研究表明从母瘤分离脱落的癌细胞首先要与正常细胞粘附才能转移。为研究物质X对癌细胞同毛细血管内皮细胞间粘附的影响，请根据以下提供的实验材料与用具，完善实验思路，预测实验结果并进行分析与讨论。

材料与用具：培养瓶若干个、液体培养基、物质X、癌细胞细胞株、内皮细胞悬液、CO₂培养箱、

胰酶、PBS溶液（用于洗去未粘附的细胞）

(要求与说明：不考虑培养液成分变化对培养物的影响；实验条件适宜）

(1)实验思路：

①取培养瓶若干个均分为三组，分别加入等量且适量的液体培养基和内皮细胞悬液，置于37°C的CO₂培养箱中培养24h，使培养瓶中铺满单层内皮细胞。

②________________________________________________________________________

③同时分别____________________________________。置于37°C的CO₂培养箱中培养一段时间。

④用PBS溶液洗去未贴壁的细胞，测定相关值并计算细胞粘附率。

⑤对实验数据进行分析与处理。

(2)下图为实验所测得的细胞粘附率，请根据图示结果，用文字描述该实验结果并得出实验结论:

​

 (3)分析与讨论

①实验用的癌细胞细胞株可以通过________________________法建立。获取癌细胞时需用_________处理癌细胞株，将癌细胞转入含内皮细胞的培养瓶后所进行的培养称为________________培养。

②导致癌细胞从母瘤分离脱落的原因可能是___________________。根据实验可推测：物质X可能是通过减少肿瘤细胞同毛细血管内皮细胞的粘附率，来达到___________________的作用。

编码蛋白甲的DNA序列(序列甲)由A、B、C、D、E五个片段组成，编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成，如图1所示。

回答下列问题：

现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白，要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用，某同学做了如下实验：将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组，其中三组分别加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定期检测T淋巴细胞浓度，结果如图2。

①由图2可知，当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采用的方法是________________。细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO₂浓度，CO₂的作用是________________。

②仅根据图1、图2可知：上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺少________________(填“A”“B”“C”“D”或“E”)片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果。

埃博拉病毒（EBOV）是一种能引起人类和灵长类动物发生埃博拉出血热（EBHF）的烈性病毒，利用相应的生物学技术制备出抗EBOV的单克隆抗体，可快速检测EBOV。请回答下列问题：

（1）方法一：给小鼠注射纯化的EBOV蛋白，一段时间后，从小鼠的________中获取浆细胞，将获得的浆细胞与小鼠的________细胞融合，再经过至少________次筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞。

（2）方法二：科学家从细胞中分离出无限增殖基因（prG），可将prG基因导入能产生抗EBOV抗体的小鼠浆细胞中，导入prG基因的浆细胞具有________的特点。

（3）以上两种方法获得的杂交瘤细胞或带有prG基因的浆细胞，可在________的环境、营养、适宜的________和一定的气体环境等条件下进行体外培养，以便源源不断的产生抗EBOV的单克隆抗体。

（4）方法二中，若用PCR扩增方法获取目的基因，则需要用到________酶，该方法能够成功获取目的基因的前提是________，以便合成引物。

“探究”是高中生物学习的重要内容，是以设计实验和进行实验为核心的实践活动。请回答下列问题：

（1）探究酵母菌在氧气充足条件下不能进行酒精发酵的原因是氧气抑制了酵母菌的无氧呼吸，还是有氧呼吸产生的ATP抑制了酵母菌的无氧呼吸的实验：

材料用具：锥形瓶、含酵母菌的培养液（试剂1）、酵母菌破碎后经离心处理得到的只含有酵母菌细胞质基质的上清液（试剂2）和只含有酵母菌细胞器的沉淀物（试剂3）、质量分数5%的葡萄糖溶液、ATP溶液、蒸馏水、橡皮管夹若干、其他常用器材和试剂。

