下图表示某科学家利用胚胎干细胞对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗的相关过程，据图回答下列问题：

（1）步骤①②利用的技术名称分别是                 、                     。图中造血干细胞中的遗传物质至少有         个来源。

（2）若利用PCR技术扩增目的基因并完成图示小鼠的基因治疗，涉及的酶有限制性核酸内切酶、DNA连接酶、耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）和                  等。

（3）下图所示的一个质粒分子经EcoRⅠ切割前后，分别含有      、          个游离的磷酸基团。由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，故利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从下图A、B、C、D四种单链DNA片段中选取       作为引物。一个目的基因通过PCR技术扩增第n次时，需要        个引物。

（4）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发       色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否转录，可以采用                        的技术。

随着妊娠年龄的增加，21一三体的发病风险在不断增加．需要进行产前诊断来预防患病孩子的产生。常用的方法有：

  (1)唐氏筛查：抽取孕妇血液化验，检测血清中的甲型胎儿蛋白、绒毛膜促性腺激素等指标。检测这些物质可用__________技术，以细胞工程技术生产的、纯度高的_____________为试剂进行检测，筛查出的高危孕妇还需要进一步检查鉴定。

  (2)羊水检查：胎儿的某些细胞会脱落在羊水中，通过羊水穿刺，可以得到胎儿的细胞。将这些细胞通过___________技术以扩大细胞的数量，选择______的细胞进行染色体核型分析，了解胎儿细胞染色体的结构和___________是否正常。

  (3)无创基因检测：在孕妇的血液中存在胎儿游离DNA片段，可以对21号染色体上的特有基因DSCR₃和非21号染色体上的基因GAPDH(做参照)进行实时荧光定量PCR扩增，以测定DSCR₃基因和GAPDH基因的含量，计算2种基因剂量的比值。如：

  要利用胎儿游离的DNA片段扩增出相应的基因，关键是_________的设计。从上述表格看，正常人与21-三体患者的比值有差异，其主要原因是____________利用该技术筛查21-三体的胎儿是否可靠，请说明理由：_____________。

1975年，英国科学家米尔斯坦和德国科学家科勒设计了一个极富创造性的实验方案：把一种B淋巴细胞与能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞进行融合，得到的融合细胞就能大量增殖，产生足够数量的特定抗体。请回答下列问题：

（1）从动物体内取出的组织块，需用________处理一段时间，这样组织就会分散成单个细胞。当细胞________（填“原代”或“传代”）培养至10～50代左右时，部分细胞的细胞核型可能发生变化，从而获得骨髓瘤细胞。在动物细胞培养基中加入血清、血浆等天然成分的原因是________。

（2）制备单克隆抗体时，先用特定的选择性培养基进行筛选，获得________细胞,然后对上述细胞进行抗体检测，选取________的细胞克隆化培养；最终获得单克隆抗体。

（3）有人提出用核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，其过程是取经特定抗原刺激的B淋巴细胞的细胞核，移植到去核的________细胞中，构成重组细胞。此方法________（填“能”或“不能”）获得既能分泌抗体，又能无限增殖的细胞，原因是________。

ES细胞(胚胎干细胞）在基础生物学、畜牧学和医学上有十分重要的应用价值。请回答下列问题：

（1）ES细胞在体外培养时，可以增殖而不发生分化。在ES细胞培养液中加入分化诱导因子___________(只填一种即可)时，就可以诱导ES细胞向不同类型的组织细胞分化。

（2）将人的ES细胞进行细胞培养时，要用__________酶分散细胞，制成细胞悬液，放入培养瓶中进行培养。使用合成培养基进行细胞培养时，通常需要加入_____________等天然成分。在细胞培养过程中，ES细胞主要通过_______________的方式进行细胞增殖。

（3）将来源于两种不同哺乳动物的两个ES细胞进行细胞融合，常用的生物诱导因素是____________，经融合后所形成的细胞被称为__________。动物细胞融合技术的意义在于__________________。

完成下列相关填空

（一）某工厂为了生产耐高温植酸酶饲料添加剂，开展了产该酶菌株的筛选、酶的固定化及其特性分析研究，其流程如下图所示。

（1）土壤悬液先经80℃处理15分钟，其目的是筛选出             。

（2）在无菌条件下，将经过处理的土壤悬液进行            ，然后涂布于含有植酸钠的固体培养基上。培养后观察到单菌落，其周围出现透明水解圈，圈的直径大小与           强弱相关。

（3）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养，结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中         的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高                的利用率。

（4）利用物理或化学方法将植酸酶固定在          的介质上称为固定化酶。实验过程涉及两次蒸馏水洗涤反应柱的操作，其中第一次洗涤的目的是除去             。

（二）下图为绵羊多莉克隆过程，请回答有关问题。

（5）步骤1中若要获得较多数量的卵细胞，通常对母羊注射相关激素使其超数排卵。步骤2可通过降低           浓度，实现对乳腺细胞的营养限制性培养，可以得到大量的          期细胞，从而实现细胞分裂同步化。

（6）步骤3中科研人员采用         技术进行细胞融合，步骤4通过胚胎体外培养获得胚胎，待发育至              胚胎时进行移植，通常移植至代孕母羊的          部位。

