下图表示某科学家利用胚胎干细胞对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗的相关过程，据图回答下列问题：

（1）步骤①②利用的技术名称分别是                 、                     。图中造血干细胞中的遗传物质至少有         个来源。

（2）若利用PCR技术扩增目的基因并完成图示小鼠的基因治疗，涉及的酶有限制性核酸内切酶、DNA连接酶、耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）和                  等。

（3）下图所示的一个质粒分子经EcoRⅠ切割前后，分别含有      、          个游离的磷酸基团。由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，故利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从下图A、B、C、D四种单链DNA片段中选取       作为引物。一个目的基因通过PCR技术扩增第n次时，需要        个引物。

（4）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发       色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否转录，可以采用                        的技术。

随着妊娠年龄的增加，21一三体的发病风险在不断增加．需要进行产前诊断来预防患病孩子的产生。常用的方法有：

  (1)唐氏筛查：抽取孕妇血液化验，检测血清中的甲型胎儿蛋白、绒毛膜促性腺激素等指标。检测这些物质可用__________技术，以细胞工程技术生产的、纯度高的_____________为试剂进行检测，筛查出的高危孕妇还需要进一步检查鉴定。

  (2)羊水检查：胎儿的某些细胞会脱落在羊水中，通过羊水穿刺，可以得到胎儿的细胞。将这些细胞通过___________技术以扩大细胞的数量，选择______的细胞进行染色体核型分析，了解胎儿细胞染色体的结构和___________是否正常。

  (3)无创基因检测：在孕妇的血液中存在胎儿游离DNA片段，可以对21号染色体上的特有基因DSCR₃和非21号染色体上的基因GAPDH(做参照)进行实时荧光定量PCR扩增，以测定DSCR₃基因和GAPDH基因的含量，计算2种基因剂量的比值。如：

  要利用胎儿游离的DNA片段扩增出相应的基因，关键是_________的设计。从上述表格看，正常人与21-三体患者的比值有差异，其主要原因是____________利用该技术筛查21-三体的胎儿是否可靠，请说明理由：_____________。

癌症是一种由于基因突变的细胞发生异常大量累积而形成的。癌症基因疗法几乎没有耐药性，因此即使患者在化疗和放疗过程免疫力低下的情况下，也同样可以接受基因治疗。研究人员设计了三种治疗方案：

(1)方案一：研究人员从病人体内提取“T细胞”，利用______________技术在体外完成基因的转移，然后将成功转移的细胞进行______________增加细胞的数量，最后将这些改变了的“T细胞”成功移植回到患者体内，这些改变了的“T细胞”识别攻击癌细胞。

(2)方案二：研究人员利用修饰的腺病毒5号作为______________，将Endostatin基因和Interferon基因等有治疗效果的基因导入癌细胞内。对腺病毒进行修饰的目的是使病毒______________，但能够复制增加相关基因的数量。

(3)方案三：新型基因疗法JG-1是结合CDC6shRNA活性基因和癌抑制基因pl6这两种基因的强有力的疗法。“CDC6shRNA活性基因”的使用原理着眼于癌细胞具有______________的特性，它能消灭在癌细胞里存在的一种被称为CDC6的DNA的复制因子。然后通过pl6来修复抑癌基因Rb路径上的起效机制，并促使癌细胞在刚开始增殖阶段即停止增殖。

(4)对癌细胞进行体外培养时，可以形成_____________________________________________层细胞，这是由于癌细胞的细胞膜表面的糖蛋白减少的原因，使癌细胞培养时不具有原代培养的____________和______________的特点。

科学家从哺乳动物早期胚胎中分离出一类胚胎干细胞(ES细胞)，并进一步将ES细胞诱导分化为某些组织细胞。回答下列问题：

(1)胚胎干细胞(ES细胞)可由囊胚的__________________________分离培养获得，其可产生多种多样的细胞的根本原因是__________________。

(2)获得的动物细胞进行培养时，一般需控制在10代以内，原因是__________________________。

(3)离体培养胚胎干细胞时，一般需要在合成培养基中加入____________等天然成分，培养时所需的气体主要有O₂和CO₂，CO₂的主要作用是______________。

(4)研究发现，细胞因子能够调控某动物干细胞分化。放线菌素D能通过阻碍RNA聚合酶的功能进而抑制细胞因子的调控，由此推断该抑制过程发生在____________(填"复制""转录"或"翻译")水平。