实验步骤：

①取锥形瓶等连接成如上图所示的装置三套，依次编号为A、B、C，设定A套为对照组。锥形瓶1中都加入等量的质量分数为10%的NaOH溶液，锥形瓶3中都加入等量的澄清的石灰水。

②A装置的锥形瓶2中加入    ；B装置的锥形瓶2中加入10 mL试剂2、10 mL质量分数5%的葡萄糖溶液、2 mL ATP溶液；C装置的锥形瓶2中加入10 mL试剂2、10 mL质量分数5%的葡萄糖溶液、2 mL蒸馏水。

③A、B、C三套装置均先持续通入氮气1 min，除去锥形瓶中的氧气，再将A、B、C三套装置分别作如下处理：A套持续通入氮气，B套持续通入  ▲  ，C套持续通入    。

④将三套装置放在相同且适宜条件下培养10 h。

⑤观察    ，判断酵母菌是否进行无氧呼吸。

（2）探究二氯二乙胺能否抑制癌细胞增殖的实验：

材料用具：肝部长有肿瘤的小鼠，不同浓度的二氯二乙胺溶液，蒸馏水，生理盐水，含有全部营养物质的细胞培养液，显微镜，血球计数板，试管，吸管等。

实验步骤：

a.取洁净的培养皿一个，加入适量培养液，从小鼠肝部切取肿瘤组织，剪碎，并用胰蛋白酶处理，使其分散开来，置于培养皿中培养；

b.取洁净的试管5支，加入等量培养液，编号1、2、3、4、5，并在1～4号试管中加入等量的不同浓度的二氯二乙胺溶液，5号试管中加入    ；

c.从培养皿中吸取等量的培养液置于1～5号试管中，振荡后，在适宜条件下培养—段时间；

d.从静置的5支试管中吸取适量的培养液置于血球计数板上，在显微镜下计数，记录数据。

实验分析：

①该实验的实验组是    号试管。上述实验步骤d中测量到的数据是否准确，请判断并作出解释：   。

②另有同学按照正确的方法进行实验，得到如下图结果：

根据以上实验结果，你能得出的结论有：二氯二乙胺能抑制癌细胞增殖，且在一定范围内，随二氯二乙胺浓度的增大，抑制作用    。

癌症是一种由于基因突变的细胞发生异常大量累积而形成的。癌症基因疗法几乎没有耐药性，因此即使患者在化疗和放疗过程免疫力低下的情况下，也同样可以接受基因治疗。研究人员设计了三种治疗方案：

(1)方案一：研究人员从病人体内提取“T细胞”，利用______________技术在体外完成基因的转移，然后将成功转移的细胞进行______________增加细胞的数量，最后将这些改变了的“T细胞”成功移植回到患者体内，这些改变了的“T细胞”识别攻击癌细胞。

(2)方案二：研究人员利用修饰的腺病毒5号作为______________，将Endostatin基因和Interferon基因等有治疗效果的基因导入癌细胞内。对腺病毒进行修饰的目的是使病毒______________，但能够复制增加相关基因的数量。

(3)方案三：新型基因疗法JG-1是结合CDC6shRNA活性基因和癌抑制基因pl6这两种基因的强有力的疗法。“CDC6shRNA活性基因”的使用原理着眼于癌细胞具有______________的特性，它能消灭在癌细胞里存在的一种被称为CDC6的DNA的复制因子。然后通过pl6来修复抑癌基因Rb路径上的起效机制，并促使癌细胞在刚开始增殖阶段即停止增殖。

(4)对癌细胞进行体外培养时，可以形成____________________层细胞，这是由于癌细胞的细胞膜表面的糖蛋白减少的原因，使癌细胞培养时不具有原代培养的____________和______________的特点。

很多癌症只有当个别细胞脱离主要的肿瘤，通过血液循环到达身体中其他的地方才会形成继发性肿瘤，造成致命的危害。研究者利用小鼠进行了活体实验，将癌细胞通过静脉注射入小鼠体内，发现不同类型的癌细胞均能“杀死”血管壁中的特定细胞(内皮细胞)并跨越内皮细胞屏障，从而离开血管建立起转移癌(如图l所示)。

