图1图2

(1) 为证实该发现,研究者在离体条件下做了细胞培养实验加以验证:

①将葡萄糖、氨基酸、无机盐等物质加入培养瓶中,该培养基往往还需添加____等特殊物质,以保证营养成分的全面。 

②向实验组培养液中加入适量的____细胞和内皮细胞;向对照组中加入________,一段时间后,用显微镜直接计数法统计两组细胞的死亡率。 

(2) 研究者进一步揭示了癌细胞诱导内皮细胞死亡的机理(如图2所示),请据图回答:

①在血管壁内皮细胞表面存在一种信号转导分子——DR6(死亡受体6),当癌细胞接触到内皮细胞时,癌细胞表面的信号转导分子——____ 便会激活DR6,这标志着癌细胞开始对血管壁进攻。 

②与坏死不同,程序性细胞死亡是一种由死亡受体介导,细胞主动死亡的过程,需要依赖____(细胞器)参与才能完成细胞自吞噬。 

(3) 研究者推测:癌细胞诱导内皮细胞死亡的过程为程序性死亡,且该过程能够被细胞信号转导抑制剂阻断。

①欲证明该推测成立,研究者利用两种细胞信号转导抑制剂设计了三组实验,其中的两个实验组中应分别添加____和____的抑制剂。 

②通过观察,若出现________的实验现象,则证明研究者的推测正确。 

(1) 上述过程涉及的现代生物工程技术中属于分子水平的技术是____________。 

(2) 图中B过程常用______法将绿色荧光蛋白基因导入成纤维细胞中。 

(3) C过程要获得单个的成纤维细胞进行培养,需用_______处理猪胚胎的部分组织;E过程中若要获得大量的卵母细胞,需用____处理成年母猪;在进行H过程之前,需要对代孕母猪进行____处理。 

(4) H过程前,若要进行胚胎分割,用分割针或分割刀片将胚胎切开,吸出其中的半个胚胎,注入预先准备好的____中,或直接将____移植入受体。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时,要注意将内细胞团均等分割,否则会影响分割后胚胎的_______。 

下图表示通过核移植等技术获得某种克隆哺乳动物（二倍体）的流程。

回答下列问题：

（1）图中A表示正常细胞核，染色体数为2n，则其性染色体的组成可为____________。过程①表示去除细胞核，该过程一般要在卵母细胞培养至适当时期再进行，去核时常采用_________________的方法。

（2）经过多次传代后，供体细胞中________________的稳定性会降低，因此，选材时必须关注传代次数。

（3）若获得的克隆动物与供体动物性状不完全相同，从遗传物质的角度分析其原因是_____________。

（4）与克隆羊“多莉（利）”培养成功一样，其他克隆动物的成功获得也证明了_______________。

细胞融合技术有着广泛应用。下图为细胞融合的简略过程，据图回答

(1)若图中a、b分别为骨髓瘤细胞和浆细胞，为了能充分发挥上述两种细胞各自的特点，经特殊处理，在促细胞融合因子的作用下，使两种细胞发生融合，形成图中的d细胞，d细胞的名称是_______，其特点是________________。体外培养d细胞应具备的气体环境是_______，必须加入的营养物质是_______。由d细胞产生的抗体与普通血清抗体相比较，具有                  ____________等特点。

(2)下列4项实验中，需保持细胞生理活性的有___________（填序号）。

①用高倍镜观察叶绿体和线粒体 

②观察洋葱鳞片叶内表皮细胞中DNA的分布  

③探究酵母菌细胞呼吸的方式  

④探究影响光合作用强度的环境因素

(3)用紫色洋葱外表皮细胞按下面步骤进行质壁分离实验。

①选择蔗糖作质壁分离试剂的原因是（    ）

A．糖是生物体的重要组成物质        B．糖是生命活动的主要能源物质

C．蔗糖分子能溶于水而透过细胞壁    D．蔗糖分子溶于水而不能透过半透膜

②如果用紫色洋葱鳞片叶外表皮进行上述实验步骤二中从盖玻片的一侧滴入的是加有伊红（植物细胞不吸收的红色染料）的0．3g/mL的蔗糖溶液，则在显微镜下观察到A、B处颜色分别是____________、__________。