(5)研究还发现，胚胎干细胞可以诱导分化为造血干细胞等各种细胞，这体现了胚胎干细胞具有__________________的特点，临床上可用诱导干细胞定向分化的方法修补损伤或衰老的组织器官，从而解决______________问题。

艾滋病病毒(HIV)外壳的包膜上有多种蛋白质，其中包膜糖蛋白(env)基因编码gpl60蛋白，进一步加工成gpl20蛋白，具有较强的抗原性。制备抗HIVgpl20的单克隆抗体，为艾滋病的治疗带来希望。清回答下列问题：

  (1)若利用动物细胞工程制备抗HIVgpl20的单克隆抗体，涉及到的技术手段主要有动物细胞培养技术和________技术。

  (2)细胞融合常用的生物诱导剂是__________。融合后需要用特定的选择性培养基筛选，只有融合的__________才能生长，这种细胞的特点是______________________________。

  (3)若要大量制备该单克隆抗体，可将筛选出来的细胞进行体外培养，在培养液中通入一定浓度的CO₂，主要作用是_______________________________________。

  (4)科研人员设想用基因工程制备能表达抗HIVpl20抗体的重组细胞，获得目的基因可利用PCR技术扩增，需要在反应体系中添加的有机物有__________、模板DNA、Taq酶和4种脱氧核苷酸。利用________法将目的基因导入骨髓瘤细胞。基因工程的核心是______________________。

  (5)现代生物工程技术不仅推动了免疫学的发展，对畜牧业的发展也起到了积极的推动作用。用细胞核移植技术繁育良种牛的过程需要进行胚胎移植，移植前需要对受体牛进行________技术处理，受体对外来胚胎基本不发生____________，为胚胎在受体内的存活提供了可能。

“生物导弹”是免疫导向药物的形象称呼，由单克隆抗体与药物配合而成。单克隆抗体能自动导向，在生物体内与特定目标细胞或组织结合，并由其携带的药物产生治疗作用。单克隆抗体的制备过程如下图所示，分析回答下列问题：

(1)图中A过程是从小鼠的脾脏中取得____细胞，提取该细胞之前，给小鼠注射的特定物质相当于______；B过程得到的杂交瘤细胞的特点是__________________。

(2)体外培养杂交瘤细胞的培养基与用于植物组织培养的培养基在物理性质上的主要区别是前者要用____，从培养基的成分来看，前者培养基中除了添加必要的营养物质外还需要加入含天然成分的____________。

(3)特异性抗体也可以通过常规方法来制备：向动物反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物的血清中分离所需抗体。与这种常规方法相比，单克隆抗体具有____________________________等优点（答出三点即可）。制备单克隆抗体的过程中至少需要____次对细胞的筛选。

1997年英国学者韦尔穆特，用成年绵羊的乳腺细胞的细胞核移植到去核卵母细胞中，最终得到了克隆羊多利。请回答下列有关问题：

(1)动物细胞在体外培养时，需要给细胞提供必要的营养条件，由于人们对动物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚，所以在使用合成培养基时要加入________等天然成分，出于动物细胞在体外培养时，具有________现象，为了让细胞继续增殖，一定时间后需用________酶处理，然后进行传代培养。

(2)目前人类还不能直接利用体细胞来培育出新的动物，所谓的克隆动物，实际是通过________来实现的，要使供体细胞核与卵母细胞融合要通过________，并利用电脉冲、乙醇和蛋白酶合成抑制剂等来________受体细胞，使其完成细胞分裂和发育进程。

(3)在体外培育的胚胎细胞要移植到受体母羊子宫内，外来胚胎能在受体内存活的生理基础是受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生________反应，并且外来胚胎与受体子宫可建立正常的________联系，在孕育过程中其遗传特性不受任何影响。

I.[生物一选修1:生物技术实践]

酵母菌是生物科学研穷中一种重要的生物材料，请回答：

（1）酵母菌的新陈代谢类型是__________，其细胞内将葡萄糖分解为酒精的酶存在于__________。

（2）某同学尝试用新鲜葡萄制作葡萄酒、为验证发酵液中含有酒精，取2mL发酵液加入试管中，滴加O.5mL浓硫酸酸化的重铬酸钾溶液并轻轻震荡，观察到溶液变__________色，则证明发酵液中含酒精。