(1)为证实该发现，研究者在离体条件下做了细胞培养实验加以验证：

①将葡萄糖、氨基酸、无机盐等物质加入培养瓶中，该培养基往往还需添加________等特殊物质，以保证营养成分的全面。

②向实验组培养液中加入适量的________细胞和内皮细胞；向对照组中加入________，一段时间后，用显微镜直接计数法统计两组细胞的死亡率。

(2)研究者进一步揭示了癌细胞诱导内皮细胞死亡的机理(如图2所示)，请据图回答：

①在血管壁内皮细胞表面存在一种信号转导分子——DR6(死亡受体6)，当癌细胞接触到内皮细胞时，癌细胞表面的信号转导分子——________便会激活DR6，这标志着癌细胞开始对血管壁进攻。

②与坏死不同，程序性细胞死亡是一种由死亡受体介导，细胞主动死亡的过程，需要依赖________(细胞器)参与才能完成细胞自吞噬。

(3)研究者推测：癌细胞诱导内皮细胞死亡的过程为程序性死亡，且该过程能够被细胞信号转导抑制剂阻断。

①欲证明该推测成立，研究者利用两种细胞信号转导抑制剂设计了三组实验，其中的两个实验组中应分别添加________和________的抑制剂。

②通过观察，若出现________的实验现象，则证明研究者的推测正确。

（1）科学家在DNA分子水平上对相关酶进行改造是通过对基因的________来实现的，这属于________工程；通过该技术提高了赖氨酸的含量，体现了基因可通过________________进而控制生物的性状。

（2）为检测转基因玉米的安全性，可采用动物细胞培养的方法，其培养液中要加入糖、氨基酸、无机盐、微量元素和________等，细胞培养中还需通入CO₂，其主要作用是________________________________________。

（3）为获得更多的氮元素以提高玉米氨基酸的合成量，科学家尝试培育玉米—大豆杂种植株，在进行体细胞杂交之前，必须先利用________酶处理植物体细胞，获得具有活力的________，才能诱导融合，杂种细胞通过培养获得愈伤组织后，将愈伤组织转接到________培养基上，就可以诱导出试管苗。

（4）在不同蛋白质的分离提取中，常用的方法是________，利用该方法最先分离出________的蛋白质；

（5）在玉米根尖DNA的粗提取中，获得DNA滤液前需向切碎的玉米根尖中加入________，得到滤液后可通过控制________的浓度来去除杂质，最后得到的DNA可用________试剂进行检测。

某生物兴趣小组对一种抗癌新药进行实验时，以动物肝癌细胞为材料，测定抗癌药物对体外培养细胞增殖的影响。请回答下列有关动物细胞培养的问题。

(1)在动物细胞培养时，通常在培养基中还需要加入适量____等一些天然成分。细胞培养应在含5% CO₂的恒温培养箱中进行，CO₂的作用是____。

(2)若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需要用________处理。

(3)在细胞生长过程中，当细胞贴壁生长到一定程度时，其生长会受到抑制，这种现象称为________。

(4)为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的________。

神经生长因子蛋白（NGF）能给神经元提供营养和促进突起生长，能调控神经元的发育、分化、生长和再生。下图是利用奶牛乳汁生产NGF的图解，请据图回答下列问题：

（1）要获得单个成纤维细胞，过程②需用_____处理奶牛胎儿的皮肤组织块。

（2）为获得较多的卵细胞，可给供体母牛注射_____，以促进排卵。采集到的卵细胞最好是发育到_____期，此时才具有受精能力。

（3）从A到B过程中所用的胚胎工程技术是_____。在过程⑥进行前，需要对代孕母牛做_____处理，以便给供体胚胎移入受体提供相同的生理环境。

（4）若要一次获得多只相同的转基因牛，可采用_____技术。