分析与处理

（2）分析与讨论：

本实验所得结果如图所示：

①据此结果推测：物质X与乳腺癌细胞增殖、蛋白A合成及腺嘌呤吸收量的关系为______

②基于以上实验及分析，请你提出一种治疗乳腺癌的新思路___________________________

③测定细胞数时，将细胞悬浮液加胰蛋白酶处理后，可使用______在显微镜高倍镜下镜检计数