编码蛋白甲的DNA序列(序列甲)由A、B、C、D、E五个片段组成，编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成，如图1所示。

回答下列问题：

(1)现要通过基因工程的方法获得蛋白乙，若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序列(TTCGCTTC—T……CAGGAAGGA)，则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋向乙，原因是____________________________________________________。

(2)某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D的过程中，在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等，还加入了序列甲作为__________，加入了________作为合成DNA的原料。

(3)现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白，要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用，某同学做了如下实验：将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组，其中三组分别加人等量的蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定期检测T淋巴细胞浓度，结果如图2。

①如图2可知：当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采用的方法是______。细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO₂浓度，CO₂的作用是______。

②仅根据图1、图2可知，上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺少________(填“A”“B”“C”“D”或“E”)片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果。

  (1)核移植的受体细胞一般选用____________________________________细胞。进行相关显微操作时，一般用微型吸管一并吸出细胞核和__________。

  (2)细胞在体外培养时，除培养液提供必需的营养条件、适宜的温度和pH、气体环境外，还需要有无菌、无毒环境，为保证无菌、无毒环境，在培养液中通常要加入__________。此外，还应定期__________。以便清除代谢废物。

  (3)现有一段人工合成的正常胰岛素基因的脱氧核苷酸序列，可利用PCR技术扩增正常胰岛素基因，该技术的原理是______________。将正常胰岛素基因导入胚胎干细胞通常采用________法。

  (4)“定向诱导”的本质是_____________________________________________________。

Ⅱ、下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计生产破伤风杆菌抗体的实验方案。请据图回答问题。

(1)该方案能达到预期效果吗？________。原因是_____________________。

(2)图中过程②中使用的特有诱导剂是______________。如果能成功获得理想的杂交瘤细胞，该细胞的特点是________________________（答两点） 。

(3)在制备破伤风杆菌抗体的过程中，进行了两次筛选，其目的不同，②是通过筛选获得__________，④是通过筛选获得___________________。

随着科学技术的发展,人们可以根据人类的需求来改造生物的性状,在许多领域取得了可喜的成果,图中是利用奶牛乳汁生产血清白蛋白的图解,据下图回答:

（1）在此工程过程中涉及的细胞水平的现代生物技术主要有________、_________。

（2）如果②的数量太少常用___________来扩增。在②进入③之前要构建基因表达载体，用到的工具酶有___________。

（3）能实现②进入③的常用方法是_____________。

（4）⑦是⑥生出的后代，而⑦的遗传性状和荷斯坦奶牛最相似,原因是______________________。要实现⑦批量生产血清白蛋白，则要求③的性染色体组成是_______。

Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图（图中数字序号表示的是相关过程）。请回答下列有关问题：

（1）过程②利用的技术是_____________________，过程③中涉及到了基因工程技术，其中作为受体细胞的是____________________。

（2）过程③中获取的目的基因是__________________，可以根据该基因的___________________设计引物，利用PCR技术扩增目的基因片段。按此方法和图示技术流程，完成基Rag₂基因缺失小鼠的基因治疗涉及的酶有_________________________________和耐高温的DNA聚合酶(Taq酶)等。

毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIFⅡ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关，获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。

（1）过程①是基因工程的核心，通过过程①构建的基因表达载体除了含有KIFⅡ基因外，还必须有启动子、     以及     等。

（2）过程②必需加入     酶，才能获得单个的成纤维细胞。

（3）在过程③中，为了获得更多的卵（母）细胞，需用   处理成年母绒山羊。

（4）在过程④进行之前，需对卵（母）细胞进行                处理。过程④称为              。

（5）过程⑤称为            ，进行该过程的最佳时期是              ，通过      技术可以实现同卵多胎。 过程⑤能够成功进行的生理基础是__________。