（3）研究者利用基因工程技术改造酵母菌，得到如下四种变异菌株：①菌株Ⅰ——不能合成纤维素酶，菌株Ⅱ——合成的纤维素酶不能分泌到细胞外，菌株Ⅲ——合成的纤维素酶能分泌到细胞外，菌株Ⅳ——合成的纤维素酶分泌并固定于细胞壁。

在以纤维素为唯一碳源的培莽基上能生长繁殖形成菌落的是菌株_______，若在培养基中加入_______，则菌落周围会出现透明圈。在利用纤维素生产酒精时，与菌株Ⅲ相比，菌株Ⅳ的纤维素酶的利用率高，因为______________________________________________________________。

（4）为研究发酵罐中酿酒酵母菌的生长情况，常要取样统计分析，并测定pH值。若某研究人员将样品的次序搞乱了，那么判断取样顺序的主要依据基__________（填“酵母菌的数量”或“发酵液的pH”）。

II.[生物一选修3:现代生物科技专题]

内皮抑素是一种效果良好的新型抗癌药物，由胶原XⅤⅢ（广泛存在于肝脏等组织中）降解产生。我国科学家研制成含转入内皮抑素基因双歧杆菌的口服液，口服后，双歧杆菌在肠道定植、繁殖，双歧杆菌死亡裂解后，其产生的内皮抑素活性片段被吞噬、转运到肿瘤组织发挥作用。回答下列问题：

（1）要利用逆转录的方法合成人内皮抑素基因，应从__________组织细胞中提取mRNA，与细胞中内皮抑素基因相比，这种方法合成的cDNA没有__________、启动子、终止子等。

（2）根据内皮抑素基因的脱氧核苷酸序列设计并合成引物，利用__________技术得到大量内皮抑素基因。

（3）临床上也有通过静脉注射内皮抑素基因重组腺病毒，使肿瘤生长受到抑制。在进入临床使用前需要进行目的基因的检测与鉴定：用胰蛋白酶将血管内皮组织___________，制成细胞悬液→转入

含_____________________等天然成分的培养液中培养得到大量血管内皮细胞→用重组腺病毒感染血管内皮细胞，若抗原—抗体杂交检测呈阳性并观察到细胞凋亡，则说明_________________。

（4）口服含转入内皮抑素基因双歧杆菌口服液、静脉注射内皮抑素基因重组腺病毒，两种方法都能使肿瘤生长受到抑制，其中属于体内基因治疗的是__________（填“第一种”或“第二种”）。

（1）图中过程_____________(填序号)是获得核移植克隆猪的技术流程。   

（2）孤雌激活处理其实质是要激活卵母细胞的_______________，使其发育成早期胚胎，得到克隆猪。

（3）体细胞核移植技术中也会用到卵母细胞，需要选择_________时期的卵母细胞，并用微型吸管吸出_________。欲得到更多的卵母细胞，需用__________处理良种母猪。

（4）早期胚胎移植时，必需移植到同种____________的其他雌性动物子宫中，才可能移植成功。

（5）可以从良种不同的克隆猪中提取mRNA直接进行研究，也可通过        方法得到多种cDNA，并通过_____技术扩增产物

（1）制备单克隆抗体的步骤：             

①将抗原注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细胞，其中至少1个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。

②由图中可看出，单克隆抗体制备过程运用了           和          的动物细胞工程技术手段，前者常用的诱导剂与植物原生质体融合不同的是                。

③将诱导后产生的多种细胞，放在含________培养基的多孔培养板上培养，筛选。

④这样获得的杂交瘤细胞既具有B淋巴细胞                                  的能力，又具有______________________________的本领。

⑤检测和分离带有抗X抗体的阳性细胞，培养板中每孔放一个细胞进行培养。

⑥将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原的单克隆抗体。

（2）单克隆抗体是由同样的抗体分子组成，与一般的血清抗体相比，单克隆抗体的优点是 _______________________________________。

（3）用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因为它是用小鼠的_____________细胞制备的，其化学本质是___________，对人类有异物性和免疫原性。

（4）动物细胞培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，与植物细胞培养基有所不同的是，还含有                            。

（5）图中有两次筛选过程，其中步骤④的目的是筛选出                                     ，步骤⑤的目的是筛选出                                                     。