（7）若要将目的基因导入乳腺细胞中，在扩增目的基因时，除利用PCR技术外，还可将目的基因所在的重组载体导入大肠杆菌中，利用大肠杆菌  ▲ 使其扩增。

（8）为获得大量的上述克隆羊，可用胚胎成纤维细胞进行体细胞克隆。因为胚胎成纤维细胞可进行           培养，理论上可获得无限只克隆羊。

近年来，我国死于狂犬病的人数有上升趋势。狂犬病病毒的核酸是RNA，机体感染病毒后产生的特异性IgG抗体，能消灭狂犬病病毒，这是接触狂犬病病毒后及时注射疫苗和特异抗体的重要依据。我国利用地鼠的肾细胞培养狂犬病疫苗，已取得良好效果。

请根据上述材料，回答下列问题：

(1)巴斯德利用固定毒株制成减毒活疫苗，预防狂犬病，制成减毒活疫苗需要用________培养。

(2)特异性抗体获取可用单克隆抗体制备。在制备单克隆抗体的过程中，应用的动物细胞工程技术是______________________________________________。

①图中A过程从小鼠的脾脏中取得的“小鼠细胞”是________细胞，该细胞能够产生________。从小鼠体内提取分离该细胞之前，给小鼠注射的特定的物质是________。

②图中B过程是细胞融合，该过程需要用灭活的________、聚乙二醇或电激等诱导。

③特异性抗体获取的方法也可以采用向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。与这种方法制备的抗体相比，单克隆抗体具有________________________________________等优点。

(4)动物细胞体外培养需要满足的环境条件有_________________________。

(5)单克隆抗体的制备还有哪些用途？_______________________________________。

（1）PCR技术利用了_________原理解决了打开DNA双链的问题，从一种细菌中分离到_______，解决了DNA聚合酶失活的新问题。

（2）利用PCR技术从基因文库中提取目的基因时，首先要根据目的基因的核苷酸序列设计并合成出2种引物。在第_________轮开始出现目的基因片段。

（3）试管动物技术正广泛应用于畜牧业生产，此技术中从母牛体内获得的卵母细胞需要到____________________(时期)才能与精子结合。在体外培养受精卵时，需要满足以下条件：_______________、营养、温度和pH以及气体环境。

（4）将外源基因导入小鼠受精卵后，外源基因会随机插入到小鼠受精卵DNA中。这种受精卵有的可发育成转基因小鼠，有的却死亡。请分析:因外源基因的插入导致受精卵死亡的最可能原因_________________。

癌症是一种由于基因突变的细胞发生异常大量累积而形成的。癌症基因疗法几乎没有耐药性，因此即使患者在化疗和放疗过程免疫力低下的情况下，也同样可以接受基因治疗。研究人员设计了三种治疗方案：

(1)方案一：研究人员从病人体内提取“T细胞”，利用______________技术在体外完成基因的转移，然后将成功转移的细胞进行______________增加细胞的数量，最后将这些改变了的“T细胞”成功移植回到患者体内，这些改变了的“T细胞”识别攻击癌细胞。

(2)方案二：研究人员利用修饰的腺病毒5号作为______________，将Endostatin基因和Interferon基因等有治疗效果的基因导入癌细胞内。对腺病毒进行修饰的目的是使病毒______________，但能够复制增加相关基因的数量。

(3)方案三：新型基因疗法JG-1是结合CDC6shRNA活性基因和癌抑制基因pl6这两种基因的强有力的疗法。“CDC6shRNA活性基因”的使用原理着眼于癌细胞具有______________的特性，它能消灭在癌细胞里存在的一种被称为CDC6的DNA的复制因子。然后通过pl6来修复抑癌基因Rb路径上的起效机制，并促使癌细胞在刚开始增殖阶段即停止增殖。

(4)对癌细胞进行体外培养时，可以形成_____________________________________________层细胞，这是由于癌细胞的细胞膜表面的糖蛋白减少的原因，使癌细胞培养时不具有原代培养的____________和______________的特点。

科学家从哺乳动物早期胚胎中分离出一类胚胎干细胞(ES细胞)，并进一步将ES细胞诱导分化为某些组织细胞。回答下列问题：

(1)胚胎干细胞(ES细胞)可由囊胚的__________________________分离培养获得，其可产生多种多样的细胞的根本原因是__________________。

(2)获得的动物细胞进行培养时，一般需控制在10代以内，原因是__________________________。

(3)离体培养胚胎干细胞时，一般需要在合成培养基中加入____________等天然成分，培养时所需的气体主要有O₂和CO₂，CO₂的主要作用是______________。

(4)研究发现，细胞因子能够调控某动物干细胞分化。放线菌素D能通过阻碍RNA聚合酶的功能进而抑制细胞因子的调控，由此推断该抑制过程发生在____________(填"复制""转录"或"翻译")水平。

(5)研究还发现，胚胎干细胞可以诱导分化为造血干细胞等各种细胞，这体现了胚胎干细胞具有__________________的特点，临床上可用诱导干细胞定向分化的方法修补损伤或衰老的组织器官，从而解决______________问题。